本发明专利技术公开了一种分光光度法测定新疆红花中总黄酮的含量的方法，结果显示，采用经 60% 乙醇溶提取后再经超声分离得待测液，在510 nm 波长下测定吸光度，该分光光度法的标准曲线回归系数是0.9977，相对标准偏差为0.2%，加标回收率96.23%~99.12%，表明该分析方法准确性高、重复性好，且简便、快速，可以作为中药材市场新疆红花中总黄酮的测定方法。
【技术实现步骤摘要】
一种采用分光光度法测定新疆红花中总黄酮的含量的方法
本专利技术属于中药材市场检验领域。具体涉及新疆红花中总黄酮含量的测定方法。
技术介绍
红花(Carthamustinctorius)为菊科植物，一年生草本植物干燥的管状花，是祖国传统医学的活血化瘀的良药，也是世界卫生组织鼓励使用的药食兼用的天然色素之一，现已用于医药、食品、保健品，人工染料等行业。当前，在红花栽培面积上，印度居于首位，美国、墨西哥以及中国次之。目前，红花的主要栽培品种为油用品种，在国内外得到了广泛的栽培。油用红花是优质油脂的来源之一，主要用于食品加工以及烹调等。除此以外，红花的花绒能够提取出天然色素，红花天然色素能够作为食品添加剂、人工染料以及保健品和美容产品等。当前我国栽培红花已经有2000年，我国红花栽培上除了用于提炼油脂以及人工色素以外更重要的是作为中药材入药。在2005版的药典中对红花的功能进行了这样的描述:活血、散瘀。用于痛经、经闭、疮疡肿痛、跌扑损伤。现代临床和药理作用表明红花具有对心血管方面的药理作用，并广泛应用于临床。黄酮是红花中中药的药用成分之一。对红花总黄酮含量进行测定在很大程度上能够对红花质量状况进行判定。当前测定红花黄酮类含量的方法主要有这样几种:分光光度法、库仑滴定法、HPCE法以及HPLC法。紫外线分光光度计法测定红花中总黄酮的含量操作简单，稳定性与重复性较高，是一个很好的方法。
技术实现思路
本文采用分光光度法测定新疆红花中总黄酮的含量的方法，与离子色谱法相比，其操作简捷且结果准确，仪器易普及，适合在中药材市场中推广使用。本专利技术包括以下步骤：（1）样品预处理从3个红花样品中各取1g，粉碎(40目)，得红花粗粉。在250ml圆底烧瓶中加入经称量的1.00g的红花粉末，并标号1，2，3。向装有红花样品的圆底烧瓶中加入60%乙醇溶液，加至瓶颈处。对溶液进行充分摇动，随后进行超声分离，时间为30min。超声分离处理后放在室温下进行冷却处理。待溶液冷却后用60%乙醇溶液定容到100ml的容量瓶当中，静置备用。（2）样品测定取已制备好的3份样品溶液测定，以60%乙醇为空白溶液，在510nm处测定。每个样品进行3次重复试验。根据得到的标准曲线对新疆产红花当中所含的总黄酮进行测定。附图说明图1芦丁标准曲线图。具体实施方式下面将详细说明本专利技术的具体实施方式：1.仪器与试剂：仪器：ShimadzuUV-2401紫外-可见分光光度计；X-5显微熔点测定仪北京泰克仪器有限公司生产；2F-C型三用紫外分析仪上海康乐光电仪器有限公司生产；电热恒温水浴锅北京市永光明医疗仪器厂生产；EYBLA旋转蒸发仪上海爱朗仪器有限公司生产；SHZ-D9(Ⅲ)循环水式真空泵巩义市予华仪器有限责任公司生产；电子分析天平AR1140；托盘天平。材料与试剂：新疆红花(1号)采自新疆A地；新疆红花(2号)采自新疆B地；新疆红花(3号)采自新疆C地；芦丁对照品(中国生物制品鉴定所)；石油醚（分析纯）；无水乙醇（分析纯）；亚硝酸钠（分析纯）；NaOH（分析纯）；硝酸铝（分析纯）；水（蒸馏水）。2.方法与结果对照品溶液制备精密称取芦丁对照品5.00mg，置50ml容量瓶中,用60%乙醇溶液溶解定容，配成浓度为0.11mg/ml的对照品溶液。标准曲线的绘制精密移取芦丁对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分别置于10ml比色管中，加60%乙醇稀释至5.0ml。将5ml60%的乙醇溶液作为空白，并向其中加入0.3ml5%NaNO3。对混合液进行充分摇匀，随后进行静置处理6分钟。静置处理结束后向其中加入0.3ml的10%硝酸铝溶液。对混合液进行充分摇匀，最后进行静置处理6分钟。静置结束后向混合液中加入4ml的4%NaOH溶液。将混合液充分摇匀，随后静置处理12分钟。静置结束后，将波长设定为510nm，对芦丁对照组进行吸光度的测定。利用Excel表对试验数据进行处理得到芦丁标准曲线，芦丁标准曲线数据如表1所示。如图1所示，横坐标为芦丁浓度，纵坐标为吸光度值A。回归方程y=12.16x－0.0138，R2=0.9977。试验结果表明，在0.01~0.05mg/ml范围内，芦丁线性关系良好。精密度试验以芦丁作为对照组。加入60%的乙醇，并进行稀释。稀释到5.0ml。向稀释后的芦丁乙醇混合液当中加5%的NaNO3溶液0.3ml。将混合液充分摇匀。随后进行静置处理6分钟。静置结束后加入10%的AlNO3溶液0.3ml。将混合液进行充分的摇匀，随后静置处理6分钟。静置结束后加入4%的NaOH溶液4.0ml以及60%的乙醇溶液0.4ml。将混合液进行充分摇匀，随后静置处理12分钟。将波长设定为510nm，对对照组溶液的吸光度进行测定。对对照组溶液进行6次重复测定。对6次的测定结果进行相对标准偏差的计算。计算结果为:RSD=0.2%。从表2实验数据中可以看到，本实验具有良好的精密度。稳定性试验通过对来源于海晖药店的红花材料进行处理，得到其红花提取液。对红花提取液进行重复性测试。根据上文的方法进行测定。即在紫外线吸收波长最大处对其吸光度进行测定。选取海晖红花样品2ml，每隔10min测一次。从表3中可以看到，在波长为510nm时，对红花提取液当中总黄酮含量进行测定，试验数据表明吸光度具有一定的稳定性。试验结果表明该试验具有良好的重复性。重复性试验通过对来源于人民同泰药店的红花材料进行处理，得到其红花提取液。对红花提取液进行重复性测试。根据上文的方法进行测定。即在紫外线吸收波长最大处对其吸光度进行测定。从表4中可以看到，在波长为510nm时，对红花提取液当中总黄酮含量进行测定，试验数据表明吸光度具有一定的稳定性。试验结果表明该试验具有良好的重复性。回收率试验供样液为总黄酮提取物溶液，分别取供样液110ml、115ml、2ml、215ml、3ml分置与比色管当中。加入芦丁对照液110ml。充分混合均匀。表1芦丁标准曲线数据序号12345吸光度A0.110.2350.3350.4790.596浓度C(mg/ml)0.010.020.030.040.05表2精密度试验结果序号123456RSD(%)吸光度A0.2740.2730.2730.2740.2740.2730.200%表3稳定性实验结果序号0102030405060RSD(%)吸光度A0.4370.4130.4070.4600.4090.4040.4003.06%表4重复性实验结果序号123456RSD(%)A0.2610.2480.2390.2360.2500.2373.96%本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.分光光度法测定新疆红花中总黄酮的含量的方法，其特征在于从3个红花样品中各取1g，粉碎(40目) ，得红花粗粉；在 250 ml 圆底烧瓶中加入经称量的1.00g 的红花粉末，并标号1，2，3；向装有红花样品的圆底烧瓶中加入 60% 乙醇溶液，加至瓶颈处；对溶液进行充分摇动，随后进行超声分离，时间为30min；超声分离处理后放在室温下进行冷却处理；待溶液冷却后用 60% 乙醇溶液定容到 100 ml的容量瓶当中，静置备用；取已制备好的3份样品溶液测定，以60% 乙醇为空白溶液，在510nm处测定；每个样品进行3次重复试验；根据得到的标准曲线对新疆产红花当中所含的总黄酮进行测定。
【技术特征摘要】
1.分光光度法测定新疆红花中总黄酮的含量的方法，其特征在于从3个红花样品中各取1g，粉碎(40目)，得红花粗粉；在250ml圆底烧瓶中加入经称量的1.00g的红花粉末，并标号1，2，3；向装有红花样品的圆底烧瓶中加入60%乙醇溶液，加至瓶颈处；对溶液进行充分摇动，随后进行超声分离，时间为30min；超声分离处理后放在室温下进行冷却处理；待溶液冷却后用60%乙醇溶液定容到100ml的容...
【专利技术属性】
技术研发人员：洪霞，杜霞，张淑雅，
申请(专利权)人：江苏维赛科技生物发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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