酞菁染料偶联物的制造方法及稳定偶联物技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】酞菁染料偶联物的制造方法及稳定偶联物本申请要求2015年8月18日提交的、名称为“酞菁染料－大分子偶联物的制造方法及稳定偶联物”的美国临时专利申请第62/206,774号的优先权，通过引用将其全部内容纳入本文。通过引用纳入的序列表本申请以电子形式提交了序列表。该序列表以文件名751702000140seqlist.txt提供，创建于2016年8月17日，大小为9,861字节。该序列表的电子形式的信息全部通过引用纳入本文。
在一些方面，本专利技术涉及一种含有酞菁染料的偶联物的制造方法，该方法包括制备或制造偶联物、配制偶联物、将偶联物包装起来用于储存的一个或多个步骤。在一些方面，所述制造方法可产生稳定偶联物。在一些方面，本专利技术还涉及稳定的酞菁染料偶联物、含有所述稳定偶联物的组合物和制品、以及将它们给予光免疫疗法的对象的方法。在一些实施方式中，所述酞菁染料偶联物与抗体之类的靶向性分子偶联，该靶向性分子例如通过与细胞表面蛋白结合来将偶联物靶向至细胞或病原体。
技术介绍
多种疗法可用来治疗癌症之类的疾病。例如，光免疫疗法(PIT)是使用与抗体或其它靶向性分子偶联的光敏剂来靶向细胞表面受体之类的细胞表面靶分子、从而实现特定细胞的靶向杀伤的方法。在一些情况下，PIT可选择性地靶向肿瘤细胞之类的疾病细胞，从而选择性地杀伤这些细胞而不伤及健康细胞。需要改良策略来改良用于该方法的酞菁染料偶联物，例如在用于PIT时使光降解最小化或避免光降解并改善偶联物的活性。本专利技术提供满足这些要求的方法和偶联物。
技术实现思路
在一些实施方式中，提供酞菁染料偶联物的制造方法。在一些实施方式...
【技术保护点】
酞菁染料－靶向性分子偶联物的制造方法，其包括：a)在制造包含与靶向性分子连接的酞菁染料的偶联物的条件下，将所述靶向性分子与所述酞菁染料接触；以及b)在药学上可接受的缓冲液中配制所述偶联物；其中，在各步骤a)～b)中：所述染料和偶联物所暴露的光仅具有约400nm～约650nm范围内的波长，或者所述染料和偶联物所暴露的光仅具有小于500勒克斯的强度。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.18 US 62/206,7741.酞菁染料－靶向性分子偶联物的制造方法，其包括：a)在制造包含与靶向性分子连接的酞菁染料的偶联物的条件下，将所述靶向性分子与所述酞菁染料接触；以及b)在药学上可接受的缓冲液中配制所述偶联物；其中，在各步骤a)～b)中：所述染料和偶联物所暴露的光仅具有约400nm～约650nm范围内的波长，或者所述染料和偶联物所暴露的光仅具有小于500勒克斯的强度。2.酞菁染料－靶向性分子偶联物的制造方法，其包括：a)在制造包含与靶向性分子共价连接的酞菁染料的偶联物的条件下，将靶向性分子与酞菁染料以染料比靶向性分子为约1:1～1000:1的摩尔比接触；以及b)在药学上可接受的缓冲液中将所述偶联物配制成约0.01mg/mL～约200.0mg/mL的浓度；其中，在各步骤a)～b)中：所述染料和偶联物所暴露的光仅具有约400nm～约650nm范围内的波长，或者所述染料和偶联物所暴露的光仅具有小于500勒克斯的强度。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述偶联物配制成约0.01mg/mL～约200.0mg/mL或约0.5mg/mL～约10.0mg/mL的浓度。4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述偶联物配制成约0.5mg/mL～约5.0mg/mL的浓度。5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，在所述接触步骤之前，在所述染料所暴露的光仅具有约400nm～约650nm范围内的波长、或者所述染料所暴露的光仅具有小于500勒克斯的强度的条件下，将所述酞菁染料溶解于溶剂。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述染料以约0.1mg/mL～约100mg/mL范围内的浓度溶解于溶剂。7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述染料以约1mg/mL～约50mg/mL的浓度溶解于溶剂。8.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其特征在于，所述酞菁染料在溶剂中的浓度为约10mg/mL。9.如权利要求5～8中任一项所述的方法，其特征在于，所述溶剂选自二甲亚砜(DMSO)或DMF和水基溶剂。10.如权利要求5～9中任一项所述的方法，其特征在于，所述溶剂是DMSO。11.如权利要求1～10中任一项所述的方法，其特征在于，所述配制步骤包括浓缩所述偶联物。12.如权利要求1～11中任一项所述的方法，其特征在于，所述接触步骤在约4℃～约37℃的温度下进行至少15分钟。13.如权利要求1～12中任一项所述的方法，其特征在于，所述接触步骤进行90分钟～150分钟。14.如权利要求1～13中任一项所述的方法，其特征在于，所述接触步骤在约25℃±1.0℃的温度下进行。15.如权利要求1～14中任一项所述的方法，其特征在于，所述酞菁染料与所述靶向性分子共价或非共价连接。16.如权利要求1～14中任一项所述的方法，其特征在于，所述酞菁染料包含反应性化学基团，且通过将所述酞菁染料与靶向性分子接触，制得的偶联物包含与所述靶向性分子的连接基团共价结合的酞菁染料。17.如权利要求16所述的方法，其中还包括在所述接触步骤之前将所述偶联物骤冷，其特征在于：所述偶联物在所述骤冷步骤中所暴露的光仅具有约400nm～约650nm范围内的波长，或者所述偶联物在所述骤冷步骤中所暴露的光仅具有小于500勒克斯的强度。18.如权利要求1～17中任一项所述的方法，其特征在于，所述配制步骤包括超滤、渗滤或透析。19.如权利要求1～18中任一项所述的方法，其特征在于，还包括使所述偶联物进行无菌过滤。20.如权利要求1～19中任一项所述的方法，其特征在于，还包括d)将所述偶联物包装在一个或多个避光容器内，其中，在所述包装步骤期间：所述偶联物所暴露的光仅具有约400nm～约650nm范围内的波长，或者所述染料和偶联物所暴露的光仅具有小于500勒克斯的强度。21.酞菁染料－靶向性分子偶联物的制造方法，其包括：a)将酞菁染料以约0.1～100mg/mL的浓度溶解于溶剂；b)在制造含有与靶向性分子连接的酞菁染料的偶联物的条件下，将所述靶向性分子与所述酞菁染料以染料比靶向性分子为1:1～1000:1的摩尔比接触；c)在药学上可接受的缓冲液中将所述偶联物配制成约0.01～约200.0mg/mL的浓度；以及d)将所述偶联物包装在一个或多个避光容器内；其中，在各步骤a)～d)中：所述染料和偶联物所暴露的光仅具有约400nm～约650nm范围内的波长，或者所述染料和偶联物所暴露的光仅具有小于500勒克斯的强度。22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述酞菁染料与所述靶向性分子共价或非共价连接。23.如权利要求21或22所述的方法，其特征在于，所述酞菁染料包含反应性化学基团，且通过将所述酞菁染料与靶向性分子接触，制得的偶联物包含与所述靶向性分子的连接基团共价结合的酞菁染料。24.如权利要求1～23中任一项所述的方法，其特征在于，在所述方法中，所述染料和偶联物在任何光下的总暴露量不超过5000勒克斯小时、不超过2500勒克斯小时、不超过1000勒克斯小时、不超过500勒克斯小时、不超过250勒克斯小时、不超过100勒克斯小时或不超过80勒克斯小时。25.如权利要求20～24中任一项所述的方法，其特征在于，在所述包装步骤中，所述偶联物在任何光下的总暴露量不超过5000勒克斯小时、不超过2500勒克斯小时、不超过1000勒克斯小时、不超过500勒克斯小时、不超过250勒克斯小时、不超过100勒克斯小时或不超过80勒克斯小时。26.如权利要求1～25中任一项所述的方法，其特征在于，所述染料的最大吸收波长为约600nm～约850nm。27.如权利要求1～26中任一项所述的方法，其特征在于，所述染料的最大吸收波长为约650nm～约850nm。28.如权利要求1～27中任一项所述的方法，其特征在于，所述染料的最大吸收波长为约680nm～约850nm。29.如权利要求1～28中任一项所述的方法，其特征在于，所述酞菁染料包含下式的化合物：其中：L是接头；Q是用于将染料与靶向性分子连接的反应性基团；R2、R3、R7和R8各自独立地选自任选取代的烷基和任选取代的芳基；R4、R5、R6、R9、R10和R11各自独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的烷酰基、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的烷基氨基甲酰基和螯合配体，其中，R4、R5、R6、R9、R10和R11中的至少一个包含水溶性基团；R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22和R23各自独立地选自氢、卤素、任选取代的烷硫基、任选取代的烷基氨基和任选取代的烷氧基；并且X2和X3各自独立地是C1～C10亚烷基，任选地被杂原子隔开。30.如权利要求1～29中任一项所述的方法，其特征在于，所述反应性基团选自胺反应性化学基团、巯基反应性化学基团、活化酯、酰基卤、烷基卤、酸酐、羧酸、碳二亚胺、碳酸酯、氨基甲酸酯、卤代乙酰胺、异氰酸酯、异硫氰酸酯、马来酰亚胺、亚磷酰胺、铂络合物、磺酸酯和硫氰酸酯。31.如权利要求30所述的方法，其特征在于，所述反应性化学基团是选自马来酰亚胺、卤代乙酰基和吡啶基二硫化物的巯基反应性化学基团。32.如权利要求1～30中任一项所述的方法，其特征在于，所述酞菁染料与所述靶向性分子的赖氨酸残基共价结合。33.如权利要求32所述的方法，其特征在于，所述反应性基团是作为胺反应性化学基团的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯。34.如权利要求1～30及32～33中任一项所述的方法，其特征在于，所述酞菁染料包含下式的化合物：其中：X1和X4各自独立地是C1～C10亚烷基，任选地被杂原子隔开；R2、R3、R7和R8各自独立地选自任选取代的烷基和任选取代的芳基；R4、R5、R6、R9、R10和R11各自独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的烷酰基、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的烷基氨基甲酰基和螯合配体，其中，R4、R5、R6、R9、R10和R11中的至少一个包含水溶性基团；并且R16、R17、R18和R19各自独立地选自氢、卤素、任选取代的烷硫基、任选取代的烷基氨基和任选取代的烷氧基。35.如权利要求1～34中任一项所述的方法，其特征在于，所述酞菁染料包含IRDye700DX-NHS(IR700-NHS)。36.如权利要求1～35中任一项所述的方法，其特征在于，所述靶向性分子直接或间接地与抗原或蛋白质结合。37.如权利要求36所述的方法，其特征在于，所述靶向性分子是与第一结合性分子结合的第二结合性分子，所述第一结合性分子能够与所述抗原或蛋白质结合。38.如权利要求36或37所述的方法，其特征在于，所述靶向性分子是第二抗体。39.如权利要求1～38中任一项所述的方法，其特征在于，所述靶向性分子与细胞或病原体表面上的细胞表面靶分子结合。40.如权利要求39所述的方法，其特征在于，所述细胞是干细胞、增殖性细胞、增生中的细胞或被病原体感染的细胞。41.如权利要求39或40所述的方法，其特征在于，所述病原体选自病毒、细菌、真菌、生物膜或其它原核细胞系统。42.如权利要求39或40所述的方法，其特征在于，所述细胞是癌细胞、肿瘤细胞、炎性细胞或神经元。43.如权利要求39～42中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞存在于与疾病或病症有关的损害的微环境中。44.如权利要求43所述的方法，其特征在于，所述损害是肿瘤，且所述细胞是癌细胞或肿瘤细胞。45.如权利要求39或40所述的方法，其特征在于，所述细胞是癌症干细胞或循环肿瘤细胞。46.如权利要求42所述的方法，其特征在于，所述炎性细胞是选自中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的白细胞。47.如权利要求42所述的方法，其特征在于，所述神经元是外周神经系统神经元或中枢神经系统神经元。48.如权利要求42或47所述的方法，其特征在于，所述神经元是选自温度性伤害感受器、机械性伤害感受器、化学性伤害感受器和多形性伤害感受器的伤害感受器。49.如权利要求39～48中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞表面靶分子包括抗原、多肽、脂质或碳水化合物、或者它们的组合。50.如权利要求39～49中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞表面靶分子选自细胞膜磷脂、原核肽聚糖、细菌细胞包膜蛋白、病毒衣壳蛋白、ACTHR、内皮细胞Anxa-1、氨肽酶N、抗-IL-6R、α-4-整联蛋白、α-5-β-3-整联蛋白、α-5-β-5-整联蛋白、甲胎蛋白(AFP)、ANPA、ANPB、APA、APN、APP、1AR、2AR、AT1、B1、B2、BAGE1、BAGE2、B-细胞受体BB1、BB2、BB4、降钙素受体、癌抗原125(CA125)、CCK1、CCK2、CD5、CD10、CD11a、CD13、CD14、CD19、CD20、CD22、CD25、CD30、CD33、CD38、CD45、CD52、CD56、CD68、CD90、CD133、CD7、CD15、CD34、CD44、CD206、CD271、CEA(癌胚抗原)、CGRP、趋化因子受体、细胞表面膜联蛋白-1、细胞表面网蛋白-1、Cripto-1、CRLR、CXCR2、CXCR4、DCC、DLL3、E2糖蛋白、EGFR、EGFRvIII、EMR1、内皮唾液酸蛋白、EP2、EP4、EpCAM、EphA2、ET受体、纤连蛋白、纤连蛋白ED-B、FGFR、卷曲受体(frizzledreceptors)、GAGE1、GAGE2、GAGE3、GAGE4、GAGE5、GAGE6、GLP-1受体、A族(视紫红质样)的G-蛋白偶联受体、B组(分泌素受体样)的G-蛋白偶联受体、C族(代谢型谷氨酸盐受体样)的G-蛋白偶联受体、GD2、GP100、GP120、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、血凝素、硫酸肝素、HER1、HER2、HER3、HER4、HMFG、HPV16/18和E6/E7抗原、hTERT、IL11-R、IL-13R、ITGAM、激肽释放酶-9、LewisY、LH受体、LHRH-R、LPA1、MAC-1、MAGE1、MAGE2、MAGE3、MAGE4、MART1、MC1R、间皮素、MUC1、MUC16、Neu(细胞表面核仁素)、脑啡肽酶、神经菌毛素-1、神经菌毛素-2、NG2、NK1、NK2、NK3、NMB-R、Notch-1、NY-ESO-1、OT-R、突变型p53、p97黑色素瘤抗原、NTR2、NTR3、p32(p32/gC1q-R/HABP1)、p75、PAC1、PAR1、补缀(Patched)(PTCH)、PDGFR、PDFG受体、PDT、蛋白酶剪切胶原IV、蛋白水解酶3、抑制素、蛋白酪氨酸激酶7、PSA、PSMA、嘌呤能P2X家族(如P2X1-5)、突变型Ras、RAMP1、RAMP2、RAMP3补缀、RET受体、丛蛋白、平滑(smoothened)、sst1、sst2A、sst2B、sst3、sst4、sst5、P物质、TEMs、T细胞CD3受体、TAG72、TGFBR1、TGFBR2、Tie-1、Tie-2、Trk-A、Trk-B、Trk-C、TR1、TRPA、TRPC、TRPV、TRPM、TRPML、TRPP(如TRPV1-6、TRPA1、TRPC1-7、TRPM1-8、TRPP1-5、TRPML1-3)、TSH受体、VEGF受体(VEGFR1或Flt-1、VEGFR2或FLK-1/KDR、及VEGF-3或FLT-4)、电压门控离子通道、VPAC1、VPAC2、维尔姆斯瘤1、Y1、Y2、Y4和Y5。51.如权利要求39～50中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞表面靶分子选自HER1/EGFR、HER2/ERBB2、CD20、CD25(IL-2Rα受体)、CD33、CD52、CD133、CD206、CEA、CEACAM1、CEACAM3、CEACAM5、CEACAM6、癌抗原125(CA125)、甲胎蛋白(AFP)、LewisY、TAG72、Caprin-1、间皮素、PDGF受体、PD-1、PD-L1、CTLA-4、IL-2受体、血管内皮生长因子(VEGF)、CD30、EpCAM、EphA2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、gpA33、粘蛋白、CAIX、PSMA、叶酸盐结合蛋白、神经节苷脂(如GD2、GD3、GM1和GM2)、VEGF受体(VEGFR)、VEGFR2、VEGF-A、整联蛋白αVβ3、整联蛋白α5β1、ERBB3、MET、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2、RANKL、FAP、生腱蛋白、AFP、BCR复合物、CD3、CD18、CD44、CTLA-4、gp72、HLA-DR10β、HLA-DR抗原、IgE、MUC-1、nuC242、PEM抗原、金属蛋白酶、蝶素(Ephrin)受体、蝶素配体、HGF受体、CXCR4、CXCR4、铃蟾肽受体、SK-1抗原、Bcr-abl、RET、MET、TRKB、TIE2、ALK、ROS、EML4-ALK、ROS1、BRAFV600E、SRC、c-KIT、PDGFR、mTOR、TSC1、TSC2、BTK、KIT、BRCA、CDK4/6、JAK1、JAK2、BRAF、FLT-3、MEK1、MEK2和SMO。52.如权利要求39～51中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞表面靶分子是HER1/EGFR、HER2、PD-L1、CD25、EpCAM、EphA2、CD206、CD20、CD44、CD133、间皮素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3或癌胚抗原(CEA)。53.如权利要求1～52中任一项所述的方法，其特征在于，所述靶向性分子的至少一部分选自蛋白质、糖蛋白、抗体、抗体片段、抗原、抗原结合片段、肽、多肽、组织归巢肽、小分子、聚合物合成分子、聚合物纳米颗粒、脂质体、酶底物、激素、神经递质、细胞代谢物、病毒颗粒、病毒衣壳、病毒纳米颗粒、细菌颗粒、标记物、细胞、半抗原、亲和素、链霉亲和素、单体链霉亲和素、生物素、碳水化合物、寡糖、多糖、核酸、脱氧核酸、DNA片段、RNA片段、适体、核苷酸三磷酸、无环鸟苷终止子三磷酸或PNA、或它们的组合。54.如权利要求1～53中任一项所述的方法，其特征在于，所述靶向性分子是组织特异性归巢肽。55.如权利要求54所述的方法，其特征在于，所述归巢肽具有SEQIDNO：1～52中任一项所列的氨基酸序列。56.如权利要求1～53中任一项所述的方法，其特征在于，所述靶向性分子是RGD多肽、iRGD多肽、Lyp-1多肽、cripto-1结合多肽、促生长素抑制素受体结合多肽、抑制素结合多肽、NGR多肽、iNGR多肽或可激活细胞穿透肽(ACPP)，该可激活细胞穿透肽由聚阳离子细胞穿透肽(CPP)通过可切割接头与中和性聚阴离子连接而构成。57.如权利要求1～53中任一项所述的方法，其特征在于，所述靶向性分子选自促肾上腺皮质激素(ACTH)、血管紧张素II、心房钠尿因子(ANF)、铃蟾肽、缓激肽、脑源性神经营养因子(BDNF)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、骨形态发生蛋白6(BMP-6)、骨形态发生蛋白7(BMP-7)、降钙素、心肌营养素1(BMP-2)、CD22、CD40、胆囊收缩素(CCK)、睫状节神经细胞营养因子(CNTF)、CCL1-CCL28、CXCL1-CXCL17、XCL1、XCL2、CX3CL1、cripto1结合肽、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、内皮素1、内皮素1/3、FAS配体、成纤维细胞生长因子1(FGF-1)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、成纤维细胞生长因子4(FGF-4)、成纤维细胞生长因子5(FGF-5)、成纤维细胞生长因子6(FGF-6)、成纤维细胞生长因子1(FGF-7)、成纤维细胞生长因子1(FGF-10)、Flt-3、胃泌素、胃泌素释放肽(GRP)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、胰高血糖素样肽(GLP-1)、肝细胞生长因子(HGF)、α干扰素(IFN-a)、β干扰素(IFN-b)、γ干扰素(IFNg)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素3(IL-3)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素5(IL-5)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素7(IL-7)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素9(IL-9)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素11(IL-11)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素13(IL-13)、白细胞介素15(IL-15)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素19(IL-19)、黄体生成素(LH)、黄体生成素释放激素(LHRH)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白3a(MIP-3a)、巨噬细胞炎性蛋白3b(MIP-3b)、神经生长因子(NGF)、神经介素B、神经营养因子3(NT-3)、神经营养因子4(NT-4)、神经降压素、神经肽Y、催产素、垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)、血小板衍生生长因子AA(PDGF-AA)、血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)、血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)、血小板衍生生长因子CC(PDGF-CC)、血小板衍生生长因子DD(PDGF-DD)、导蛋白-1(NTN1)、导蛋白-2(NTN2)、导蛋白-4(NTN4)、导蛋白-G1(NTNG1)和导蛋白-G2(NTNG2)、蝶素A1(EFNA1)、蝶素A2(EFNA2)、蝶素A3(EFNA3)、蝶素A4(EFNA4)、蝶素A5(EFNA5)、脑信号蛋白3A(SEMA3A)、脑信号蛋白3B(SEMA3B)、脑信号蛋白3C(SEMA3C)、脑信号蛋白3D(SEMA3D)、脑信号蛋白3F(SEMA3F)、脑信号蛋白3G(SEMA3G)、脑信号蛋白4A(SEMA4A)、脑信号蛋白4B(SEMA4B)、脑信号蛋白4C(SEMA4C)、脑信号蛋白4D(SEMA4D)、脑信号蛋白4F(SEMA4F)、脑信号蛋白4G(SEMA4G)、脑信号蛋白5A(SEMA5A)、脑信号蛋白5B(SEMA5B)、脑信号蛋白6A(SEMA6A)、脑信号蛋白6B(SEMA6B)、脑信号蛋白6D(SEMA6D)、脑信号蛋白7A(SEMA7A)、SLIT1、SLIT2、SLIT3、SLIT和NTRK样家族成员1(SLITRK1)、SLIT和NTRK样家族成员2(SLITRK2)、SLIT和NTRK样家族成员3(SLITRK3)、SLIT和NTRK样家族成员4(SLITRK4)、SLIT和NTRK样家族成员5(SLITRK5)、SLIT和NTRK样家族成员6(SLITRK6)、前列腺素E2(PGE2)、RANTES、促生长素抑制素-14、促生长素抑制素-28、干细胞因子(SCF)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)、P物质、促甲状腺激素(TSH)、转化生长因子α(TGF-α)、转化生长因子β(TGF-b)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、凝血酶、血管活性肠肽(VIP)、Wntl、Wnt2、Wnt2b/13、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt7c、Wnt8、Wnt8a、Wnt8b、Wnt8c、Wntl0a、Wntl0b、Wnt11、Wnt14、Wnt15或Wnt16、音猬因子、沙漠刺猬因子和印度刺猬因子。58.如权利要求1～53中任一项所述的方法，其特征在于，所述靶向性分子是抗体或抗体片段。59.如权利要求58所述的方法，其特征在于，所述抗体选自西妥昔单抗、帕尼单抗、扎卢木单抗、尼妥珠单抗、曲妥珠单抗、Ado-曲妥珠单抗美坦新、托西莫单抗利妥昔单抗(Rituxan、Mabthera)、替伊莫单抗(Zevalin)、达珠单抗(Zenapax)、吉姆单抗(Mylotarg)、阿仑单抗、CEA-扫描Fab片段、OC125单克隆抗体、ab75705、B72.3、贝伐单抗阿法替尼、阿西替尼、博舒替尼、卡博替尼、色瑞替尼、克唑替尼、达拉非尼、达沙替尼、埃罗替尼、依维莫司、依鲁替尼、伊马替尼、拉帕替尼、乐伐替尼、尼洛替尼、奥拉帕尼、帕博西尼、帕唑帕尼、帕妥珠单抗、雷莫芦单抗、瑞格非尼、鲁索替尼、索拉非尼、舒尼替尼、坦西莫司、曲美替尼、凡德他尼、维罗非尼、维莫德吉、巴利昔单抗、伊匹单抗、纳武单抗、派姆单抗、BMS－935559、MPDL3280A、皮地利珠单抗(Pidilizumab)(CT-011)、AMP-224、MSB001078C和MEDI4736，或者是其抗原结合片段。60.如权利要求58所述的方法，其特征在于，所述抗体与选自HER1/EGFR、HER2、PD-L1和癌胚抗原(CEA)的细胞表面靶分子结合。61.如权利要求58～60中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体选自西妥昔单抗、帕尼单抗、曲妥珠单抗、BMS-935559、MEDI4736、MPDL3280A和MSB0010718C，或者是其抗原结合片段。62.如权利要求1～61中任一项所述的方法，其特征在于，所述染料－靶向性分子偶联物选自西妥昔单抗-IR700、帕尼单抗-IR700、曲妥珠单抗-IR700、BMS-935559-IR700、MEDI4736-IR700、MPDL3280A-IR700和MSB0010718C-IR700。63.如权利要求1～62中任一项所述的方法，其特征在于，步骤b)中的所述靶向性分子与所述酞菁染料以染料比靶向性分子为1:1～100:1或1:1～10:1的摩尔比接触。64.如权利要求1～63中任一项所述的方法，其特征在于，染料比靶向性分子的摩尔比至少为约4:1或至少为约10:1。65.如权利要求1～64中任一项所述的方法，其特征在于，所制备的偶联物相对于每一个靶向性分子包含约1～约1000个酞菁染料分子、约1～约10个酞菁染料分子或约2～约5个酞菁染料分子。66.如权利要求1～65中任一项所述的方法，其特征在于，所述偶联物配制成约1.0～约5.0mg/mL的浓度。67.如权利要求1～66中任一项所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的缓冲液是磷酸盐缓冲盐水。68.如权利要求1～67中任一项所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的缓冲液具有约pH6.0～约pH8.0的pH，其中所述偶联物在多于3个月的时间内稳定。69.如权利要求68所述的方法，其特征在于，如果所述偶联物与储存前的偶联物相比在多于3个月的时间内保持大于约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高的效价、活性或纯度，则所述偶联物在这段时间内是稳定的。70.如权利要求68所述的方法，其特征在于，如果多于90％的所述偶联物作为主要单体成分存在，则所述偶联物是稳定的。71.如权利要求68～70中任一项所述的方法，其特征在于，所述药学上可接受的缓冲液具有约pH6.8～约pH7.4的pH。72.如权利要求1～71中任一项所述的方法，其特征在于，所述染料和偶联物所暴露的光仅具有约425nm～约575nm范围内的波长。73.如权利要求1～72中任一项所述的方法，其特征在于，所述染料和偶联物在所述包装步骤中所暴露的光仅具有小于200勒克斯的强度。74.如权利要求20～73中任一项所述的方法，其特征在于，所述容器确保具有约250nm～约800nm、约250nm～约450nm、约400nm～约800nm、约450nm～约650nm或约600nm～约720nm的波长的光不透过。75.如权利要求74所述的方法，其特征在于，所述容器确保光不透过，使得透光率百分数小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％或小于5％。76.如权利要求20～75中任一项所述的方法，其特征在于，所述容器是绿色、蓝色、琥珀色、半透明、不透明、或用具有小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％或小于5％的透光率的材料覆盖。77.如权利要求20～76中任一项所述的方法，其特征在于，所述容器选自药瓶、管子、注射器、包、袋子和盒子。78.如权利要求20～77中任一项所述的方法，其特征在于，所述避光容器是第一避光容器，且所述方法还包括将所述第一避光容器包装在第二避光容器内。79.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述第二容器确保具有约250nm～约800nm、约250nm～约450nm、约400nm～约800nm、约450nm～约650nm或约600nm～约720nm的波长的光不透过。80.如权利要求78或79所述的方法，其特征在于，所述第二容器确保光不透过，使得透光率百分数小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％或小于5％。81.如权利要求78～80中任一项所述的方法，其特征在于，所述第二容器是绿色、蓝色、琥珀色、半透明、不透明、或用具有小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％或小于5％的透光率的材料覆盖。82.如权利要求78～81中任一项所述的方法，其特征在于，所述第二容器选自药瓶、管子、注射器、包、袋子和盒子。83.如权利要求78～82中任一项所述的方法，其特征在于，还包括将所述第二容器包装在第三避光容器内。84.如权利要求83所述的方法，其特征在于，所述第三容器确保具有约250nm～约800nm、约250nm～约450nm、约400nm～约800nm、约450nm～约650nm或约600nm～约720nm的波长的光不透过。85.如权利要求84所述的方法，其特征在于，所述第三容器确保光不透过，使得透光率百分数小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％或小于5％。86.如权利要求84或85所述的方法，其特征在于，所述第三容器是绿色、蓝色、琥珀色、半透明、不透明、或用具有小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％或小于5％的透光率的材料覆盖。87.如权利要求83～86中任一项所述的方法，其特征在于，所述第三容器选自药瓶、管子、注射器、包、袋子和盒子。88.如权利要求1～87中任一项所述的方法，其特征在于，通过所述方法制造的偶联物的量多于约1克、多于约2克、多于约3克、多于约4克、多于约5克或多于约10克。89.如权利要求1～88中任一项所述的方法，其特征在于，所述偶联物用药品生产质量管理规范(GMP)制造。90.一种偶联物，其通过权利要求1～89中任一项所述的方法制造、配制或包装。91.如权利要求90所述的偶联物，其在多于3个月的时间内稳定。92.一种稳定偶联物，含有与靶向性分子连接的酞菁染料，其中，所述偶联物在多于3个月的时间内稳定。93.如权利要求91所述的偶联物或权利要求92所述的稳定偶联物，其特征在于，如果所述偶联物与储存前的偶联物相比在多于3个月的时间内保持大于约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高的效价、活性或纯度，则所述偶联物在这段时间内是稳定的。94.如权利要求91所述的偶联物或权利要求92所述的稳定偶联物，其特征在于，如果多于90％的所述偶联物作为主要单体成分存在，则所述偶联物是稳定的。95.如权利要求94所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，如果多于95％的所述偶联物作为主要单体成分存在，则所述偶联物是稳定的。96.如权利要求90～95中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述偶联物在多于6个月或多于12个月的时间内稳定。97.如权利要求90～96中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述偶联物在低于30℃的温度下稳定。98.如权利要求90～97中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述酞菁染料包含下式的化合物：其中：L是接头；Q是用于将染料与靶向性分子连接的反应性基团；R2、R3、R7和R8各自独立地选自任选取代的烷基和任选取代的芳基；R4、R5、R6、R9、R10和R11各自独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的烷酰基、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的烷基氨基甲酰基和螯合配体，其中，R4、R5、R6、R9、R10和R11中的至少一个包含水溶性基团；R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20、R21、R22和R23各自独立地选自氢、卤素、任选取代的烷硫基、任选取代的烷基氨基和任选取代的烷氧基；并且X2和X3各自独立地是C1～C10亚烷基，任选地被杂原子隔开。99.如权利要求90～98中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述酞菁染料包含下式的化合物：其中：X1和X4各自独立地是C1～C10亚烷基，任选地被杂原子隔开；R2、R3、R7和R8各自独立地选自任选取代的烷基和任选取代的芳基；R4、R5、R6、R9、R10和R11各自独立地选自氢、任选取代的烷基、任选取代的烷酰基、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的烷基氨基甲酰基和螯合配体，其中，R4、R5、R6、R9、R10和R11中的至少一个包含水溶性基团；并且R16、R17、R18和R19各自独立地选自氢、卤素、任选取代的烷硫基、任选取代的烷基氨基和任选取代的烷氧基。100.如权利要求90～99中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述染料的最大吸收波长为约600nm～约850nm、约650nm～约850nm或约680nm～约850nm。101.如权利要求90～100中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述染料包含IRDye700DX(IR700)。102.如权利要求90～101中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述靶向性分子与细胞或病原体表面上的细胞表面靶分子结合。103.如权利要求90～102中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述细胞是干细胞、增殖性细胞、增生中的细胞或被病原体感染的细胞。104.如权利要求102或103所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述病原体选自病毒、细菌、真菌、生物膜或其它原核细胞系统。105.如权利要求102或103所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述细胞是增殖性细胞、癌细胞、增生中的细胞、肿瘤细胞、炎性细胞、神经元或病原体。106.如权利要求105所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述炎性细胞是选自中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的白细胞。107.如权利要求105所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述神经元是外周神经系统神经元或中枢神经系统神经元。108.如权利要求105或107所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述神经元是选自温度性伤害感受器、机械性伤害感受器、化学性伤害感受器和多形性伤害感受器的伤害感受器。109.如权利要求102～108中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述细胞表面靶分子包括抗原、多肽、脂质或碳水化合物、或者它们的组合。110.如权利要求102～109中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述细胞表面靶分子选自细胞膜磷脂、原核肽聚糖、细菌细胞包膜蛋白、病毒衣壳蛋白、ACTHR、内皮细胞Anxa-1、氨肽酶N、抗-IL-6R、α-4-整联蛋白、α-5-β-3-整联蛋白、α-5-β-5-整联蛋白、甲胎蛋白(AFP)、ANPA、ANPB、APA、APN、APP、1AR、2AR、AT1、B1、B2、BAGE1、BAGE2、B-细胞受体BB1、BB2、BB4、降钙素受体、癌抗原125(CA125)、CCK1、CCK2、CD5、CD10、CD11a、CD13、CD14、CD19、CD20、CD22、CD25、CD30、CD33、CD38、CD45、CD52、CD56、CD68、CD90、CD133、CD7、CD15、CD34、CD44、CD206、CD271、CEA(癌胚抗原)、CGRP、趋化因子受体、细胞表面膜联蛋白-1、细胞表面网蛋白-1、Cripto-1、CRLR、CXCR2、CXCR4、DCC、DLL3、E2糖蛋白、EGFR、EGFRvIII、EMR1、内皮唾液酸蛋白、EP2、EP4、EpCAM、EphA2、ET受体、纤连蛋白、纤连蛋白ED-B、FGFR、卷曲受体(frizzledreceptors)、GAGE1、GAGE2、GAGE3、GAGE4、GAGE5、GAGE6、GLP-1受体、A族(视紫红质样)的G-蛋白偶联受体、B组(分泌素受体样)的G-蛋白偶联受体、C族(代谢型谷氨酸盐受体样)的G-蛋白偶联受体、GD2、GP100、GP120、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、血凝素、硫酸肝素、HER1、HER2、HER3、HER4、HMFG、HPV16/18和E6/E7抗原、hTERT、IL-2R、IL11-R、IL-13R、ITGAM、激肽释放酶-9、LewisY、LH受体、LHRH-R、LPA1、MAC-1、MAGE1、MAGE2、MAGE3、MAGE4、MART1、MC1R、间皮素、MUC1、MUC16、Neu(细胞表面核仁素)、脑啡肽酶、神经菌毛素-1、神经菌毛素-2、NG2、NK1、NK2、NK3、NMB-R、Notch-1、NY-ESO-1、OT-R、突变型p53、p97黑色素瘤抗原、NTR2、NTR3、p32(p32/gC1q-R/HABP1)、p75、PAC1、PAR1、补缀(Patched)(PTCH)、PDGFR、PDFG受体、PDT、蛋白酶剪切胶原IV、蛋白水解酶3、抑制素、蛋白酪氨酸激酶7、PSA、PSMA、嘌呤能P2X家族(如P2X1-5)、突变型Ras、RAMP1、RAMP2、RAMP3补缀、RET受体、丛蛋白、平滑(smoothened)、sst1、sst2A、sst2B、sst3、sst4、sst5、P物质、TEMs、T细胞CD3受体、TAG72、TGFBR1、TGFBR2、Tie-1、Tie-2、Trk-A、Trk-B、Trk-C、TR1、TRPA、TRPC、TRPV、TRPM、TRPML、TRPP(如TRPV1-6、TRPA1、TRPC1-7、TRPM1-8、TRPP1-5、TRPML1-3)、TSH受体、VEGF受体(VEGFR1或Flt-1、VEGFR2或FLK-1/KDR、及VEGF-3或FLT-4)、电压门控离子通道、VPAC1、VPAC2、维尔姆斯瘤1、Y1、Y2、Y4和Y5。111.如权利要求102～110中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述细胞表面靶分子选自HER1/EGFR、HER2/ERBB2、CD20、CD25(IL-2Rα受体)、CD33、CD52、CD133、CD206、CEA、CEACAM1、CEACAM3、CEACAM5、CEACAM6、癌抗原125(CA125)、甲胎蛋白(AFP)、LewisY、TAG72、Caprin-1、间皮素、PDGF受体、PD-1、PD-L1、CTLA-4、IL-2受体、血管内皮生长因子(VEGF)、CD30、EpCAM、EphA2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、gpA33、粘蛋白、CAIX、PSMA、叶酸盐结合蛋白、神经节苷脂(如GD2、GD3、GM1和GM2)、VEGF受体(VEGFR)、VEGFR2、VEGF-A、整联蛋白αVβ3、整联蛋白α5β1、ERBB3、MET、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2、RANKL、FAP、生腱蛋白、AFP、BCR复合物、CD3、CD18、CD44、CTLA-4、gp72、HLA-DR10β、HLA-DR抗原、IgE、MUC-1、nuC242、PEM抗原、金属蛋白酶、蝶素(Ephrin)受体、蝶素配体、HGF受体、CXCR4、CXCR4、铃蟾肽受体、SK-1抗原、Bcr-abl、RET、MET、TRKB、TIE2、ALK、ROS、EML4-ALK、ROS1、BRAFV600E、SRC、c-KIT、PDGFR、mTOR、TSC1、TSC2、BTK、KIT、BRCA、CDK4/6、JAK1、JAK2、BRAF、FLT-3、MEK1、MEK2和SMO。112.如权利要求102～111中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述细胞表面靶分子是HER1/EGFR、HER2、PD-L1、CD25、EpCAM、EphA2、CD206、CD20、CD44、CD133、间皮素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3或癌胚抗原(CEA)。113.如权利要求90～112中任一项所述的偶联物或稳定偶联物，其特征在于，所述靶向性分子的至少一部分选自蛋白质、糖蛋白、抗体、抗体片段、抗原、抗原结合片段、肽、多肽、组织归巢肽、小分子...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·R·梅金斯，R·海姆，M·加西亚古斯曼，E·S·金，D·亚达夫，J·方，
申请(专利权)人：阿斯皮利安治疗学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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