一种吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金快速检测试装置及其制备方法和用途制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金快速检测试装置及其制备方法和用途。该装置包括吡唑酮类解热镇痛药物胶体金试纸条及反应杯两部分。其中吡唑酮类解热镇痛药物胶体金试纸条包括：底板及底板上沿同一方向依次铺设的样品垫，硝酸纤维素膜及吸水纸，所述硝酸纤维素膜上标记有检测线T线及质控线C线。反应杯中包括吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金标记抗体。本发明专利技术所述胶体金检测装置能够有效检测吡唑酮类解热镇痛药物(如安乃近、氨基比林、安替比林、异丙安替比林、4‑甲氨基安替比林等)，具有特异性好、灵敏度高、操作简便、可实现现场快速检测等优点，能更好的满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要。

【技术实现步骤摘要】
一种吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金快速检测试装置及其制备方法和用途
本专利技术专利公开一种胶体金检测装置及其制备方法，旨在提供一种快速简便，灵敏度高，可同时检测吡唑酮类解热镇痛药物(如安乃近、氨基比林、安替比林、异丙安替比林、4-甲氨基安替比林等)的快筛试剂盒，适用于健康产品中非法添加吡唑酮类解热镇痛药物的现场测定，属于生物检测

技术介绍
近年来，中成药、保健食品及食品等健康产品中非法添加现象层出不穷，其中，镇痛类健康产品已成为非法添加的重灾区，一直是分析领域的研究热点[1-3]。由于解热镇痛抗炎药物是一类具有抗炎、抗风湿和解热镇痛等作用的药物，具有起效迅速、疗效显著的特点，该类药物已成为镇痛类健康产品中非法添加的主要成分[4-8]。申请人对标称具有解热镇痛功效的中成药、保健食品、食品中非法添加化学药物开展风险监测，发现存在非法添加吡唑酮类解热镇痛药物的情况。吡唑酮类解热镇痛药物具有解热作用显著、镇痛效果强、价廉易得等特点[9]，但其不良反应较多，如安乃近可引起过敏性皮疹、药物热，严重者会出现剥脱性皮炎、再生障碍性贫血[10]；氨基比林可引起粒细胞减少或再生障碍性贫血，产生致癌物亚硝胺[11,12]。因此，凉茶中非法添加吡唑酮类解热镇痛药物存在较大的食品安全隐患。目前，关于健康产品中非法添加吡唑酮类解热镇痛药物的研究较少，吡唑酮类解热镇痛药的检验方法主要有高效液相色谱法[13]、液相色谱串联质谱法[14]、薄层色谱法[15]、分光光度法[16]、毛细管色谱法[17]等。以上大型仪器方法操作繁琐、检验时间长，不满足现场快速检测的需求。与之相比，本专利技术专利应用免疫学测定方法，具有特异性好、灵敏度高、操作简便、可实现现场快速检测等优点，能更好的满足监管部门、检测机构现场监督执法的需要。[1]吴晓敏，史大军，王明娟，等.止痛止痒类中成药中非法添加化学药物的快速鉴定方法.中成药,2014,36(10):2095-2100[2]王震红，杨永刚，刘东辉，等.2011年辽宁省中成药及保健食品中非法添加化学药品检验结果分析.中国药事,2012,26(9):929-930[3]蔡霞，雷毅.我国膏贴类医疗器械产品监管工作存在的问题及对策.中国药房,2013,24(44):4222-4224[4]巩丽萍，田晨颖，郭常川，等.超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查及定量分析中成药或保健品中非法添加的24种消炎止痛类化学成分.中国药学杂志,2015,50(24):2154-2159[5]吴小红，李焕德，吴高芬，等.HPLC-DAD法同时测定部分中成药及保健品中添加的9种解热镇痛药物.药物分析杂志,2010,30(10):1865-1868[6]汪元符，抗炎抗风湿功效中成药中非法添加非甾体抗炎药及激素类成分的检测.中国执业药师,2015,12(11):19-26[7]李欣荣,陈安珍,杨钊.UPLC-MS/MS检测消肿止痛类中成药中违禁添加的双氯芬酸钠和氨基比林.药物分析杂志,2010,30(7):1294-1297[8]温家欣，陈林，赖宇红，等.高效液相色谱法同时快速测定凉茶中11种非法添加化学药物.分析测试学报,2016,35(3):285-291[9]陈婉霞等.解热镇痛药用药分析.临床合理用药，2011,4(2A):80[10]侯春霞等.浅谈解热镇痛药的合理应用.基层医学论坛，2012,16(29):3909-3010[11]洪立湘等.如何正确应用解热镇痛药.中国社区医师，2004,6(10):6[12]王静.浅谈解热镇痛药的合理使用.中国现代药物应用，2010,4(5):140[13]郝利华等.HPLC-PDA法同时测定黄芪多糖注射液中非法添加的四种解热镇痛类药物.中国兽药杂志，2012,46(8):28-31[14]潘炜等.LC-MS/MS法测定中成药制剂中23个非甾体抗炎药.药物分析杂志，2012,32(2):261-266[15]郝利华等.薄层色谱法快速筛选黄芪多糖注射液中非法添加的化学物质.中国兽药杂志，2012,46(5):29-30[16]张克良等.三波长分光光度法测定脑清片中氨基比林和咖啡因含量.中国药品标准，2001,2(2):35-36[17]赵艳芳等.微乳液毛细管电动色谱快速分析解热镇痛药中的有效成分.分析实验室，2012,31(4):90-93
技术实现思路
为了克服目前技术不能现场快速检测的问题，本专利技术的目的在于提供一种使用方便，快速简便，灵敏度和准确度高，可现场测定吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金检测装置及其制备方法与用途。本专利技术的目的在于提供一种吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金快速检测试装置及其制备方法和用途。本专利技术所采取的技术方案是：一种吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金检测装置，该装置包括试纸条和反应杯两部分：其中试纸条包括底板，沿同一方向依次铺设的样品垫，硝酸纤维素膜和吸水纸，硝酸纤维素膜上含有检测线和质控线；反应杯内含有胶体金标记的吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体。进一步的，所述检测线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的吡唑酮类解热镇痛药物偶联抗原。进一步的，所述质控线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体。上述吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金检测装置的制备方法，包括以下步骤：制备硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜上形成检测线和质控线；所述检测线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的吡唑酮类解热镇痛药物偶联抗原在硝酸纤维素膜上进行线状点样制得；所述质控线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体在硝酸纤维素膜上进行线状点样制得；组装试纸条：在底板上沿同一方向依次搭接粘贴样品垫，硝酸纤维素膜及吸水纸；制备反应杯：反应杯中含有胶体金标记吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体。进一步的，所述胶体金标记吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体的制备方法为：调节胶体金溶液pH值至7～9，边搅拌边滴加吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体，0.5～1.5h后加入抗体量相当的PEG，反应20～35min后加入抗体量相当的BSA，继续搅拌20～35min，离心获得均一性胶体金标记吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体沉淀，再加PNPB重悬。进一步的，所述胶体金的制备方法为：取0.5～1.5％氯金酸溶液0.5～1.5ml，加90～100ml超纯水制成氯金酸溶液，加热沸腾后，取0.5～2％柠檬酸三钠1.0～2ml迅速加入煮沸的氯金酸溶液中，继续加热至溶液由淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色，颜色稳定后继续加热4～6min，室温冷却，补充失水至原体积。进一步的，所述吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体的制备方法为：使用吡唑酮类解热镇痛药物免疫抗原免疫小鼠，加强免疫后，采血测效价，待血清效价不再上升，用1.8～2.2倍剂量的抗原不加佐剂免疫小鼠，3～4天后脱颈致死小鼠，在无菌条件下制备脾细胞，与生长旺盛的小鼠骨髓瘤细胞按7～9:1的比例混合，加入无血清IPMI1640培养基，离心弃上清，将细胞团轻轻振松，置于36～38℃水浴中；往细胞培养液中滴入0.025～0.05倍体积的45～55％v/vPEG-4000，同时轻轻搅动底部沉淀，静置0.8～1.2min后，25～35s内沿管壁缓慢加入0.025～0.05倍体积的无血清本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金检测装置，其特征在于，该装置包括试纸条和反应杯两部分：其中试纸条包括底板，沿同一方向依次铺设的样品垫，硝酸纤维素膜和吸水纸，硝酸纤维素膜上含有检测线和质控线；反应杯内含有胶体金标记的吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体；所述检测线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的吡唑酮类解热镇痛药物偶联抗原；所述质控线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体。

【技术特征摘要】
1.一种吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金检测装置，其特征在于，该装置包括试纸条和反应杯两部分：其中试纸条包括底板，沿同一方向依次铺设的样品垫，硝酸纤维素膜和吸水纸，硝酸纤维素膜上含有检测线和质控线；反应杯内含有胶体金标记的吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体；所述检测线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的吡唑酮类解热镇痛药物偶联抗原；所述质控线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体。2.权利要求1所述吡唑酮类解热镇痛药物的胶体金检测装置的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜上形成检测线和质控线；所述检测线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的吡唑酮类解热镇痛药物偶联抗原在硝酸纤维素膜上进行线状点样制得；所述质控线为能与吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体在硝酸纤维素膜上进行线状点样制得；组装试纸条：在底板上沿同一方向依次搭接粘贴样品垫，硝酸纤维素膜及吸水纸；制备反应杯：反应杯中含有胶体金标记吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述胶体金标记吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体的制备方法为：调节胶体金溶液pH值至7～9，边搅拌边滴加吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体，0.5～1.5h后加入抗体量相当的PEG，反应20～35min后加入抗体量相当的BSA，继续搅拌20～35min，离心获得均一性胶体金标记吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体沉淀，再加PNPB重悬。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述胶体金的制备方法为：取0.5～1.5％氯金酸溶液0.5～1.5ml，加90～100ml超纯水制成氯金酸溶液，加热沸腾后，取0.5～2％柠檬酸三钠1.0～2ml迅速加入煮沸的氯金酸溶液中，继续加热至溶液由淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色，颜色稳定后继续加热4～6min，室温冷却，补充失水至原体积。5.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述吡唑酮类解热镇痛药物单克隆抗体的制备方法为：使用吡唑酮类解热镇痛药物免疫抗原免疫小鼠，加强免疫后，采血测效价，待血清效价不再上升，用1.8～2.2倍剂量的抗原不加佐剂免疫小鼠，3～4天后脱颈致死小鼠，在无菌条件下制备脾细胞，与生长旺盛的小鼠骨髓瘤细胞按7～9:1的比例混合，加入无血清IPMI1640培养基，离心弃上清，将细胞团轻轻振松，置于36～38℃水浴中；往细胞培养液中滴入0.025～0.05倍体积的45～55％v/vPEG-4000，同时轻轻搅动底部沉淀，静置0.8～1.2min后，25～35s内沿管壁缓慢加入0.025～0.05倍体积的无血清细胞培养基，然后再在25～35s内加入0.05～0.1倍体积的无血清细胞培养基，然后快速加入0.7～1.2倍体积的无血清细胞培养基终止融合过程，离心弃上清，用HAT选择性培养基重悬后加到已铺有饲养细胞的细胞培养板中，36.8～37.3℃、体积分数4.8～5.2％的CO2条件下培养；6.5～7.5天后换成HT培养液，杂交细胞数量达到300个以上时，筛选...

【专利技术属性】
技术研发人员：温家欣，王炳志，严义勇，何嘉雯，刘丛丛，
申请(专利权)人：广东省药品检验所广东省药品质量研究所，广东省口岸药品检验所，深圳市易瑞生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44