干细胞培养方法技术

一种干细胞培养方法，其中，一第二骨髓抽吸抹片23为一中间层，且萃取自分离为多层的一第一骨髓抽吸抹片19；以一培养液培养该第二骨髓抽吸抹片23，且第一干细胞固定于一第一培养容器的一底表面；当该第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积达一第一目标比，自该第一培养容器萃取该第一干细胞；上层第二干细胞萃取自分层的第一干细胞，且以一培养液培养该第二干细胞，该第二干细胞固定于一第二培养容器的一底表面；及当该第二干细胞的总表面积相对于该第二培养容器的底表面积达一第二目标比，自该第二培养容器萃取该第二干细胞。

Stem cell culture method

A stem cell culture method in which a second bone marrow aspiration smear 23 is an intermediate layer and is extracted from a first bone marrow aspiration smear 19 separated into a multilayer; the second bone marrow aspiration smear 23 is cultured in a culture medium, and the first stem cells are fixed on the first surface of a first culture container; when the first stem cell is the general table, The first stem cells were extracted from the first culture container with respect to the surface area of the first culture container. The upper second stem cells were extracted from the first stem cells stratified and cultured in one culture medium for the second stem cells. The second stem cells were fixed on the first surface of the second culture container; and When the total surface area of the second stem cells was compared with the base surface area of the second culture container, the second stem cells were extracted from the second culture container.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】干细胞培养方法
本专利技术关于一种使用收集自一捐赠者的一骨髓抽吸抹片(bonemarrowaspirate)，以培养干细胞的干细胞培养方法。
技术介绍
现有的干细胞培养方法具有用以培养干细胞的一培养基及通过照射低输出二氧化碳气体雷射以活化该干细胞的照射光，该低输出二氧化碳气体雷射的照射能量大于0及10焦耳/平方厘米(joule/cm2)或以下，雷射功率密度为0.1瓦特/平方厘米(W/cm2)或以下，其被散焦至一照射能量为0.1或以上及2.5焦耳/平方厘米或以下以照射整个培养基，其中，通过照射用以活化该干细胞的低输出雷射以及后续的预订休息期间(restperiod)，以活化该干细胞而能够增殖至一目标数量。依据此干细胞培养方法，存在于收集自人体或非人体(动物)的组织或细胞中的干细胞被活化且可以被显著地增殖。
技术实现思路
本专利技术所解决的问题由于收集自一捐赠者的组织或细胞存在各种干细胞，纵使培养存在于该组织或细胞的干细胞，也会增殖出各种干细胞，而无法只培养出特定种类的干细胞。该干细胞被应用于心血管疾病、中枢神经系统疾病等各种疾病的治疗(treatment)、再生医学(regenerativemedicine)或非治疗性的应用，然而，相比于该干细胞只包括特定种类的干细胞的状况，培养出的各种干细胞对于各种疾病的治疗效果或再生医学中的再生效果有限，对于要完全治愈(completelycure)各种疾病的可能性低、对于要再生各种组织或各种器官的可能性也不佳。一种如上述的干细胞培养方法已经公开于专利文献1(日本公开第2015-186465A号专利申请)，其培养出各种干细胞，而无法只培养出特定种类的干细胞。本专利技术的目的是提供一种干细胞培养方法，其可以防止各种干细胞的增殖，且可以只培养出特定种类的干细胞。本专利技术的另一目的是提供一种干细胞培养方法，其所培养出的干细胞对于各种疾病具有良好治疗效果、或对于再生医学具有良好再生效果、对于要完全治愈各种疾病及要再生各种组织或各种器官具有高度可能性。解决问题的技术手段为了解决上述问题，本专利技术的技术特征为，本专利技术的前提为使用收集自一捐赠者的一第一骨髓抽吸抹片，以培养特定种类的干细胞的干细胞培养方法。于上述前提中，该干细胞培养方法包括：一骨髓抽吸抹片分离步骤，将收集自该捐赠者的第一骨髓抽吸抹片分为多层；一骨髓抽吸抹片萃取步骤，自于该骨髓抽吸抹片分离步骤分离为多层的第一骨髓抽吸抹片中的一中间层萃取一第二骨髓抽吸抹片；一干细胞第一萃取步骤，将该骨髓抽吸抹片萃取步骤中萃取的第二骨髓抽吸抹片及一预定培养液注入一第一培养容器，该第一培养容器具有一预定体积，该第一培养容器的一底表面具有一预定面积，将该第一培养容器静置一预定时间，使一第一干细胞固定于该第一培养容器的底表面，并进行增殖，当该第一干细胞于该第一培养容器的底表面扩张一平面形状，使该第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积达一第一目标比时，自该第一培养容器萃取该第一干细胞；一干细胞离心步骤，将于该干细胞第一萃取步骤中萃取的第一干细胞离心以分离为多层；一干细胞第二萃取步骤，于以该干细胞离心步骤将该第一干细胞分离为多层后，萃取位于最底层的第二干细胞；及一干细胞第三萃取步骤，将于该干细胞第二萃取步骤中萃取的第二干细胞及该预定培养液注入一第二培养容器，该第二培养容器具有相比于该第一培养容器较大的容量及较大的底表面积，将该第二培养容器静置一预定时间，使该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面，并进行增殖，及当该第二干细胞于该第二培养容器的底表面扩张一平面形状，使该第二干细胞的总表面积相对于该第二培养容器的底表面积达一第二目标比时，自该第二培养容器萃取该第二干细胞。于本专利技术的一实施例中，该干细胞培养方法包括：一变形第一观察步骤，将该骨髓抽吸抹片萃取步骤中萃取的第二骨髓抽吸抹片及该培养液注入该第一培养容器，接着，以将该第一培养容器以一预定角度倾斜的状态，静置该第一培养容器一预定时间，于该预定时间的期间，每隔一预定时间的间隔，观察于该第一培养容器中的第一干细胞自一起始平面形状的变形状态；及一总表面积第一观察步骤，当该变形第一观察步骤的观察结果为该第一干细胞自该起始平面形状变形为一预定平面形状，即判断该第一干细胞已固定于该第一培养容器的底表面，以将该培养液自该第一培养容器中取出，并将一新的培养液注入该第一培养容器中，及以将该第一培养容器以一预定角度倾斜的状态，静置该第一培养容器一预定时间，于该预定时间的期间，每隔一预定时间的间隔，观察固定于该第一培养容器的底表面的第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底面积，当该总表面第一观察步骤的观察结果为该第一干细胞进行增殖使该第一干细胞的平面形状扩张，且该第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积达该第一目标比时，于该干细胞第一萃取步骤中，自该第一培养容器萃取该第一干细胞。于本专利技术的另一实施例中，该干细胞培养方法包括：一变形第二观察步骤，将该干细胞第二萃取步骤中萃取的第二干细胞及该培养液注入该第二培养容器，接着，以将该第二培养容器以一预定角度倾斜的状态，静置该第二培养容器一预定时间，于该预定时间的期间，每隔一预定时间的间隔，观察于该第二培养容器中的第二干细胞自一起始平面形状的变形状态；及一总表面积第二观察步骤，当该变形第二观察步骤的观察结果为该第二干细胞自该起始平面形状变形为一预定平面形状，即判断该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面，以将该培养液自该第二培养容器中取出，并将一新的培养液注入该第二培养容器中，及以将该第二培养容器以一预定角度倾斜的状态，静置该第二培养容器一预定时间，于该预定时间的期间，每隔一预定时间的间隔，观察固定于该第二培养容器的底表面的第二干细胞的总表面积相对于该第二培养容器的底表面积，当该总表面积第二观察步骤的观察结果为该第二干细胞进行增殖使该第二干细胞的平面形状扩张，且该第二干细胞的总表面积相对于该第二培养容器的底表面积达该第二目标比时，于该干细胞第三萃取步骤中，自该第二培养容器萃取该第二干细胞。于本专利技术的另一实施例中，于该骨髓抽吸抹片分离步骤中，自该捐赠者收集2～3毫升的该第一骨髓抽吸抹片，将该2～3毫升的第一骨髓抽吸抹片注入沿一垂直方向延伸的一分离容器，于与体温大致相同的温度下静置该分离容器一预定时间，以使该第一骨髓抽吸抹片于该分离容器中呈一垂直方向分离为多层，且于该骨髓抽吸抹片萃取步骤中，自于该分离容器中分离为多层的第一骨髓抽吸抹片中的一中间层萃取该第二骨髓抽吸抹片。于本专利技术的另一实施例中，该第一培养容器的容量约为20～30毫升，该第一干细胞的起始平面形状略呈圆形，该第一干细胞于变形后的平面形状为大体上以该圆形作为核心朝一方向不规则地延伸的扁形，且于该变形第一观察步骤中，将该第一培养容器于与体温大致相同的温度下静置12～24小时，且于第12～24小时内，以每隔约1～2小时的间隔观察该第一培养容器中的该第一干细胞自一起始平面形状变形的状态，当该第一干细胞变形为一不规则扁形，即判断该第一干细胞固定于该第一培养容器的底表面。于本专利技术的另一实施例中，于该总表面积第一观察步骤中，将该第一培养容器于与体温大致相同的温度下静置36～48小时，且于第36～48小时内，以每隔约1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种使用收集自一捐赠者的一第一骨髓抽吸抹片，以培养特定种类的干细胞的干细胞培养方法，其特征在于，其中，该干细胞培养方法包括：一骨髓抽吸抹片分离步骤，将收集自该捐赠者的第一骨髓抽吸抹片分为多层；一骨髓抽吸抹片萃取步骤，自于该骨髓抽吸抹片分离步骤分离为多层的第一骨髓抽吸抹片中的一中间层萃取一第二骨髓抽吸抹片；一干细胞第一萃取步骤，将该骨髓抽吸抹片萃取步骤中萃取的第二骨髓抽吸抹片及一预定培养液注入一第一培养容器，该第一培养容器具有一预定体积，该第一培养容器的一底表面具有一预定面积，将该第一培养容器静置一预定时间，使一第一干细胞固定于该第一培养容器的底表面，并进行增殖，当该第一干细胞于该第一培养容器的底表面扩张一平面形状，使该第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积达一第一目标比时，自该第一培养容器萃取该第一干细胞；一干细胞离心步骤，将于该干细胞第一萃取步骤中萃取的第一干细胞离心以分离为多层；一干细胞第二萃取步骤，于以该干细胞离心步骤将该第一干细胞分离为多层后，萃取位于最底层的第二干细胞；及一干细胞第三萃取步骤，将于该干细胞第二萃取步骤中萃取的第二干细胞及该预定培养液注入一第二培养容器，该第二培养容器具有相比于该第一培养容器较大的容量及较大的底表面积，将该第二培养容器静置一预定时间，使该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面，并进行增殖，及当该第二干细胞于该第二培养容器的底表面扩张一平面形状，使该第二干细胞的总表面积相对于该第二培养容器的底表面积达一第二目标比时，自该第二培养容器萃取该第二干细胞。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.07 JP 2015-238349;2016.11.08 JP 2016-218141.一种使用收集自一捐赠者的一第一骨髓抽吸抹片，以培养特定种类的干细胞的干细胞培养方法，其特征在于，其中，该干细胞培养方法包括：一骨髓抽吸抹片分离步骤，将收集自该捐赠者的第一骨髓抽吸抹片分为多层；一骨髓抽吸抹片萃取步骤，自于该骨髓抽吸抹片分离步骤分离为多层的第一骨髓抽吸抹片中的一中间层萃取一第二骨髓抽吸抹片；一干细胞第一萃取步骤，将该骨髓抽吸抹片萃取步骤中萃取的第二骨髓抽吸抹片及一预定培养液注入一第一培养容器，该第一培养容器具有一预定体积，该第一培养容器的一底表面具有一预定面积，将该第一培养容器静置一预定时间，使一第一干细胞固定于该第一培养容器的底表面，并进行增殖，当该第一干细胞于该第一培养容器的底表面扩张一平面形状，使该第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积达一第一目标比时，自该第一培养容器萃取该第一干细胞；一干细胞离心步骤，将于该干细胞第一萃取步骤中萃取的第一干细胞离心以分离为多层；一干细胞第二萃取步骤，于以该干细胞离心步骤将该第一干细胞分离为多层后，萃取位于最底层的第二干细胞；及一干细胞第三萃取步骤，将于该干细胞第二萃取步骤中萃取的第二干细胞及该预定培养液注入一第二培养容器，该第二培养容器具有相比于该第一培养容器较大的容量及较大的底表面积，将该第二培养容器静置一预定时间，使该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面，并进行增殖，及当该第二干细胞于该第二培养容器的底表面扩张一平面形状，使该第二干细胞的总表面积相对于该第二培养容器的底表面积达一第二目标比时，自该第二培养容器萃取该第二干细胞。2.如权利要求1所述的干细胞培养方法，其特征在于，其中，该干细胞培养方法包括：一变形第一观察步骤，将该骨髓抽吸抹片萃取步骤中萃取的第二骨髓抽吸抹片及该培养液注入该第一培养容器，接着，将该第一培养容器以一预定角度倾斜的状态，静置该第一培养容器一预定时间，于该预定时间的期间，每隔一预定时间的间隔，观察于该第一培养容器中的第一干细胞自一起始平面形状的变形状态（deformation）；及一总表面积第一观察步骤，当该变形第一观察步骤的观察结果为该第一干细胞自该起始平面形状变形为一预定平面形状，即判断该第一干细胞已固定于该第一培养容器的底表面，以将该培养液自该第一培养容器中取出，并将一新的培养液注入该第一培养容器中，及将该第一培养容器以一预定角度倾斜的状态，静置该第一培养容器一预定时间，于该预定时间的期间，每隔一预定时间的间隔，观察固定于该第一培养容器的底表面的第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底面积，当该总表面第一观察步骤的观察结果为该第一干细胞进行增殖使该第一干细胞的平面形状扩张，且该第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积达该第一目标比时，于该干细胞第一萃取步骤中，自该第一培养容器萃取该第一干细胞。3.如权利要求2所述的干细胞培养方法，其特征在于，其中，该干细胞培养方法包括：一变形第二观察步骤，将该干细胞第二萃取步骤中萃取的第二干细胞及该培养液注入该第二培养容器，接着，将该第二培养容器以一预定角度倾斜的状态，静置该第二培养容器一预定时间，于该预定时间的期间，每隔一预定时间的间隔，观察于该第二培养容器中的第二干细胞自一起始平面形状的变形状态；及一总表面积第二观察步骤，当该变形第二观察步骤的观察结果为该第二干细胞自该起始平面形状变形为一预定平面形状，即判断该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面，以将该培养液自该第二培养容器中取出，并将一新的培养液注入该第二培养容器中，及将该第二培养容器以一预定...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿勒库协·古拉德克夫，
申请(专利权)人：金太郎细胞力量株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP