一种高效液相色谱法测定罗氟司特有关物质的方法技术

本发明专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定罗氟司特有关物质的方法，所述方法的分析条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸二氢铵溶液和有机溶剂的混合液为流动相进行等度洗脱。本发明专利技术的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：可以对罗氟司特可能存在的杂质进行有效分离并定量测定，专属性强、灵敏度高、准确性好，从而能够有效控制罗氟司特及其制剂的产品质量，提高药品安全性，为罗氟司特及其制剂质量标准的制定提供依据。

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱法测定罗氟司特有关物质的方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定罗氟司特有关物质的方法。
技术介绍
慢性阻塞性肺病(COPD)是一种常见的以持续性气流受限为特征的疾病，是全世界范围内发病率和死亡率最高的疾病之一。作为磷酸二酯酶4(PDE-4)抑制剂的罗氟司特，能阻断炎症反应信号传递，减少炎症介质释放，进而抑制COPD等呼吸道疾病对肺组织的损伤。美国食品药品管理局(FDA)和欧洲药品管理局(EMEA)分别于2011年3月1日和2011年2月28日批准Forest公司的罗氟司特片用于降低严重慢性阻塞性肺病症状的发作或恶化的频率，以减轻患者的咳嗽及呼吸道黏液过多症状。罗氟司特(Roflumilast)，化学名为N-(3,5-二氯吡啶-4-基)-3-(环丙基甲氧基)-4-(二氟甲氧基)苯甲酰胺；分子式为C17H14Cl2F2N2O3；化学结构式如下：在合成该化合物的过程中引入的起始原料、中间体、副产物及存放过程中生成的降解产物等有关物质，若含量较大，可能会影响药物疗效、危害人体健康，需进行严格的质量控制。其包含杂质的具体信息见表1。表1罗氟司特有关物质的名称和化学结构式至今，欧洲药典、美国药典、英国药典、日本药典和中国药典等法定标准尚未收载罗氟司特；目前已发表的相关文献和专利中有关物质的检测方法仍有待改进。为保证罗氟司特及其制剂的安全、有效和质量可控，寻求一种简单快捷、专属性强、灵敏度高、准确性好的检测方法显得尤为重要。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术提供一种高效液相色谱法测定罗氟司特有关物质的方法，该方法可对罗氟司特中可能存在的杂质进行有效分离并定量测定，专属性强、灵敏度高、准确性好，从而有效控制罗氟司特及其制剂的产品质量，提高药品安全性，为罗氟司特及其制剂质量标准的制定提供依据。为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案如下。一种高效液相色谱法测定罗氟司特有关物质的方法，以磷酸二氢铵溶液和有机溶剂的混合液为流动相，在十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱上进行等度洗脱，溶解样品所用的稀释液为流动相。所述的罗氟司特有关物质包括：罗氟司特有关物质A、B、C、D、E、F、G中的一种或几种(见表1)。所述的磷酸二氢铵溶液的浓度为0.004～0.02mol/L，pH值为3.0～3.6。所述的有机溶剂为甲醇和乙腈。优选的，所述流动相为0.005mol/L磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至3.5)-甲醇-乙腈(41:31:28)。所述高效液相色谱法的检测条件为：流动相的流速0.8～1.2ml/min，柱温25～35℃，检测波长210～215nm，进样量10μl。本专利技术的方法用于罗氟司特及其制剂中潜在杂质的检测。本专利技术的方法具体步骤：取本品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙腈5ml振摇使溶解，再用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F和杂质G对照品各适量，精密称定，分别用稀释液溶解并定量稀释制成每1ml含500μg的溶液，作为对照品贮备液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取罗氟司特对照品约5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加乙腈1ml振摇使溶解，再精密加入上述杂质对照品贮备液各0.2ml，用稀释液稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含罗氟司特0.5mg、上述杂质各10μg的混合溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。照高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.005mol/L磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至3.5)-甲醇-乙腈(41:31:28)为流动相，检测波长为213nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，罗氟司特峰与相邻杂质峰之间的分离度应大于1.5。精密量取供试品溶液、对照溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。本专利技术的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：1.本专利技术的方法可有效分离并定量测定罗氟司特中可能存在的有关物质，从而有效控制罗氟司特产品的质量，专属性强、灵敏度高、准确度好，可充分满足有关物质检查的要求。2.本专利技术的方法简单快捷，能在同一个高效液相色谱条件下分离罗氟司特及其有关物质，监控反应进度，避免了在生产监控中频繁更换检测方法，可用于生产过程中间体的监控和成品中有关物质检查，提高工作效率，适合工业化大生产的要求。综上所述，本专利技术的方法灵敏度高，可同时检测的潜在杂质种类多，能够全面控制罗氟司特及其制剂中的有关物质，提高药品安全性，为制定罗氟司特原料及其制剂的质量标准提供依据。附图说明图1罗氟司特有关物质检查空白溶液的高效液相色谱图。图2罗氟司特有关物质检查系统适用性溶液的高效液相色谱图。图3罗氟司特有关物质检查酸强制降解试验供试品溶液的高效液相色谱图。图4罗氟司特有关物质检查碱强制降解试验供试品溶液的高效液相色图。图5罗氟司特有关物质检查氧化强制降解试验供试品溶液的高效液相色谱图。图6罗氟司特有关物质检查光照强制降解试验供试品溶液的高效液相色谱图。图7罗氟司特有关物质检查高温强制降解试验供试品溶液的高效液相色谱图。图中：1-杂质A；2-杂质B；3-杂质C；4-杂质D；5-杂质E；6-杂质F；7-杂质G；8-罗氟司特。具体实施方式下面通过实施例进一步解释和说明本专利技术。本专利技术的实施例仅用于更好地说明本专利技术的内容，而不是对本专利技术的限制，因此在本专利技术的方法的基础上对本专利技术的简单改进或替换均属本专利技术要求保护的范围。本专利技术所述检测方法的色谱条件。仪器：Waterse2695型高效液相色谱仪(Empower3色谱工作站、Waterse2695分离模块、WatersAlliance系列柱温箱)，Waters2998光电二极管阵列检测器。色谱柱：WatersXbridgeC18(4.6mm×250mm，5μm)。流动相：0.005mol/L磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至3.5)-甲醇-乙腈(41:31:28)，等度洗脱。检测波长：213nm。流速：1.0ml/min。柱温：30℃。进样量：10μl。实施例1本专利技术所述检测方法的系统适用性试验。稀释液：0.005mol/L磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH值至3.5)-甲醇-乙腈(41:31:28)。空白溶液：稀释液。杂质对照品贮备液的制备：取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F和杂质G对照品各适量，精密称定，分别用稀释液溶解并定量稀释制成每1ml含500μg的溶液，摇匀，即得。杂质定位溶液的制备：取上述杂质对照品贮备液适量，分别用稀释液定量稀释制成每1ml含10μg的溶液，摇匀，即得。系统适用性溶液的制备：取罗氟司特对照品约5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加乙腈1ml振摇使溶解，再精密加入上述杂质对照品贮备液各0.2ml，用稀释液稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含罗氟司特0.5mg、上述杂质各10μg的混合溶液，即得。精密量取上述空白溶液、各杂质定位溶液和系统适用性溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，按照实施例1色谱条件进行测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效液相色谱法测定罗氟司特有关物质的方法，其特征在于，以磷酸二氢铵溶液和有机溶剂的混合液为流动相，在十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱上进行等度洗脱，溶解样品所用的稀释液为流动相；所述的罗氟司特有关物质包括：罗氟司特有关物质A、B、C、D、E、F、G中的一种或几种：

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱法测定罗氟司特有关物质的方法，其特征在于，以磷酸二氢铵溶液和有机溶剂的混合液为流动相，在十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱上进行等度洗脱，溶解样品所用的稀释液为流动相；所述的罗氟司特有关物质包括：罗氟司特有关物质A、B、C、D、E、F、G中的一种或几种：。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，磷酸二氢铵溶液的浓度为0.004～0.02mol/L，pH值为3.0～...

【专利技术属性】
技术研发人员：张云，孙玲，王立立，孙晋瑞，
申请(专利权)人：山东省药学科学院，
类型：发明
国别省市：山东,37