The invention discloses a POSS based organic silica gel monolithic column used for ochratoxin specific identification and its preparation method, which is a hybrid silica gel monolithic column with a high crosslinked 3D skeleton and a surface rich amino group formed by a nucleophilic reaction of a cage type polysiloxane (POSS) crosslinking agent and a polyamine monomer. The substrate is loaded with OZP modified gold nanoparticles and formed by amino gold bonding and self-assembly. The POSS based monolithic column prepared in the invention has the characteristics of highly crosslinked structure and multi action loci, and can efficiently load nanoscale particles. Thus, the aptamer with specific identification of ochratoxin A can be immobilized on the POSS based monolithic column with high density load, thus the high efficiency of ochratoxin A can be realized. Specific identification and separation.
【技术实现步骤摘要】
一种用于赭曲霉毒素特异识别的POSS基有机-无机杂化硅胶整体柱及其制备方法
本专利技术属于整体聚合材料制备领域,具体涉及用于赭曲霉毒素特异识别的POSS基有机-无机杂化硅胶整体柱及其制备方法。
技术介绍
整体柱,又称连续床(continuousbed)是一种用有机或无机聚合方法在色谱柱内进行原位聚合和类似浇铸的连续床固定相。核酸适配体修饰的亲和整体柱通过将核酸适配体和整体柱材料相结合,具有较高的选择性、高分辨率和高目标识别能力,作为新兴的功能材料受到了关注。制备核酸适配体修饰整体柱较成熟的方式是基于生物素和链霉亲和素或醛基-氨基之间的桥联作用将适配体固定在固定相上,以链霉亲和素为连接媒介,将末端修饰生物素的核酸适配体固定到链霉亲和素活化的甲基丙烯酸缩水甘油酯有机聚合物整体柱基质上,该方法制备条件温和且有利于保持适配体的活性,可实现对细胞色素C和凝血酶的分离与检测。利用戊二醛作为连接媒介,将末端修饰为氨基的核酸适配体固定到戊二醛活化的氨丙基硅胶基质整体柱上,制备的核酸适配体亲和整体柱可实现对蛋白的分离纯化和检测。通过反复延长戊二醛活化的时间来增加戊二醛的位点,以进一步提高核酸适配体的覆盖密度,增强对目标分子的结合,可实现在复杂样品中对赭曲霉毒素A的特异性识别和高灵敏检测,然而长时间的反复活化相对耗时繁琐。纳米金颗粒由于其良好的稳定性、小尺寸效应、表面效应以及良好的生物相容性被广泛应用于众多领域。以纳米金为媒介,将功能试剂键合到具有高度交联和稳定的结构上,可以实现分子层上的高度分散和功能化。以纳米金为连接媒介将末端修饰有巯基的核酸适配体固定到表面带有巯基基团的 ...
【技术保护点】
1.一种用于赭曲霉毒素特异识别的POSS基有机‑无机杂化硅胶整体柱,其特征在于:以笼型低聚倍半多聚硅氧烷交联剂与多胺单体经亲核反应形成的具有高交联3D骨架、表面富含胺基的杂化硅胶整体柱为基质,高密度负载由抗赭曲霉毒素核酸适配体表面修饰的金纳米粒子,并利用纳米金氨基键合固定和自组装,形成所述用于赭曲霉毒素特异识别的有机‑无机杂化硅胶亲和整体柱。
【技术特征摘要】
1.一种用于赭曲霉毒素特异识别的POSS基有机-无机杂化硅胶整体柱,其特征在于:以笼型低聚倍半多聚硅氧烷交联剂与多胺单体经亲核反应形成的具有高交联3D骨架、表面富含胺基的杂化硅胶整体柱为基质,高密度负载由抗赭曲霉毒素核酸适配体表面修饰的金纳米粒子,并利用纳米金氨基键合固定和自组装,形成所述用于赭曲霉毒素特异识别的有机-无机杂化硅胶亲和整体柱。2.根据权利要求1所述的用于赭曲霉毒素特异识别的POSS基有机-无机杂化硅胶整体柱,其特征在于:所述笼型低聚倍半多聚硅氧烷交联剂为含环氧基团的笼型低聚倍半多聚硅氧烷,所述多胺单体为支化聚乙烯亚胺PEI1200。3.根据权利要求1所述的用于赭曲霉毒素特异识别的POSS基有机-无机杂化硅胶整体柱,其特征在于:所述抗赭曲霉毒素核酸适配体的碱基序列为5'-SH-C6-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3';所述金纳米粒子的粒径为10~15nm。4.一种制备如权利要求1-3任意一项所述的用于赭曲霉毒素特异识别的POSS基有机-无机杂化硅胶整体柱的方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)POSS基杂化硅胶整体柱基质的制备:按比例称取多胺单体、笼型低聚倍半多聚硅氧烷交联剂及由正丙醇、1,4-丁二醇和聚乙二醇组成的三元致孔剂,于离心管中振荡混匀,超声脱气使其形成均一溶液;然后将混合物注入经3-氨基丙基三乙氧基硅烷键合修饰的石英毛细管中,两端密封后置于50℃水浴锅中恒温反应16h;将制备好的整体柱取出,连接至液相色谱仪用高压溶剂泵,以甲醇为流动相冲洗整体柱2h,得到表面富含胺基的POSS基整体柱基质;(2)抗赭曲霉毒素核酸适配体表面修饰的纳米金粒子的制备:将表面修饰有抗赭曲霉毒素A的核酸适配体用8000r/min离心10min,然后加入pH7.4的缓冲液A进行稀释,再放置于90℃加热3min,冷却至室温后形成浓度为100μmol/L的核酸适配体储备溶液;按体积比40:60往40μL的核酸适配体储备溶液中加入5mmol/L三羧甲基磷酸,置于摇床中室温孵育1h以降解二硫键;加...
【专利技术属性】
技术研发人员:林旭聪,於霞,陈怡琼,谢增鸿,
申请(专利权)人:福州大学,
类型:发明
国别省市:福建,35
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