铁皮石斛酵素的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种铁皮石斛酵素的制备方法及应用。本发明专利技术采用简易的发酵方式来制备铁皮石斛酵素，其制备方法简单易行，适合于批量生产，并且申请人还发现，所获得的铁皮石斛酵素具有良好的抗抗氧化效用，适合将其应用在抗氧化食品的制备。 1

Preparation and application of Dendrobium candidum

The invention discloses a preparation method and application of Dendrobium candidum ferment. The invention adopts simple fermentation method to prepare Dendrobium candidum enzyme. The preparation method is simple and suitable for mass production, and the applicant also finds that the obtained candidum candidum enzyme has good antioxidation effect and is suitable for the preparation of antioxidant food. One

【技术实现步骤摘要】
铁皮石斛酵素的制备方法及应用
本专利技术涉及中药材加工
，具体为一种铁皮石斛酵素的制备方法及应用。
技术介绍
铁皮石斛为兰科植物DendrobiumofficinaleKimuraetMigo的干燥茎，自1963年《中国药典》就有收载铁皮石斛。铁皮石斛在民间素有“救命仙草”之称，具有“滋阴清热，益胃生津”之功效，成书于1000多年前的《道藏》尊其为“中华九大仙草”之首。在2012年，根据《食品安全法》和《新资源食品管理办法》的规定，经新资源食品评审专家委员会审核，拟批准铁皮石斛原球茎为新资源食品。酵素是“酶(Enzyme)”的旧称，在生物体内以催化剂的形式发挥作用。目前酵素分为广义的酵素(Ferments)和狭义的酵素。广义酵素强调微生态整体。而与酶同义的酵素可认为是狭义的酵素。我国有利用天然药材的传统习俗含有酵素药材，如麦芽、鸡内金、神曲等。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种铁皮石斛酵素的制备方法及应用，它简单易行，且获得的产品具有良好的抗氧化效用。为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：铁皮石斛酵素的制备方法，将铁皮石斛原料洗净后切成段，将切好的铁皮石斛段加入水及红糖，充分混合均匀后，在室温下密封放置50-80天，期间每隔10天放气一次；发酵时间结束后，将发酵液进行过滤，取滤液获得铁皮石斛酵素。所述的切好的铁皮石斛段与水的料液比为30:100，单位是g/ml；切好的铁皮石斛段与红糖的质量比为3:2。铁皮石斛酵素在抗氧化食品中的应用。有益效果本专利技术具备以下有益效果：本专利技术采用简易的发酵方式来制备铁皮石斛酵素，其制备方法简单易行，适合于批量生产，并且申请人还发现，所获得的铁皮石斛酵素具有良好的抗抗氧化效用，适合将其应用在抗氧化食品的制备。附图说明图1200nm高效液相图谱；图2205nm高效液相图谱；图3254nm高效液相图谱。具体实施方式本专利技术的实施例：铁皮石斛酵素的制备方法，将铁皮石斛原料洗净后切成段，将切好的铁皮石斛段加入水及红糖，切好的铁皮石斛段与水的料液比为30:100，单位是g/ml；切好的铁皮石斛段与红糖的质量比为3:2，充分混合均匀后，在室温下密封放置50-80天，期间每隔10天放气一次；发酵时间结束后，将发酵液进行过滤，取滤液获得铁皮石斛酵素。为了验证铁皮石斛酵素的抗氧化效用，申请人进行了如下实验：1材料与方法1.1材料与试剂铁皮石斛鲜品由贵州涵龙生物科技有限公司提供，经贵阳中医学院魏生华鉴定为兰科植物铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMigo)的干燥茎。上水井红糖重庆九区食品厂；1，1-二苯基苦基苯肼(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)，2，4，6-三吡啶基三嗪(TPTZ)，2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)，维生素C(L-抗坏血酸)均购于Sigma公司；三氯化铁，硫酸亚铁，甲醇，无水乙醇，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，可溶性淀粉，酚酞，过硫酸钾均为国产分析纯；自制蒸馏水；玉米油购于北京艾森绿宝油脂有限公司。1.2仪器与设备UV-2300紫外可见分光光度计上海元析仪器有限公司，TAISITE恒温水浴锅天津泰斯特仪器有限公司，CJJ78-1磁力搅拌器上海垒固仪器有限公司；S433D全自动氨基酸分析仪赛卡姆(北京)科学仪器有限公司；TTL-DCII氮吹仪同泰联科技有限公司。1.3方法1.3.1铁皮石斛酵素的制备铁皮石斛原料→洗净→切段→取30g铁皮石斛放入瓶子→加入100mL水及10g红糖→密封置室温条件下存放→每隔10天放气一次→2个月后过滤→紫外照射2h中止发酵[6-9]。1.3.2铁皮石斛酵素氨基酸成分分析1.3.2.1铁皮石斛酵素前处理吸取酒样200μL于10mL玻璃管中，用氮吹仪吹至全干，用2mL样品稀释液复溶，上机待测。1.3.2.2色谱分析条件色谱柱:LCAK07/Li；进样量为50μL；检测波长为570nm,440nm；茹三酮流速为0.25mL/min，流动相流速为0.45mL/min；反应器温度为130℃；流动相梯度见表1。表1.流动相洗脱梯度1.3.3铁皮石斛酵素抗氧化实验1.3.3.1铁皮石斛酵素总抗氧化能力的测定(1)TPTZ工作液的配制将0.3mol·L-1醋酸钠缓冲溶液(调至pH为3.6)、0.01mol·L-12，4，6-三吡啶基三嗪(TPTZ)溶液(溶解在0.04mol·L-1的HCl中)及0.02mol·L-1三氯化铁溶液以10﹕1﹕1(v﹕v﹕v)的比例混合，即得TPTZ工作液。(2)铁皮石斛酵素总抗氧化能力的测定方法采用FRAP法，在试管中分别精密2mL样品溶液和2mLTPTZ工作液，,混匀后，25℃避光反应10min，在593nm下测定吸光度[11-13]，以VC做阳性对照。以FeSO4为标准物质绘制标准曲线(见图1)，求得回归方程为Y＝5.298X+0.0679，相关系数为R2＝0.9996，样品的抗氧化能力以FRAP值表示:1FRAP单位＝1mmol/LFeSO4，即样品的抗氧化能力相当于FeSO4的mmol/L数。1.3.3.2铁皮石斛酵素清除DPPH自由基能力的测定(1)DPPH工作液的配制准确称取19.7mgDPPH，用甲醇溶解，定容到50mL,即得DPPH储备液，于4℃下保存。实验前移15mLDPPH储备液，用甲醇定容到100mL，制成浓度为0.15mmol·L-1的工作液。(2)铁皮石斛酵素清除DPPH自由基能力的测定在试管中加入3.2mL0.15mmol·L-1的DPPH溶液，再加0.8mL样品溶液，将其混匀后，25℃避光反应30min，于517nm波长下测定吸光度，VC作为阳性对照[14-15]。测吸光度，按式(1)计算DPPH自由基的清除率(％)。清除率＝(A0-Aj)/A0×100％(1)式中A0为DPPH溶液和双蒸水混合液的吸光度，Aj为样品和DPPH混合液的吸光度。1.3.3.3铁皮石斛酵素清除ABTS自由基能力测定[16-17](1)ABTS自由基工作液的配制精密称定0.3841gABTS和0.0662gK2S2O8于烧杯中，并用蒸馏水定容至100mL，使得ABTS的终浓度为7mmol·L-1，过硫酸钾的终浓度为2.45mmol·L-1。将混合液在常温下暗处放置12-16h，实验前用甲醇稀释，使其在734nm波长下吸光度为0.8左右的ABTS+·工作液。(2)铁皮石斛清除ABTS自由基能力的测定以VC为阳性对照，向试管中加入3mLABTS+·工作液，再加入0.3mL不同浓度样品溶液，将其混匀后，25℃避光反应10min，在732nm波长处测定样品的吸光度.按式(2)计算ABTS自由基的清除率(％)。清除率＝(A01-Aj1)/A0×100％(2)式中A01为ABTS溶液和双蒸水混合液的吸光度，Aj1为样品和ABTS混合液的吸光度。1.3.4铁皮石斛酵素内酶活力的测定1.3.4.1铁皮石斛酵素内SOD活性的测定铁皮石斛酵素内SOD活性的测定参考SOD试剂盒的方法进行测定。1.3.4.2铁皮石斛酵素内淀粉酶活性的测定铁皮石斛酵素淀粉酶活性测定用淀粉-碘显色法[18]。1.3.4.4铁皮石斛酵素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种铁皮石斛酵素的制备方法，其特征在于：将铁皮石斛原料洗净后切成段，将切好

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛酵素的制备方法，其特征在于：将铁皮石斛原料洗净后切成段，将切好的铁皮石斛段加入水及红糖，充分混合均匀后，在室温下密封放置50-80天，期间每隔10天放气一次；发酵时间结束后，将发酵液进行过滤，取滤液获得铁皮石斛酵素。2.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：林冰，孙悦，周英，彭礼军，陈琳，邹璐，何怡，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52