抗原的载体分子制造技术

本发明专利技术提供了包含抗原和载体分子的缀合物，其中所述载体分子包含BP‑2a抗原和spb1抗原。BP‑2a和spb1是无乳链球菌抗原。所述缀合物可以用于产生哺乳动物中的免疫应答的方法，所述方法包括向哺乳动物施用所述缀合物。还提供了包含所述缀合物的药物组合物，特别是疫苗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗原的载体分子
本专利技术涉及抗原和载体分子的缀合物，以及包含这些缀合物的疫苗。所述抗原通常是糖类。背景使用与载体蛋白缀合以增强糖抗原的免疫原性是众所周知的[例如综述于参考文献1-9等]，并且特别用于儿科疫苗[10]。目前疫苗中的3种广泛使用的载体蛋白是破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)和白喉类毒素变体CRM197。这些蛋白已被用作各种糖类的载体，包括链球菌和脑膜炎球菌荚膜糖(参见，例如，使用TT作为参考文献11中的衍生自无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)血清型II和III的糖和参考文献12中的衍生自脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseriameningitidis)血清群A、C、W135和Y的糖的载体；以及使用DT和CRM197作为参考文献13和14中相同的脑膜炎奈瑟氏菌糖和参考文献15中衍生自无乳链球菌血清型Ia、Ib和III的糖的载体)。这些载体蛋白在疫苗中的过度使用已经产生了问题[参见，例如，参考文献16]，提出了各种替代性载体(例如，参考文献17中来自流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)的蛋白D)。然而，许多替代性载体蛋白没有TT、DT和/或CRM197那样有效。因此，仍然需要寻找替代性和/或更好的载体蛋白。因此，本专利技术的目标是提供其他且更好的载体蛋白，尤其是荚膜糖的载体蛋白。所述载体蛋白可用于缀合物以诱导针对感染或药物的保护性和/或治疗性免疫应答。专利技术概述本专利技术人已经发现包含两种特定无乳链球菌(GBS)多肽BP-2a多肽和spb1多肽的载体是特别有效的。这些载体是各种各样的并且可以与各种抗原(尤其是例如来自病原生物体的糖类)缀合。所得缀合物可能比基于目前使用的载体蛋白(例如CRM197)的缀合物更有免疫原性。此外，当用作GBS糖类的载体时，它们可以提供针对GBS的较高水平的保护性免疫。本专利技术因此提供包含抗原和载体分子的缀合物，其中所述载体分子包含BP-2a多肽和spb1多肽。所述载体分子通常包含BP-2a多肽和spb1多肽作为单多肽链(“杂合”多肽)。通常，所述抗原是糖。所述糖可以是任何糖，尤其是来自病原生物体的糖。例如，所述糖可以是来自无乳链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌或肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)的荚膜糖或葡聚糖。当所述糖是来自无乳链球菌的荚膜糖时，其通常来自以下血清型之一：Ia、Ib、II、III和V，尤其是来自血清型II或V。使用本专利技术的多肽载体作为来自无乳链球菌的不同菌株的糖的载体，可能有利于提供改善的免疫应答或提供针对多种菌株的保护，从而延展疫苗覆盖范围。当所述糖是来自脑膜炎奈瑟氏菌的荚膜糖时，其通常来自以下脑膜炎球菌血清群之一：A、C、W135和Y。当所述糖是葡聚糖时，其通常是昆布多糖。当所述糖是来自肺炎链球菌的荚膜糖时，其通常来自以下肺炎球菌血清型之一：1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F。使用本专利技术的多肽载体作为异源糖(即例如无乳链球菌中非天然存在的糖)的载体，可能有利于提供针对两种或更多种不同微生物的保护，从而延展疫苗覆盖范围。本专利技术也涉及包含与药学上可接受的载体组合的本专利技术的缀合物的药物组合物。具体地，本专利技术涉及药物组合物，其包含(i)根据本专利技术的缀合物，(ii)与CRM197缀合的来自无乳链球菌血清型Ia、Ib和III的糖和(iii)与GBS80缀合的来自无乳链球菌血清型II或V的糖。更具体地，本专利技术涉及药物组合物，其包含(i)与GBS59(6XD3)-GBS1523载体缀合的来自无乳链球菌血清型V的糖，(ii)与CRM197缀合的来自无乳链球菌血清型Ia、Ib和III的糖和(iiI)与GBS80缀合的来自无乳链球菌血清型II的糖。又更具体地，本专利技术涉及药物组合物，其包含(i)与GBS59(6XD3)-GBS1523载体缀合的来自无乳链球菌血清型II的糖，(ii)与CRM197缀合的来自无乳链球菌血清型Ia、Ib和III的糖和(iiI)与GBS80缀合的来自无乳链球菌血清型V的糖。本专利技术进一步涉及在合适哺乳动物中引起免疫应答的方法，其包括将本专利技术的缀合物或药物组合物施用于所述哺乳动物。附图简述图1比较了在两项研究中通过用包含血清型II糖、CRM197和BP-2a/spb1载体的缀合物免疫引发的保护(表的下行)和抗血清型II糖抗体滴度(图表和表的上行)。组合物以1μg蛋白的剂量施用。图2显示了在两项研究中通过GBS59(6XD3)-GBS1523-II缀合物组合物引发的对GBS59和GBS1523特异性的抗体的滴度。注意：在本实例中，BP-2a/spb1载体被称为GBS59(6XD3)-GBS1523。图3比较了通过用包含血清型II糖和CRM197、GBS80和BP-2a/spb1载体的缀合物免疫引发的抗血清型II糖抗体滴度。图4比较了通过用包含血清型V糖和CRM197、GBS80和BP-2a/spb1载体的缀合物免疫引发的抗V型糖抗体滴度。图5比较了通过用包含血清型V糖和CRM197以及BP-2a/spb1载体的缀合物免疫引发的保护(表的下行)和抗V型糖抗体滴度(图表和表的上行)。组合物以1μg蛋白的剂量施用。图6显示了在两项研究中通过GBS59(6XD3)-GBS1523-V缀合物组合物引发的对GBS59和GBS1523特异性的抗体的滴度。注意：在本实例中，BP-2a/spb1载体被称为GBS59(6XD3)-GBS1523。图7显示了使用昆布多糖的模型系统中由不同载体蛋白缀合物产生的IgG应答，并且表明不是所有蛋白抗原都适合用作载体(A=CRM197；B=GBS01132；C=GBS01157；D=GBS52；E=GBS150；F=SAN1516)。图8比较了通过用各种缀合物混合物免疫引发的抗II型糖抗体滴度。图9比较了通过用各种缀合物混合物免疫引发的抗V型糖抗体滴度。图10呈现了图8的一些数据，并且指出抗体滴度的某些统计学显著性差异。图11呈现了图9的一些数据，并且指出抗体滴度的某些统计学显著性差异。图12提供了载体蛋白GBS59(6XD3)-GBS1523(SEQIDNO:276)的序列，并且突出显示其组成部分。将接头序列加框，而不同的BP-2a和spb1序列用交替的单和双下划线标记。图13提供了用于本专利技术缀合物中的代表性细菌糖的重复单元。图14呈现了用来自人类患者的血清的western印迹，所述血清强烈识别全长spb1(GBS1523)和spb1D2+D3(GBS1523D2+D3)，但不识别spb1D1(GBS1523D1)。专利技术详述本专利技术涉及包含抗原和载体分子的缀合物，其中所述载体分子包含BP-2a多肽和spb1多肽。该缀合物的特征在下文中详述。关于B群链球菌，仅基于荚膜多糖的疫苗将不能有效地引发最佳保护以免于不可分型的(NT)GBS感染，因为NT分离株产生非常低水平的荚膜或具有修饰的荚膜结构，所述修饰的荚膜结构不与获得自9种已知血清型中的任一种的抗血清反应。使用GBS蛋白抗原、特别是作为多糖的载体是有利的，因为与非GBS载体(诸如CRM197)不同，本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含抗原和载体分子的缀合物，其中所述载体分子包含无乳链球菌(

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.05 EP 14179945.21.包含抗原和载体分子的缀合物，其中所述载体分子包含无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)BP-2a多肽和无乳链球菌spb1多肽。2.根据权利要求1的缀合物，其中所述spb1多肽包含：(a)SEQIDNO:206的氨基酸序列；或(b)由(a)的氨基酸185至468组成的片段；或(c)与(a)或(b)具有至少70％同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求1或权利要求2的缀合物，其中所述BP-2a多肽包含：(a)选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6和SEQIDNO:7的氨基酸序列；或(b)选自SEQIDNO:36、SEQIDNO:38、SEQIDNO:40、SEQIDNO:42、SEQIDNO:44、SEQIDNO:46和SEQIDNO:48的氨基酸序列；或(c)(a)的少于200个连续氨基酸的片段；或(d)与(a)、(b)或(c)具有至少70％同一性的氨基酸序列。4.根据权利要求1、2或3的缀合物，其中所述载体分子包含作为单个多肽链的衍生自不同的无乳链球菌菌株的2个或更多个BP-2a多肽。5.根据权利要求4的缀合物，其中所述载体分子包含作为单个多肽链的：(i)包含SEQIDNO:36的氨基酸序列或与SEQIDNO:36具有至少70％同一性的氨基酸序列的BP-2a多肽；(ii)包含SEQIDNO:38的氨基酸序列或与SEQIDNO:38具有至少70％同一性的氨基酸序列的BP-2a多肽；(iii)包含SEQIDNO:40的氨基酸序列或与SEQIDNO:40具有至少70％同一性的氨基酸序列的BP-2a多肽；(iv)包含SEQIDNO:42的氨基酸序列或与SEQIDNO:42具有至少70％同一性的氨基酸序列的BP-2a多肽；(v)包含SEQIDNO:44的氨基酸序列或与SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：F伯蒂，R科齐，G格兰迪，D迈奥内，I马加里特伊罗斯，CD里瑙多，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE