培养生成液制造方法技术

本发明专利技术提供一种培养生成液的制造方法，其中制造一培养生成液，其包含分泌自一单一种类的干细胞的一预定代谢产物。本发明专利技术的培养生成液的制造方法包含：自分离为多层的骨髓液中萃取位于一中间层的一中间层骨髓液，将该中间层骨髓液与一培养液共同培养；将第一干细胞固定于一第一培养容器的一底表面，且当该第一干细胞的总表面积达该第一培养容器的底表面积的一第一目标比时，自该第一培养容器收集该第一干细胞；将第二干细胞与该培养液共同培养，当收集该第二干细胞时，该第二干细胞位于分离为多层的第一干细胞的一底层；及将该第二干细胞固定于一第二培养容器的底表面，并萃取包含分泌自一单一种类的第二干细胞的一预定代谢产物的一培养生成液，该单一种类的第二干细胞生长自该第二培养容器，当该第二干细胞的总表面积达该第二培养容器的底表面积的一第二目标比。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】培养生成液制造方法
本专利技术关于制造一培养生成液的一种培养生成液的制造方法，其使用收集自一捐赠者的一骨髓液所制得的一干细胞。
技术介绍
现有干细胞培养装置包含一培养槽及一支撑件，一培养液填充于该培养槽中，该支撑件于该支撑表面具有一高度差，且涂布有一干细胞附着材，其中多个低部与该支撑表面具有一高度差(请参照日本特开2014-183770号专利案)。该干细胞培养装置用于使该支撑件漂浮于该培养液中，并用于增生该干细胞，该干细胞通过该干细胞附着材以分散的情况附着于该支撑表面，而不致自该支撑表面剥离。
技术实现思路
本专利技术所解决的问题于日本特开2014-183770号专利案公开的干细胞培养装置中，包含经培养的干细胞的一培养液被作为废料丢弃，该培养液包含的经培养的干细胞，其包含分泌自这些干细胞的代谢产物，可以应用于疾病治疗或美容用途。然而，由于多种类的干细胞存在于收集自一捐赠者的组织或其细胞中，培养这些干细胞导致其自我增生，使该培养液中包含分泌自这些干细胞的多种类的代谢产物，因而无法成功地制造一培养生成液，其对于各种疾病治疗或美容用途只具有特定的效果。本专利技术的目标是提供一种培养生成液的制造方法，其能够制造出一培养生成液，该培养生成液包含分泌自一单一种类的干细胞的一预定代谢产物，且对于各种疾病治疗或美容用途具有特定的效果。解决问题的技术手段为解决前述问题，本专利技术提供制造一培养生成液的一种培养生成液的制造方法，其使用收集自一捐赠者的一骨髓液所制得的一干细胞。本专利技术的培养生成液的制造方法包含：分离骨髓液步骤，将收集自一捐赠者的一骨髓液分离为多层；萃取骨髓液步骤，自于该分离骨髓液步骤中分离为多层的骨髓液中萃取位于一中间层的一中间层骨髓液；第一固定干细胞步骤，将于该萃取骨髓液步骤中萃取出的该中间层骨髓液及一预定培养液注入一第一培养容器中，该第一培养容器具有一预定容量及具有一预定面积的一底表面，将该第一培养容器静置一预定时间，使该中间层骨髓液所包含的一第一干细胞固定于该第一培养容器的一底表面；第一培养干细胞步骤，通过该第一固定干细胞步骤将该第一干细胞固定于该第一培养容器的底表面后，丢弃该第一培养容器中的培养液，将一新的培养液注入该第一培养容器，将该第一培养容器静置一预定时间并培养该第一干细胞，直到该第一干细胞的总表面积达该第一培养容器的底表面积的一第一目标比；第一收集干细胞步骤，通过该第一培养干细胞步骤，于培养该第一干细胞的过程中，当该第一干细胞的总表面积达该第一目标比时，自该第一培养容器收集该第一干细胞；分离干细胞步骤，将收集自该第一收集干细胞步骤的该第一干细胞离心分离为多层；第二收集干细胞步骤，自于该分离干细胞步骤中分离为多层的第一干细胞中，收集位于最底层的一第二干细胞；第二固定干细胞步骤，将收集自该第二收集干细胞步骤中收集的该第二干细胞及一预定培养液注入一第二培养容器，该第二培养容器的容量大于该第一培养容器，且该第二培养容器的底表面积也大于该第一培养容器，将该第二培养容器静置一预定时间，使该第二干细胞固定于该第二培养容器的一底表面；第二培养干细胞步骤，通过该第二固定干细胞步骤将该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面后，丢弃该第二培养容器中的培养液，将一新的培养液注入该第二培养容器，将该第二培养容器静置一预定时间，并培养该第二干细胞直到该第二干细胞的总表面积达该第二培养容器的底表面积的一第二目标比；及第一萃取培养生成液步骤，通过该第二培养干细胞步骤，于培养的过程中，当该第二干细胞的总表面积达该第二目标比时，自该第二培养容器中萃一培养生成液，该培养生成液包含分泌自该单一种类的增生的第二干细胞的一预定代谢产物。本专利技术的培养生成液的制造方法的一实施例中，于该第一固定干细胞步骤及该第一培养干细胞步骤中，该第一培养容器以一预定角度静置一预定时间，且于该第二固定干细胞步骤及该第二培养干细胞步骤中，该第二培养容器以一预定角度静置一预定时间。本专利技术的培养生成液的制造方法的另一实施例中，该培养生成液的制造方法包含：第二收集干细胞步骤，通过该第一萃取培养生成液步骤自该第二培养容器萃取一培养生成液后，自该第二培养容器收集该第二干细胞；第三固定干细胞步骤，将于该第二收集干细胞步骤中收集的第二干细胞及一新的培养液注入一第三培养容器，该第三培养容器具有一预定容量及具有一预定面积的一底表面，该容量及该底表面积均大于该第二培养容器，将该第三培养容器静置一预定时间，使该第二干细胞固定于该第三培养容器的一底表面；第三培养干细胞步骤，通过该第三固定干细胞步骤将该第二干细胞固定于该第三培养(漏了容器)的底表面后，丢该第三培养容器中的培养液，将一新的培养液注入该第三培养容器，将该第三培养容器静置一预定时间，并培养该第二干细胞直到该第二干细胞的总表面积相对该第三培养容器的底表面积达一第三目标比；及第二萃取培养生成液步骤，通过该第三培养干细胞步骤，于培养的过程中，当该第二干细胞的总表面积达该第三目标比时，自该第三培养容器中萃一培养生成液，该培养生成液包含分泌自该单一种类的增生的第二干细胞的一预定代谢产物。本专利技术的培养生成液的制造方法的另一实施例中，于该第三固定干细胞步骤及该第三培养干细胞步骤中，该第三培养容器以一预定角度静置一预定时间。本专利技术的培养生成液的制造方法的另一实施例中，于该分离骨髓液步骤中，自该捐赠者收集2～3mL的一骨髓液，将该2～3mL的骨髓液注入一沿垂直方向延伸的分离容器，该分离容器于与体温大致相同的温度下静置一预定时间，该骨髓液于该分离容器中垂直分离为多层，且于该萃取骨髓液步骤中，萃取位于在该分离容器中分离为多层的骨髓液的该中间层的中间层骨髓液。本专利技术的培养生成液的制造方法的另一实施例中，该第一培养容器的容量约为20～30mL，该第一干细胞的起始平面形状略呈圆形，该第一干细胞的变形的平面形状主要略呈圆形，接着该第一干细胞沿单一方向延伸为不规则形状的扁形，且于该第一固定干细胞步骤中，该第一培养容器于与体温大致相同的温度下静置12～24小时，并于第12～24小时内，以每隔约1～2小时的间隔观察该第一培养容器中的该第一干细胞自该起始平面形状变形的状态，当该第一干细胞自该起始平面形状变形为该不规则扁形，即判断该第一干细胞固定于该第一培养容器的底表面。本专利技术的培养生成液的制造方法的另一实施例中，于该第一收集干细胞步骤中，该第一培养容器于与体温大致相同的温度下静置36～48小时，并于36～48小时内，以每隔约1～2小时的间隔观察固定于该第一培养容器的底表面的第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积。本专利技术的培养生成液的制造方法的另一实施例中，该第一干细胞的总表面积相对于该第一培养容器的底表面积的第一目标比为70～80％。本专利技术的培养生成液的制造方法的另一实施例中，于该分离干细胞步骤中，将该第一干细胞注入一分离容器，该分离容器置于一离心机以离心分离该第一干细胞，且于该第一收集干细胞步骤中，于该分离容器中离心分离为多层的第一干细胞中，收集位于最底层的第二干细胞。本专利技术的培养生成液的制造方法的另一实施例中，该第二培养容器的容量约为40～60mL，该第三培养容器的容量约为70～80mL，该第二干细胞的起始平面形状略呈圆形，该第二干细胞的变形的平面形本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养生成液的制造方法，使用收集自一捐赠者的一骨髓液所制得的一干细胞，该方法包含：一个分离骨髓液步骤，将收集自一个捐赠者的一个骨髓液分离为多层；一个萃取骨髓液步骤，自于该分离骨髓液步骤中分离为多层的骨髓液中的中间层萃取一个中间层骨髓液；一个第一固定干细胞步骤，将自该萃取骨髓液步骤中萃取得的该中间层骨髓液及一个预定培养液注入一个第一培养容器，该第一培养容器具有一个预定容量，该第一培养容器的一个底表面具有一个预定面积，将该第一培养容器静置一个预定时间，使该中间层骨髓液中的一个第一干细胞固定于该第一培养容器的一个底表面；一个第一培养干细胞步骤，于该第一固定干细胞步骤中将该第一干细胞固定于该第一培养容器的底表面后，流出该第一培养容器中的培养液，并将一个新的培养液注入该第一培养容器，将该第一培养容器静置一个预定时间，培养该第一干细胞直到该第一干细胞的总表面积达到相对该第一培养容器的底表面积的一个第一目标比；一个第一收集干细胞步骤，于该第一培养干细胞步骤中该第一干细胞的总表面积达该第一目标比时，自该第一培养容器收集该第一干细胞；一个分离干细胞步骤，将自该第一收集干细胞步骤中收集的第一干细胞离心分离为多层；一个第二收集干细胞步骤，收集于该分离干细胞步骤中分离为多层的第一干细胞中位于最底层的一个第二干细胞；一个第二固定干细胞步骤，将收集自该第二收集干细胞步骤的第二干细胞及一个预定培养液注入一个第二培养容器，该第二培养容器具有大于该第一培养容器的容量，及大于该第一培养容器的底表面的底表面积，将该第二培养容器静置一个预定时间，使该第二干细胞固定于该第二培养容器的一个底表面；一个第二培养干细胞步骤，于该第二固定干细胞步骤将该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面后，流出该第二培养容器中的培养液，并将一个新的培养液注入该第二培养容器，将该第二培养容器静置一个预定时间，培养该第二干细胞直到该第二干细胞的总表面积达到相对该第二培养容器的底表面积的一个第二目标比；及一个第一萃取培养生成液步骤，于该第二培养干细胞步骤中该第二干细胞的总表面积达到该第二目标比时，自该第二培养容器萃取一个培养生成液，该培养生成液包含分泌自该单一种类的增生的第二干细胞的一个预定代谢产物。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.10 JP 2016-0471191.一种培养生成液的制造方法，使用收集自一捐赠者的一骨髓液所制得的一干细胞，该方法包含：一个分离骨髓液步骤，将收集自一个捐赠者的一个骨髓液分离为多层；一个萃取骨髓液步骤，自于该分离骨髓液步骤中分离为多层的骨髓液中的中间层萃取一个中间层骨髓液；一个第一固定干细胞步骤，将自该萃取骨髓液步骤中萃取得的该中间层骨髓液及一个预定培养液注入一个第一培养容器，该第一培养容器具有一个预定容量，该第一培养容器的一个底表面具有一个预定面积，将该第一培养容器静置一个预定时间，使该中间层骨髓液中的一个第一干细胞固定于该第一培养容器的一个底表面；一个第一培养干细胞步骤，于该第一固定干细胞步骤中将该第一干细胞固定于该第一培养容器的底表面后，流出该第一培养容器中的培养液，并将一个新的培养液注入该第一培养容器，将该第一培养容器静置一个预定时间，培养该第一干细胞直到该第一干细胞的总表面积达到相对该第一培养容器的底表面积的一个第一目标比；一个第一收集干细胞步骤，于该第一培养干细胞步骤中该第一干细胞的总表面积达该第一目标比时，自该第一培养容器收集该第一干细胞；一个分离干细胞步骤，将自该第一收集干细胞步骤中收集的第一干细胞离心分离为多层；一个第二收集干细胞步骤，收集于该分离干细胞步骤中分离为多层的第一干细胞中位于最底层的一个第二干细胞；一个第二固定干细胞步骤，将收集自该第二收集干细胞步骤的第二干细胞及一个预定培养液注入一个第二培养容器，该第二培养容器具有大于该第一培养容器的容量，及大于该第一培养容器的底表面的底表面积，将该第二培养容器静置一个预定时间，使该第二干细胞固定于该第二培养容器的一个底表面；一个第二培养干细胞步骤，于该第二固定干细胞步骤将该第二干细胞固定于该第二培养容器的底表面后，流出该第二培养容器中的培养液，并将一个新的培养液注入该第二培养容器，将该第二培养容器静置一个预定时间，培养该第二干细胞直到该第二干细胞的总表面积达到相对该第二培养容器的底表面积的一个第二目标比；及一个第一萃取培养生成液步骤，于该第二培养干细胞步骤中该第二干细胞的总表面积达到该第二目标比时，自该第二培养容器萃取一个培养生成液，该培养生成液包含分泌自该单一种类的增生的第二干细胞的一个预定代谢产物。2.如权利要求1所述的培养生成液的制造方法，其中，于该第一固定干细胞步骤及该第一培养干细胞步骤中，该第一培养容器以一个预定倾斜角度静置一预定时间，且于该第二固定干细胞步骤及该第二培养干细胞步骤中，该第二培养容器以一个预定倾斜角度静置一个预定时间。3.如权利要求1或2所述的培养生成液的制造方法，包含：一个第二收集干细胞步骤，于该第一萃取培养生成液步骤中自该第二培养容器萃取一个培养生成液后，自该第二培养容器收集该第二干细胞；一个第三固定干细胞步骤，将自该第二收集干细胞步骤中收集的第二干细胞及一个新的培养液注入一个第三培养容器，该第三培养容器具有一个预定容量，该第三培养容器的一个底表面具有一个预定面积，该容量及该底表面积大于该第二培养容器，将该第三培养容器静置一个预定时间，使该第二干细胞固定于该第三培养容器的一个底表面；一个第三培养干细胞步骤，于该第三固定干细胞步骤中将该第二干细胞固定于该第三培养容器的底表面后，流出该第三培养容器中的培养液，并将一个新的培养液注入该第三培养容器，将该第三培养容器静置一个预定时间，培养该第二干细胞直到该第二干细胞的总表面积达到该第三培养容器的底表面积的一个第三目标比；及一个第二萃取培养生成液步骤，于该第三培养干细胞步骤中该第二干细胞的总表面积达到该第三目标比时，自该第三培养容器萃取一个培养生成液，该培养生成液...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿勒库协·古拉德克夫，
申请(专利权)人：金太郎细胞力量株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP