一种测定银杏叶中总黄酮含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定银杏叶中总黄酮含量的方法，属于化学检测领域，旨在提供一种重现性好、干扰因素少、方便快捷的测定银杏叶中总黄酮含量的ASE‑HPLC法。该方法采用ASE萃取法分别用正己烷和乙醇萃取粉碎后的银杏叶，并收集乙醇提取液后经盐酸处理得乙醇萃取液；并采用HPLC法测定乙醇萃取液中总黄酮的含量。本发明专利技术可代替药典中提取及测定银杏叶中总黄酮的方法。 1

【技术实现步骤摘要】
一种测定银杏叶中总黄酮含量的方法
本专利技术属于化学检测领域，尤其是一种测定银杏叶中总黄酮含量的方法。
技术介绍
银杏叶，为银杏科植物银杏GinkgobilobaL.的干燥叶。秋季叶尚绿时采收，及时干燥。一般为人工栽培。栽培地区北至辽宁，南达广东，东起浙江，西达陕西、甘肃、西南到四川、贵州、云南等地。具有活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂的功效；用于瘀血阻络，胸痹心痛，中风偏瘫，肺虚咳喘，高脂血症。银杏叶主要的药理作用的有效成分为黄酮类化合物，且含量较高。此类化合物具有防止心血管疾病的功能。但现如今还未有对银杏叶中的总黄酮的含量测定有系统的报道。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术旨在提供一种重现性好、干扰因素少、方便快捷的测定银杏叶中总黄酮含量的ASE-HPLC法。为了实现上述技术效果，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种测定银杏叶中总黄酮含量的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取法分别用正己烷和乙醇萃取粉碎后的银杏叶，并收集乙醇提取液后经盐酸处理得乙醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定乙醇萃取液中总黄酮的含量。进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将银杏叶粉碎，取1g与1g石英砂混合，并将其装于放有纤维滤膜的ASE萃取池中，并加石英砂至与池口平行；步骤S2：用正己烷萃取，收集药渣；步骤S3：用20ml乙醇对药渣进行萃取，收集萃取液；步骤S4：用乙醇将萃取液定容至25ml，作为备用液；步骤S5：取20ml备用液与5ml25％盐酸溶液混合，加热回流30min；步骤S6：冷却后，用乙醇将其定容至50ml，得乙醇萃取液。进一步的，步骤S2所述的萃取参数为：萃取温度为80℃，萃取时间为5min，萃取次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。进一步的，步骤S3所述的萃取参数为：萃取温度为120℃，萃取时间为5min，萃取次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为ACE,UltraCoreSuperC18；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为乙醇-0.4％磷酸溶液；检测波长为360nm。进一步的，所述的色谱柱的规格为：2.1*75mm，2.5μm。进一步的，流动相所述的乙醇-0.4％磷酸溶液的体积比为40：60。与传统方法相比，本专利技术具有以下优势：1.本专利技术参考药典方法，先用正己烷除杂，再用乙醇提取，获得良好的实验结果。2.本专利技术采用对一个样品进行多次萃取，并且萃取液收集到不同的收集瓶中以考察静态循环次数(1次、2次、3次)。此外，采用单因素考察方式，考察了萃取温度(80℃、100℃、120℃)、静态萃取时间(5min、8min、10min)等条件下的萃取效果，结果在提取温度120℃，提取时间5min，静态循环次数2次的条件下，获得最优结果。3.本专利技术提高了温度降低溶剂的黏度，减少溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加。4.由于液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力，萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态。附图说明图1为表1为槲皮素的浓度(μg)-峰面积的线性回归图；图2为山奈素浓度(μg)-峰面积的线性回归图；图3为异鼠李素浓度(μg)-峰面积的线性回归图；图4为快速溶剂萃取法提取样品的色谱图；图5为药典方法提取样品的色谱图。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围之内。实施例11仪器设备及试剂1.1仪器：电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、ThermoU3000UHPLC液相色谱仪1.2试剂：除特别注明外，本实验所用试剂均为分析纯水：符合GB/T6682规定的一级水；乙醇(CH4O)：色谱纯(液相色谱用)。2方法2.1对照品溶液的制备：取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含槲皮素30μg、山柰素30μg、异鼠李素20μg的混合溶液，即得。2.2供试品溶液的制备2.2.1《中国药典》2015年版一部制备供试品方法：本品中粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干，加乙醇回流提取4小时，提取液蒸干，残渣加乙醇-25％盐酸溶液(4:1)混合溶液25ml，加热回流30分钟，放冷，转移至50ml量瓶中，并加乙醇至刻度，摇匀，即得。2.2.2快速溶剂萃取法(ASE)制备供试品方法：步骤S1：将银杏叶粉碎，取1g与1g石英砂混合，并将其装于放有纤维滤膜的ASE萃取池中，并加石英砂至与池口平行；步骤S2：用正己烷萃取，收集药渣；步骤S3：用乙醇对药渣进行萃取，收集萃取液；步骤S4：用乙醇将萃取液定容至25ml，作为备用液；步骤S5：取20ml备用液与5ml25％盐酸溶液混合，加热回流30min；步骤S6：冷却后，用乙醇将其定容至50ml，得乙醇萃取液。2.3ASE萃取条件步骤S2所述的萃取参数为：萃取温度为80℃，萃取时间为5min，萃取次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。步骤S3所述的萃取参数为：萃取温度为120℃，萃取时间为5min，萃取次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。2.4色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙醇-0.4％磷酸溶液(40:60)为流动相；检测波长为360nm，理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500。2.5测定法按照高效液相色谱法(通则0512)测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮醇苷的含量。总黄酮醇苷含量＝(槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量)×2.51检测参数为：色谱柱为ACE,UltraCoreSuperC18，2.1*75mm，2.5μm；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为体积比为40：60的乙醇-0.4％磷酸溶液；检测波长为360nm。2.6标准限值要求本品按干燥品计算，含总黄酮醇苷不得少于0.40％。2.7计算(外标法)式中CR——对照品溶液浓度，单位为微克每升(mg/L)；AX——供试品的峰面积；AR——对照品峰面积。注意：使用前萃取池底部应拆卸清理干净，否则容易引起压力不稳；萃取池底部的滤纸应在密封圈内，否则引起渗漏；萃取池装样时松紧适中，太松容易导致提取液过多；开机前检查气瓶气压是否达到1Mpa；使用结束后清理干净，萃取池要及时晾干(容易生锈)。3结果3.1线性关系取槲皮素(浓度：0.03943mg/ml)、山奈素(浓度：0.03469mg/ml)及异鼠李素(浓度：0.02142mg/ml)对照品混合溶液分别精密吸取该溶液0.1μl、0.2μl、0.5μl、1.0μl、2μl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果见表1-表3。其中表1为槲皮素线性实验结果；表2为山奈素线性实验结果；表3为异鼠李素线性实验结果。表1浓度(μg)第一针峰面本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定银杏叶中总黄酮含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：

【技术特征摘要】
1.一种测定银杏叶中总黄酮含量的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取法分别用正己烷和乙醇萃取粉碎后的银杏叶，并收集乙醇提取液后经盐酸处理得乙醇萃取液；步骤2：采用HPLC法测定乙醇萃取液中总黄酮的含量。2.根据权利要求1所述的一种测定银杏叶中总黄酮含量的方法，其特征在于，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将银杏叶粉碎，取1g与1g石英砂混合，并将其装于放有纤维滤膜的ASE萃取池中，并加石英砂至与池口平行；步骤S2：用正己烷萃取，收集药渣；步骤S3：用20ml乙醇对药渣进行萃取，收集萃取液；步骤S4：用乙醇将萃取液定容至25ml，作为备用液；步骤S5：取20ml备用液与5ml25％盐酸溶液混合，加热回流30min；步骤S6：冷却后，用乙醇将其定容至50ml，得乙醇萃取液。3.根据权利要求2所述的一种测定银杏叶中总黄酮含量的方法，其特征在于，步骤S2所述的萃取...

【专利技术属性】
技术研发人员：张云平，王华，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45