一种银杏叶提取物粗品柱层析精制方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种银杏叶提取物粗品柱层析精制方法及应用，其中银杏叶提取物柱层析收集起点的确定方法的步骤为：用乙醇溶液洗脱层析柱中的银杏叶提取物并检测洗脱液样品中的黄酮类成分含量和紫外吸光度，以紫外吸光度增长率＞10％的洗脱液收集时间点作为洗脱液的收集起点，收集至洗脱液全部流出。银杏叶提取物粗品柱层析精制方法为在层析柱精制银杏叶提取物粗品的过程中，从上述收集起点开始收集洗脱液。该方法由于在精制过程中引入定量监控方法，从而保证了最终产品质量的稳定性和均一性。

A crude column chromatography purification method for Ginkgo biloba extract and its application

The present invention relates to a method and application of ginkgo leaf extract crude column chromatography and application. The steps of determining the starting point of ginkgo leaf extract column chromatography are: elution of Ginkgo biloba extract in chromatographic column with ethanol solution and detection of the content of flavonoids in the eluant sample and UV absorbance in the eluent sample and UV absorbance. The eluent collection time of growth rate > 10% was used as the starting point of eluent collection, and all the eluent was collected. In the process of refining Ginkgo biloba extract from Ginkgo column, the eluent was collected from the starting point of the extraction of Ginkgo biloba extract. The method introduces quantitative monitoring method in the refining process, thus ensuring the stability and uniformity of the final product quality.

【技术实现步骤摘要】
一种银杏叶提取物粗品柱层析精制方法及应用
本专利技术属于过程分析
，尤其涉及一种银杏叶提取物粗品柱层析精制方法及应用。
技术介绍
银杏叶为银杏科植物银杏(GinkgobilobaL.)的干燥叶，2015年版《中国药典》记载银杏叶具有活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂的功效，主要用于淤血阻络，胸痹心痛，中风偏瘫，肺虚咳嗽，高脂血症的治疗。银杏叶中有效成分主要是黄酮醇苷类化合物和萜类内酯类化合物，具有很高的保健和药用价值。国内以银杏叶作为原料制成的中药制剂品种繁多，有片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液和注射剂等。目前国家食品药品监督管理总局批准的数十种银杏叶制剂的成药形式均是将银杏叶提取物与其他辅料混合形成，如舒血宁注射液。对于银杏叶提取物的研制开发，已从有效成分的总提取物浓缩制剂发展到了对黄酮醇苷、内酯和银杏酸含量限定标准的新产品。银杏叶提取物是一个比较复杂的化合物富集产品，除主要活性成分外，其含有无机物到有机物、从极性到非极性、从小分子到生物大分子的各种成分，据不完全统计银杏叶中含有240多个化学成分，其提取分离纯化多用到了柱层析。而现有技术中，银杏叶柱层析时洗脱的终点或收集的起点的判断主要依靠操作人员的技术经验，根据颜色来决定何时开始收集，难以准确保证生产过程中批间的稳定性和均一性，容易造成批间差异，从而影响产品质量。
技术实现思路
针对现有技术中人为判断柱层析过程的收集起点会造成批间差异的问题，本专利技术提供一种银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分收集起点的确定方法。以及，本专利技术还提供一种银杏叶提取物粗品柱层析精制方法。以及，本专利技术还提供按上述精制方法精制得到的银杏叶提取物在制备注射液、片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液领域的应用。为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下技术方案：一种银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分收集起点的确定方法，包括以下步骤：步骤a、向待精制的银杏叶提取物中加纯化水制成含有所述银杏叶提取物3～5wt％的银杏叶提取物溶液；步骤b、将所述银杏叶提取物溶液加入到层析柱中，用乙醇溶液洗脱，每0.8～1.2min收集一次洗脱液样品；步骤c、测定每个所述洗脱液样品中黄酮类成分的含量；步骤d、测定每个所述洗脱液样品在特定波长的紫外吸光度，所述特定波长为黄酮类成分的最大吸收波长；步骤e、根据每个所述洗脱液样品中所述黄酮类成分含量以及对应的所述紫外吸光度，紫外吸光度增长率＞10％的洗脱液收集时间点即为洗脱液的收集起点。本专利技术采用通过紫外吸光度与黄酮类成分含量的对应关系来确定紫外吸光度的增长与黄酮类成分含量的增加有关，而黄酮类成分的增加代表银杏叶提取物开始被洗脱，故将紫外吸光度开始增加的洗脱液收集时间点作为收集起点，可以使收集的时间范围更加明确，避免人为经验判断的误差。本专利技术采用紫外分光光度法进行洗脱样品的测定，样品处理简单、分析快速，可以在银杏叶提取物柱层析精制过程中进行实时监测，从而快速判断洗脱的收集起点，从而保证精制后的银杏叶提取物中黄酮类成分的含量稳定性和均一性，得到高品质的精制产品。以及，本专利技术还提供一种银杏叶提取物粗品柱层析精制方法，包括以下步骤：向待精制的银杏叶提取物粗品中加纯化水制成含有所述银杏叶提取物粗品3～5wt％的银杏叶提取物粗品溶液；将所述银杏叶提取物粗品溶液加入到层析柱中，用乙醇溶液洗脱，并对洗脱液在特定波长进行紫外吸光度的检测，所述特定波长为黄酮类成分的最大吸收波长；按照上述精制方法确定银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分的收集起点，从所述收集起点开始收集洗脱液，至洗脱液全部流出，即得柱层析精制后的银杏叶提取物。本专利技术通过快速检测判断洗脱液收集起点，避免了人员主观判断间的差异，保证了批间的含量的稳定和均一，也避免了多收集空白洗脱液造成收集体积过大增加浓缩时长等问题。以及，本专利技术还提供按上述精制方法精制得到的银杏叶提取物在制备注射液、片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液领域的应用。由于经过本专利技术所提供的精制方法精制得到的银杏叶提取物的含量稳定、均一，因此后续根据实际需要进一步进行精制或制剂时，避免加入浓缩、稀释等操作，减少了工艺环节，并可以对后续工序的工艺参数进行标准化制定，保证了终产品的质量稳定性。附图说明图1为洗脱溶剂的紫外扫描图；图2为实施例1聚酰胺树脂柱精制所得洗脱液的紫外扫描图；图3为实施例2大孔吸附树脂柱精制所得洗脱液的紫外扫描图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供了一种银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分收集起点的确定方法，包括以下步骤：步骤a、向待精制的银杏叶提取物中加纯化水制成含有所述银杏叶提取物3～5wt％的银杏叶提取物溶液；步骤b、将所述银杏叶提取物溶液加入到层析柱中，用乙醇溶液洗脱，每0.8～1.2min收集一次洗脱液样品；步骤c、测定每个所述洗脱液样品中黄酮类成分的含量；步骤d、测定每个所述洗脱液样品在特定波长的紫外吸光度，所述特定波长为黄酮类成分的最大吸收波长；步骤e、根据每个所述洗脱液样品中所述黄酮类成分含量以及对应的所述紫外吸光度，紫外吸光度增长率＞10％的洗脱液收集时间点即为洗脱液的收集起点。由于层析柱中固定相的材质、层析柱的内径、洗脱液的极性、洗脱流速等均会影响黄酮类成分洗脱下来的速度，若仅凭人为经验来判断洗脱液的收集时间，则会造成收集到的溶液中含量不均匀。若从头开始收集，则会收集到大量空白洗脱液，会降低收集所得到的洗脱液中黄酮类成分的含量，后续还需增加浓缩等工序以提高含量来满足生产所需。本专利技术将紫外吸光度增长率＞10％的洗脱液收集时间点作为收集起点，可以使收集起点更加明确，避免人为经验判断的误差。本专利技术采用紫外分光光度法进行洗脱样品中黄酮成分的含量测定，可以在银杏叶提取物柱层析精制过程中进行实时监测，快速判断洗脱的收集起点，从而保证精制后的银杏叶提取物中黄酮类成分的含量稳定性和均一性，得到高品质的精制产品。具体的，上述步骤b中所述柱层析使用的层析柱主要包括聚酰胺树脂柱、大孔吸附树脂柱。黄酮类化合物富含酚羟基，酚羟基与聚酰胺分子中的酰胺基能够形成氢键缔合而产生吸附，当移动相中的溶剂分子与聚酰胺或黄酮类化合物形成氢键缔合时，聚酰胺与黄酮类化合物之间的氢键缔合则随之减弱而被洗脱。大孔吸附树脂有多孔性结构使其对分子大小不同的物质具有筛选作用，还有巨大的比表面，通过它与待分离物质的分子之间的范德华引力大小以及待分离物质的分子量，经一定的溶剂洗脱来进行分离、纯化、除杂。进一步优选的，所述乙醇溶液为体积浓度为40～80％的乙醇溶液。该浓度的乙醇溶液对于层析柱和银杏叶提取物中的黄酮类成分，极性适中，可以更好地进行洗脱，并且乙醇残留相对于其他极性溶剂而言，更容易控制和去除，对人体更为安全。进一步优选的，所述黄酮类成分为总黄酮醇苷，该成分为银杏叶提取物中的重要有效成分，且极性较大，更容易被洗脱，因此可以代表银杏叶提取物洗脱的情况，当黄铜总醇苷开始被洗脱时，可以认为银杏叶提取物开始被洗脱。进一步优选的，测定黄酮类成分含量的方法为高效液相色谱法。由于黄酮类化合物中的黄酮醇苷存在紫外吸收本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分收集起点的确定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a、向待精制的银杏叶提取物中加纯化水制成含有所述银杏叶提取物3～5wt％的银杏叶提取物溶液；步骤b、将所述银杏叶提取物溶液加入到层析柱中，用乙醇溶液洗脱，每0.8～1.2min收集一次洗脱液样品；步骤c、测定每个所述洗脱液样品中黄酮类成分的含量；步骤d、测定每个所述洗脱液样品在特定波长的紫外吸光度，所述特定波长为黄酮类成分的最大吸收波长；步骤e、根据每个所述洗脱液样品中所述黄酮类成分含量以及对应的所述紫外吸光度，紫外吸光度增长率＞10％的洗脱液收集时间点即为洗脱液的收集起点。

【技术特征摘要】
1.一种银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分收集起点的确定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤a、向待精制的银杏叶提取物中加纯化水制成含有所述银杏叶提取物3～5wt％的银杏叶提取物溶液；步骤b、将所述银杏叶提取物溶液加入到层析柱中，用乙醇溶液洗脱，每0.8～1.2min收集一次洗脱液样品；步骤c、测定每个所述洗脱液样品中黄酮类成分的含量；步骤d、测定每个所述洗脱液样品在特定波长的紫外吸光度，所述特定波长为黄酮类成分的最大吸收波长；步骤e、根据每个所述洗脱液样品中所述黄酮类成分含量以及对应的所述紫外吸光度，紫外吸光度增长率＞10％的洗脱液收集时间点即为洗脱液的收集起点。2.根据权利要求1所述的银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分收集起点的确定方法，其特征在于，步骤b中所述柱层析使用的层析柱主要包括聚酰胺树脂柱、大孔吸附树脂柱；和/或步骤b中所述乙醇溶液为体积浓度为40～80％的乙醇溶液。3.根据权利要求1所述的银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分收集起点的确定方法，其特征在于，步骤b中所述黄酮类成分为总黄酮醇苷。4.根据权利要求3所述的银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分收集起点的确定方法，其特征在于，步骤b中测定黄酮类成分含量的方法为高效液相色谱法。5.根据权利要求4所述的银杏叶提取物柱层析过程中黄酮类成分收集起点的确定方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨琴，丁艳谱，孙胜斌，姜国志，
申请(专利权)人：神威药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13