The invention discloses a preparation method of a water-soluble chitosan based aggregation induced luminescent probe with reductive responsiveness. The main steps include the modification of chitosan molecules by a mixed solvent system of hydrochloric acid / methanol and a EDC/NHS catalytic system to produce a carboxylated chitosan CS SS COOH, which is connected by a disulfide bond; four TPE (CS) ss (COOH) with aggregation induced luminescence (AIE) characteristics was obtained from the fluorescent molecule labeled phenyl vinyl (TPE) on the CS SS COOH chain. The fluorescent probe produced by the invention has good reduction responsiveness and water solubility, and has the characteristics of aggregation induced luminescence. Compared with the traditional fluorescent probe, the fluorescence probe has the advantages of high sensitivity, good light stability, no quenching in high concentration, non drift of fluorescence spectrum and so on. The fluorescence intensity can be achieved in Gu Guanggan peptide solution. One step enhanced imaging effect is expected to be applied in tumor cell specific tracer, cell metabolism detection, drug metabolism detection, environmental monitoring and other fields.
【技术实现步骤摘要】
一种具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针的制备方法
本专利技术涉及一种具有还原响应性和聚集诱导发光特性的水溶性壳聚糖基荧光探针(TPE-CS-ss-COOH)的制备方法。
技术介绍
荧光探针是以荧光物质作为指示剂,并在一定波长光的激发下使指示剂产生荧光,通过检测所产生的荧光实现对被检测物质的定性或者定量分析。当前,荧光探针主要应用于生物、医学和环境监测等领域。然而传统的荧光探针面临着聚集诱导淬灭(ACQ)效应和细胞毒性两大问题。聚集诱导发光(AIE)荧光分子的发现无疑提供了一种解决上述问题的思路。在生化检测领域,使用具有AIE特性的荧光探针可实现高灵敏度特异性检测,且AIE体系对细胞生理学及增殖影响不大。但是,AIE体系多为共轭类带有疏水芳香核的分子,不溶于生理水环境,且小分子荧光探针容易从细胞渗透、泄露,继而引起检测误差等问题,因此水溶性大分子AIE荧光探针的研发具有重要意义。壳聚糖(CS)作为一种富含氨基的天然多糖,具有良好的生物相容性和生物活性,无毒且易于生物降解,被广泛应用于生物医学领域。然而,由于分子内和分子间的氢键作用,壳聚糖不溶于纯水和常见有机溶剂,可通过在壳聚糖分子链上引入亲水性基团(如羧基、季铵盐等)破坏分子内和分子间氢键从而改善其水溶性。基于肿瘤细胞与正常细胞之间还原型谷胱甘肽(GSH)浓度的显著性差异,在壳聚糖分子链中引入带有双硫键结构的羧酸基团,可使设计得到的分子具有良好的水溶性和还原响应性,通过聚集诱导发光荧光基团进一步标记可获得具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针。该探针被肿瘤细胞胞吞后,由于胞内高浓 ...
【技术保护点】
一种具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针,其特征在于,该荧光探针的结构如下:
【技术特征摘要】
1.一种具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针,其特征在于,该荧光探针的结构如下:其中,x1为TPE接枝率,m为1-壳聚糖的脱乙酰度,y为羧化度,且x1+x2+m+y为1。2.一种如权利要求1所述的具有还原响应性的水溶性壳聚糖基聚集诱导发光荧光探针的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:1)称取一定质量粘均分子量为1万-100万、脱乙酰度60%-95%的壳聚糖为溶质,以0.1mol/L的HCl溶液为溶剂,配制获得壳聚糖浓度为0.01-0.05g/mL的溶液A;2)以无水甲醇为溶剂,配制浓度为0.01-0.05g/mL的二硫代二丙酸(DTDP)溶液,并使DTDP与溶液A中壳聚糖链上的氨基摩尔比为1:1-2:1,加入一定量的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),使DTDP与EDC的摩尔比为1:1.2-1:2,且EDC与NHS的摩尔比为1:1-1:1.5,在0-4℃冰浴条件下于无水甲醇中活化0.5-2h,获得溶液B;3)采用恒...
【专利技术属性】
技术研发人员:王征科,杨玲,方雯,胡巧玲,唐本忠,
申请(专利权)人:浙江大学,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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