一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法技术

本发明专利技术公开了一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标安非他明、用于检测安非他明抗体‑酶标安非他明复合物的指示试剂；上述酶标安非他明由安非他明和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本发明专利技术的安非他明免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中安非他明含量。与市场上现有的检测试剂相比，本发明专利技术检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法
本专利技术涉及医学检验领域，具体是一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法。
技术介绍
安非他明(Amphetamine,AMPH)，又叫苯丙胺，是临床上常用的一种中枢兴奋及抗抑郁症药物。AMPH能引起深度精神作用，包括警觉性、主动性和信心提高，欣快感、疲劳感减低，语言增多，以及集中注意力的能力增强。AMPH也可引起不良反应，能产生长期脑组织的损害，最常见的是过度兴奋，有不安、失眠、震颤、紧张和烦躁等症状。服用大剂量AMPH后最严重的后果就是一种毒性神经病，因此对病人的血液药物水平进行监测非常重要。目前检测安非他明的常用方法有：高效液相色谱分析、放射免疫测定（RIA）和荧光偏振法等。其中，高效液相色谱分析费时且不易自动化；RIA法所需时间较长，检测结果不稳定，且存在放射性污染危险。荧光偏振法需要昂贵的仪器设备和经验丰富的操作人员。本专利技术采用的方法为均相酶免疫检测法，其优点为：操作简便、快速、灵敏度高、准确性好、适合于自动化，应用广泛，并且用全自动生化分析仪对小分子物质和大分子物质都能高通量快速测定。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中安非他明检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本专利技术提供了一种快速、灵敏度高、准确检测出待测样本中安非他明含量的安非他明均相酶免疫检测试剂及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标安非他明、用于检测安非他明抗体-酶标安非他明复合物的指示试剂；上述酶标安非他明由安非他明和葡萄糖脱氢酶偶联而成。作为本专利技术进一步的方案，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。作为本专利技术进一步的方案，所述的一种安非他明免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物的制备：葡萄糖脱氢酶（GDH）与安非他明偶联，纯化偶联的酶标抗原；（2）安非他明均相酶免疫检测试剂的制备：试剂1的制备：由安非他明抗体和均相酶底物混合而成；试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。作为本专利技术进一步的方案，所述的一种安非他明免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：1）葡萄糖脱氢酶（GDH）与安非他明的偶联a.将5-30mg安非他明溶于100-500μL二甲基甲酰胺（DMF）中，轻微振荡溶解；同时，取10-40mg规格为100-300KU的GDH溶解于PBS缓冲液中震荡、均匀溶解；b.将安非他明溶液在搅拌下缓慢加入GDH溶液中，同时缓慢滴入10-40μL戊二醛溶液，滴加完毕后将溶液置于4℃搅拌反应过夜；2）纯化偶联的酶标抗原通过G-25凝胶层析柱纯化偶联的酶标抗原，得到葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物，于2-8℃下储存。作为本专利技术进一步的方案，所述的一种安非他明免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，步骤（2）的具体过程如下：试剂1的制备：将2-5g氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD、0.5-3g葡萄糖用0.5-2L磷酸盐缓冲液溶解制成均相酶底物；将安非他明抗体加到上述均相酶底物中，抗体与均相酶底物的体积比为1:100～1:10000；试剂2的制备：将制备的葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物加到磷酸盐缓冲液中，上述偶联物与磷酸盐缓冲液的体积比为1:100～1:10000。作为本专利技术进一步的方案，所述的安非他明免疫检测试剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将待测样本与安非他明抗体接触；2）根据待测样本中酶标安非他明与安非他明抗体的结合情况，利用指示试剂判断样本中安非他明的含量；所述待测样本为血清、血浆、唾液或尿液。本专利技术的原理是抗原与酶结合成酶标抗原，保留抗原和酶的生物活性，当酶标抗原与抗体结合后，抗原分子上的酶蛋白与抗体密切接触，使酶的活性中心受到影响，酶的活性受到抑制。测定时样本中的抗原、酶标抗原与抗体竞争性结合，样本中的抗原含量越高，加底物后其OD值越高。本专利技术的优点在于：本专利技术的安非他明免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中安非他明含量。与市场上现有的检测试剂相比，本专利技术检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。附图说明图1是安非他明均相酶免疫反应校准曲线图。图2是安非他明均相酶免疫线性范围图。具体实施方式本专利技术提供了一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法，为使本专利技术目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进行详细说明。本专利技术提供了一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标安非他明、用于检测安非他明抗体-酶标安非他明复合物的指示试剂；上述酶标安非他明由安非他明和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本专利技术中所指的“安非他明”不仅仅指完整的安非他明分子，也包括保留完整抗原特异性结合能力的安非他明片断或者衍生物。一种安非他明均相酶免疫检测试剂，包括：酶标安非他明、用于检测安非他明抗体-酶标安非他明复合物的指示试剂。指示试剂选自酶试剂、放射性同位素试剂、荧光试剂和化学发光试剂。优选的，指示试剂为酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物。其中，酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物，其可通过化学合成方法得到。上述的安非他明免疫检测试剂的使用方法，包括以下步骤：1）将待测样本与安非他明抗体接触；2）根据待测样本中酶标安非他明与安非他明抗体的结合情况，利用指示试剂判断样本中安非他明的含量；所述待测样本为血清、血浆、唾液或尿液等。优选的，待测样本为血清或血浆。下面通过具体的实施例对本专利技术进行详细说明。实施例一：葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物的制备1）葡萄糖脱氢酶（GDH）与安非他明的偶联a.将15mg安非他明溶于250μL二甲基甲酰胺（DMF）中，轻微振荡溶解；同时，取30.0mg规格为100KU的GDH溶解于3mL0.01mol/L的PBS(pH7.4）缓冲液中，震荡、均匀溶解；b.将安非他明溶液在搅拌下缓慢加入GDH溶液中，同时缓慢滴入20μL25%戊二醛溶液，滴加完毕后将溶液置于4℃搅拌反应过夜。2）纯化偶联的酶标抗原通过G-25凝胶层析柱纯化偶联的酶标抗原，得到葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物，于2-8℃下储存。实施例二：安非他明均相酶免疫检测试剂的制备安非他明均相酶免疫检测试剂，包括：酶标安非他明、用于检测安非他明抗体-酶标安非他明复合物的指示试剂。指示试剂选自酶试剂、放射性同位素试剂、荧光试剂和化学发光试剂。优选的，指示试剂为酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物。其中，酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物，其可通过化学合成方法得到。安非他明均相酶免疫检测试剂在使用之前，为了避免指示试剂中的酶标偶联物和酶的底物发生反应，酶标偶联物和酶的底物是分开放置的，因此安非他明均相酶免疫检测试剂包括两种分开设置的试剂，具体如下：1.试剂1的制备：将3.588g（10mM）氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD、1.802g（10mM）葡萄糖用1L50mM、pH8.0的磷酸盐缓冲液溶解制成均相酶底物；将安非他明抗体加到上述均相酶底物中，抗体与均相酶底物的体积比为1:100～1:10000，在本实施例中具体的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标安非他明、用于检测安非他明抗体‑酶标安非他明复合物的指示试剂。

【技术特征摘要】
1.一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标安非他明、用于检测安非他明抗体-酶标安非他明复合物的指示试剂。2.根据权利要求1所述的安非他明的免疫检测试剂，其特征在于：所述酶标安非他明由安非他明和葡萄糖脱氢酶偶联而成。3.根据权利要求1所述的安非他明免疫检测试剂，其特征在于：所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。4.一种安非他明免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物的制备：葡萄糖脱氢酶（GDH）与安非他明偶联，纯化偶联的酶标抗原；（2）安非他明均相酶免疫检测试剂的制备：试剂1的制备：由安非他明抗体和均相酶底物混合而成；试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。5.根据权利要求5所述的一种安非他明免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：1）葡萄糖脱氢酶（GDH）与安非他明的偶联a.将5-30mg安非他明溶于100-500μL二甲基甲酰胺（DMF）中，轻微振荡溶解；同时，取10-40mg规格为...

【专利技术属性】
技术研发人员：马运乐，杨钰祥，于雪纯，康志禹，杜爱铭，徐兵，
申请(专利权)人：太原瑞盛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山西,14