The invention relates to an immune colloidal gold detection card for sarafloxacin and a preparation method thereof, and relates to the technical field of veterinary drug residue detection for animal food. The test strip in the shell of the detection card of the invention is composed of PVC adhesive board, sample pad, colloidal gold bonding pad, coating film and water absorbent pad; the colloidal gold film is a glass cellulose membrane containing monoclonal antibody to sarafloxacin, and the coating film is a nitrocellulose membrane, on which is provided with T-line and C-line, and the T-line is coated with protein coupling compound of sarafloxacin. The line was coated with Goat anti mouse IgG antibody. The invention is effective for rapid detection of sarfloxacin, convenient, fast and accurate.
【技术实现步骤摘要】
沙拉沙星的免疫胶体金检测卡及其制备方法
本专利技术涉及谷物食品中农药残留检测
,特别是涉及沙拉沙星的免疫胶体金检测卡及其制备方法。
技术介绍
沙拉沙星是氟喹诺酮类抗生素,具有下列特性:由于独特的化学结构,使其成为兽医临床药物中十分重要的抗生素。沙拉沙星对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和支原体类病原菌均具有广谱抗菌活性,在一定的浓度下对细菌支原体也具有杀菌作用,还能杀死对抗生素具有抗药力的细菌,例如抗p一乳酸菌素、氨基糖昔等。沙拉沙星因其具有独特的作用,自80年代开始就被广泛的应用于动物和鱼虾类的疾病的预防和治疗。但最近的研究发现,凡使用过沙拉沙星的动物,在一定时期内其产品都有残留,因其具有神经毒性和肾脏毒性,所以在动物食品中残留会对人类健康造成威胁和影响,欧美国家及我国均要求对其限量使用。2002年12月我国农业部公告第235号文规定在所有食品动物的肌肉、脂肪中最高残留限量为100µg/kg,在所有食品动物的肝、肾中最高残留限量为200µg/kg。因此,沙拉沙星己经列为兽药残留监控的重点。检测沙拉沙星残留量的化学方法主要有薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气一质联机(GC/MS)、液一质联机(HPLC/MS)、毛细管电泳(CE)等,由于复杂的仪器设各和繁琐的过程,不适合现场监控和大量样本筛查。免疫分析技术以其抗原抗体反应的高度专一性,以及测定方法简单、快速、灵敏度高、费用低和适于现场大批量样品筛选等优点,在农兽药残留分析中展示了广泛的应用前景。随着农药残留免疫学检测技术不断被完善和商品化,免疫学检测技术会成为食品农兽药 ...
【技术保护点】
1.沙拉沙星胶体金检测卡,其特征在于按照下述步骤制备得到:(1)胶体金溶液制备:取1 L 三角烧瓶1个,加入超纯水495 mL,而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O)5 mL,配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液,加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5‑7 mL,继续搅拌加热,当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时,维持5 min后停止加热,补水至原体积,冷却至室温,2‑8℃保存备用;(2)抗体的预处理:将要标记的沙拉沙星抗体在1000 r/min,4℃条件下,离心20 min,取上清,用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/mL;或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml,过0.22 µm滤膜;(3)胶体金标记物的制备:取步骤(1)中的胶体金溶液40 mL,用0.25 mol/L K2CO3调节胶体金溶液pH至 8.5,电磁搅拌器250 r/min搅拌,逐滴加入4 mL 含0.3 mg 抗体蛋白的蛋白溶液,反应10 min;逐滴加入4 mL 10% BSA,继续搅拌反应10 min;金标抗体溶液常温1500 r/min ...
【技术特征摘要】
1.沙拉沙星胶体金检测卡,其特征在于按照下述步骤制备得到:(1)胶体金溶液制备:取1L三角烧瓶1个,加入超纯水495mL,而后加入1%氯金酸HAuCl4·3H2O)5mL,配制成500mL0.01%氯金酸水溶液,加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na3C6H5O7·2H2O溶液5-7mL,继续搅拌加热,当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时,维持5min后停止加热,补水至原体积,冷却至室温,2-8℃保存备用;(2)抗体的预处理:将要标记的沙拉沙星抗体在1000r/min,4℃条件下,离心20min,取上清,用0.01mol/LPBS稀释成1mg/mL;或者用0.01mol/LPBS稀释成1mg/ml,过0.22µm滤膜;(3)胶体金标记物的制备:取步骤(1)中的胶体金溶液40mL,用0.25mol/LK2CO3调节胶体金溶液pH至8.5,电磁搅拌器250r/min搅拌,逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液,反应10min;逐滴加入4mL10%BSA,继续搅拌反应10min;金标抗体溶液常温1500r/min离心10min,弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀;红色上清溶液4℃,12000r/min离心20min,弃上清...
【专利技术属性】
技术研发人员:洪霞,杜霞,刘静,
申请(专利权)人:镇江华维检测技术有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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