本发明专利技术公开了人心房利钠肽ANP在制备癌症治疗药物中的应用，属于生物医学领域。本发明专利技术通过研究发现人心房利钠肽ANP(SLRRSSCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRY)具有抑制癌细胞生长和迁移的作用，而且对人体的正常细胞基本无影响，因此，人心房利钠肽ANP可用于制备抑制癌细胞生长的药物、制备抑制癌细胞迁移的药物，以及制备癌症治疗药物。将人心房利钠肽ANP用于制备癌症治疗药物无毒副作用，具有很好的应用前景。
Application of human atrial natriuretic peptide ANP in the preparation of cancer treatment drugs
The invention discloses the application of human atrial natriuretic peptide ANP in the preparation of cancer treatment drugs, belonging to the field of biomedicine. The present invention has found that human atrial natriuretic peptide ANP (SLRRSSCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRY) can inhibit the growth and migration of cancer cells, and has little effect on normal human cells. Therefore, human atrial natriuretic peptide ANP can be used to prepare drugs to inhibit the growth of cancer cells, prepare drugs to inhibit the migration of cancer cells, and Preparation of cancer treatment drugs. The application of human atrial natriuretic peptide ANP in the preparation of cancer drugs has a good prospect.
【技术实现步骤摘要】
人心房利钠肽ANP在制备癌症治疗药物中的应用
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及人心房利钠肽ANP在制备癌症治疗药物中的应用。
技术介绍
目前临床上使用的抗肿瘤化学治疗药物均有不同程度的毒副作用，有些严重的毒副反应是限制药物剂量或使用的直接原因。这些药物在杀死肿瘤细胞的同时对正常组织杀死能力也比较强，尤其是人体中生长发育比较旺盛的血液系统以及淋巴组织等，从而造成患者表现出严重的副作用，并引起人体免疫系统发生改变，促进了癌症的发展，影响患者化疗预后。因此，研发具有低毒性、高效性和高特异性的抗癌药物成为热点。目前人们已从许多生物中分离出具有抗癌活性的小分子肽或环肽，而且安全有效。在人体中α-人心房利钠肽(α-humanartrialnatriureticpeptide，α-hANP，亦简称ANP)由心房肌细胞合成并释放，ANP具有利尿、利钠、舒张血管平滑肌、调控细胞增殖，有极佳的水、钠、血压维持效果，但是在肿瘤作用中未见使用。
技术实现思路
鉴于目前抗肿瘤化疗药物的存在的缺点与不足，本专利技术的目的在于提供一种人心房利钠肽ANP在制备癌症治疗药物中的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：本专利技术通过研究发现人心房利钠肽ANP具有抑制癌细胞生长和迁移的作用，而且对人体的正常细胞基本无影响。基于此，本专利技术提供如下应用：人心房利钠肽ANP在制备抑制癌细胞生长的药物中的应用。人心房利钠肽ANP在制备抑制癌细胞迁移的药物中的应用。人心房利钠肽ANP在制备癌症治疗药物中的应用。所述的人心房利钠肽ANP是一种具有环状结构的肽类激素，由28个氨基酸组成的，其氨基酸序列为：SLRRSSCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRY，其中7号位的半胱氨酸和23号位的半胱氨酸形成二硫键，相对分子量为3080.5Da。所述的癌细胞包括胶质瘤细胞、舌鳞癌细胞、肝癌细胞。本专利技术具有如下优点和有益效果：人心房利钠肽ANP对人正常细胞无不利影响，其能够抑制癌细胞增殖和癌细胞迁移，可使癌细胞线粒体膜电位的降低诱导癌细胞凋亡。将人心房利钠肽ANP用于制备癌症治疗药物无毒副作用，具有很好的应用前景。附图说明图1是不同浓度ANP对LN-229细胞处理24h的存活率结果图。图2是LN229细胞Hoechst33342细胞核染色分析图(400×)。图3是LN229细胞DAPI细胞核染色分析图(400×)。图4是LN-229细胞经PI染色流式检测细胞周期图；A是阴性对照组CK，B是0.05μMANP处理组，C是1μMANP处理组，D是5μMANP处理组。图5是ANP对LN229细胞不同时间段的迁移图(100×)。图6是ANP对LN229细胞迁移的影响结果图。图7是JC-1法检测LN229细胞线粒体膜电位图(400×)。图8是AO/EB法检测LN229细胞凋亡图(400×)。图9是AnnexinV/PI法检测LN229细胞凋亡图；A是阴性对照组CK，B是2mM过氧化氢处理组，C是0.05μMANP处理组，D是5μMANP处理组。图10是不同浓度人舌鳞癌细胞ANP对SCC-9处理的影响。图11是人舌鳞癌细胞SCC-9经PI染色流式检测细胞周期图；A是阴性对照组CK，B是5μMANP处理组，C是10μMANP处理组。图12是不同浓度ANP对人肝癌细胞HepG2处理24h的影响结果图。具体实施方式本专利技术具体实施方式利用ANP多肽，将其添加到细胞培养基中，使得癌细胞增殖受到抑制，而且抑制癌细胞的迁移，导致其线粒体膜电位的降低以及诱导凋亡。下面结合实施例对本专利技术做进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例11.细胞模型1.1材料与方法1.1.1材料1.1.1.1细胞株：人胶质瘤细胞LN-229，该细胞株为已经商品化的生物材料。1.1.1.2试剂：DMEM粉末(购于Gibco公司，美国)，胎牛血清(购于生工生物工程(上海)股份有限公司，中国)。1.1.1.3人心房利钠肽ANP由杭州中肽生化有限公司合成。其氨基酸序列为：SLRRSSCFGGRMDRIGAQSGLGCNSFRY(C7&C23bridge)；分子量为：3080.5Da；纯度为：95％。1.1.2方法和结果1.1.2.1ANP配制取适量ddH2O、微量离心管和枪头进行高压灭菌。将ANP粉剂用无菌水在生物安全柜中配制成20μmol/L和200μmol/L两种浓度备用。为了避免反复冻融造成多肽的降解，分别将这两种浓度的ANP进行分装，做好标记，保存于-20℃冰箱。1.1.2.2人胶质瘤细胞LN-229的培养与处理将人胶质瘤细胞LN-229用含有10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基培养，根据不同检测要求加入不同浓度的ANP，阴性对照组(controlcheck；CK)则不加ANP，培养条件均为37℃、5％CO2的恒温培养箱(以下均简称培养箱)。1.1.2.3LN-229细胞的增殖检测取对数生长期的LN-229细胞用胰蛋白酶消化后离心收集，然后进行细胞计数，最终将细胞浓度调整至5×104/mL。接种到96孔板中，添加细胞悬液，每孔加入100μL，这样待测细胞的密度为5000个/孔(边缘孔用无菌PBS或无菌水填充)，轻轻拍打96孔板使每孔细胞分布均匀。置于培养箱培养过夜。用移液枪小心吸取每孔的培养基，弃掉，然后加入含有ANP的培养基，使其终浓度分别为0.05、0.5、1、5和10μM，阴性对照为不加ANP的培养基，置于培养箱培养24h。药物处理24h后，倒置显微镜观察药物的作用。每孔加入15-20μL的0.5％MTT溶液，继续培养4h。MTT加入培养4h后，甲臜结晶可充分形成。用移液枪小心弃去上清。每孔加入150μL二甲基亚砜，酶联免疫检测仪低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在570nm处测量各孔的吸光值。按下式计算存活率与抑制率：存活率(％)＝实验组平均OD值/阴性对照平均OD值×100％；抑制率(％)＝1－存活率。从图1中数据可以看出ANP对LN-229在24h的处理下有抑制作用，在浓度为0.5μM～10μM之间，对LN-229的存活率对其浓度呈依赖性，即浓度越高存活率越低，在浓度为10μM时处理24h后，存活率为68.59％±2.17％；但是在较低浓度0.05μM时亦有较好的抑制效果，处理24h后存活率为85.4％±3.57％。1.1.2.4LN-229细胞核形态染色前一天下午将LN-229细胞计数，细胞数量调整至5×104/mL左右。将细胞悬液制备好后，用移液枪轻轻混匀，向96孔板中，添加细胞悬液，每孔加入100μL，这样待测细胞的密度为5000个/孔(边缘孔用无菌PBS或无菌水填充)，轻轻拍打96孔板使每孔细胞分布均匀。置于培养箱培养过夜。用移液枪小心吸取每孔的培养基，弃掉，再加入含有浓度为0.05μMANP的培养基，阴性对照组不加ANP，置于培养箱培养24h。使用前先根据用量，将Hoechst33342储存溶液(2.5mg/mL)或DAPI储存溶液(1mg/mL)配制成含有5μg/mLHoechst33342或2μg/mLDAPI的PBS染色工作液，其中染色工作液添加终浓度为0.25％的TritonX-10本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.人心房利钠肽ANP在制备抑制癌细胞生长的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.人心房利钠肽ANP在制备抑制癌细胞生长的药物中的应用。2.人心房利钠肽ANP在制备抑制癌细胞迁移的药物中的应用。3.人心房利钠肽ANP在制备癌症治疗药物中的应用。4.根据权利要求1-3任一项所述的应...
【专利技术属性】
技术研发人员：张军林，赖晓晶，解举民，程烨，岳硕豪，
申请(专利权)人：湖北汉元基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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