一种用于检测骨质疏松症的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种用于检测骨质疏松症的试剂盒，所述试剂盒包括能特异性检测rs57241669的探针和引物。通过本试剂盒可以检测受试者是否患有骨质疏松症，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。而且操作简单，实验方法，成本低廉。

A kit for the detection of osteoporosis

The invention relates to a kit for detecting osteoporosis. The kit comprises probes and primers that can detect rs57241669 specifically. The kit can be used to detect whether the subjects are suffering from osteoporosis, so as to guide clinicians to provide preventive programs or treatment options for the subjects. Moreover, the operation is simple, the experimental method is low and the cost is low.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测骨质疏松症的试剂盒
本专利技术属于生物检测领域，具体的属于一种用于检测骨质疏松症的试剂盒。
技术介绍
骨质疏松即骨质疏松症，是多种原因引起的一组骨病，骨组织有正常的钙化，钙盐与基质呈正常比例，以单位体积内骨组织量减少为特点的代谢性骨病变。在多数骨质疏松中，骨组织的减少主要由于骨质吸收增多所致。以骨骼疼痛、易于骨折为特征。临床表现为疼痛，原发性骨质疏松症最常见的症状，以腰背痛多见，占疼痛患者中的70％～80％。疼痛沿脊柱向两侧扩散，仰卧或坐位时疼痛减轻，直立时后伸或久立、久坐时疼痛加剧，弯腰、咳嗽、大便用力时加重。一般骨量丢失12％以上时即可出现骨痛。老年骨质疏松症时，椎体压缩变形，脊柱前屈，肌肉疲劳甚至痉挛，产生疼痛。新近胸腰椎压缩性骨折，亦可产生急性疼痛，相应部位的脊柱棘突可有强烈压痛及叩击痛。若压迫相应的脊神经可产生四肢放射痛、双下肢感觉运动障碍、肋间神经痛、胸骨后疼痛类似心绞痛。若压迫脊髓、马尾神经还影响膀胱、直肠功能。退行性骨质疏松症最常见和最严重的并发症。骨质疏松的检查在实验室层面上主要是如下几点:(1)血钙、磷和碱性磷酸酶在原发性骨质疏松症中，血清钙、磷以及碱性磷酸酶水平通常是正常的，骨折后数月碱性磷酸酶水平可增高。(2)血甲状旁腺激素应检查甲状旁腺功能除外继发性骨质疏松症。原发性骨质疏松症者血甲状旁腺激素水平可正常或升高。(3)骨更新的标记物骨质疏松症患者部分血清学生化指标可以反应骨转换(包括骨形成和骨吸收)状态，这些生化测量指标包括：骨特异的碱性磷酸酶(反应骨形成)、抗酒石酸酸性磷酸酶(反应骨吸收)、骨钙素(反应骨形成)、Ⅰ型原胶原肽(反应骨形成)、尿吡啶啉和脱氧吡啶啉(反应骨吸收)、Ⅰ型胶原的N-C-末端交联肽(反应骨吸收)。(4)晨尿钙/肌酐比值正常比值为0.13±0.01，尿钙排量过多则比值增高，提示有骨吸收率增加可能。其次是辅助检查，又分为以下几个方面，骨影像学检查和骨密度①摄取病变部位的X线片X线可以发现骨折以及其他病变，如骨关节炎、椎间盘疾病以及脊椎前移。骨质减少(低骨密度)摄片时可见骨透亮度增加，骨小梁减少及其间隙增宽，横行骨小梁消失，骨结构模糊，但通常需在骨量下降30％以上才能观察到。大体上可见椎体双凹变形，椎体前缘塌陷呈楔形变，亦称压缩性骨折，常见于第11、12胸椎和第1、2腰椎。②骨密度检测骨密度检测是骨折的预测指标。测量何部位的骨密度，可以用来评估总体的骨折发生危险度；测量特定部位的骨密度可以预测局部的骨折发生的危险性。在现有技术中，CN102534019A公开了一种试剂盒通过检测与骨质疏松症发生密切相关的5个单核苷酸多态性位点的基因型来筛查出容易患骨质疏松症的女性高危人群，并最终根据每一位受检者的基因检测结果从基因层面评估骨质疏松症易感的风险级别，指导更年期女性针对性的有效预防骨质疏松症的发生。CN106755522A公开了一种用于幼年型骨质疏松症检测的试剂盒，通过基因比对发现在幼年型骨质疏松患者和正常人群中DKK1基因存在着明显的突变位点，为721位点。通过检测这个突变位点，特别是提供的1对特异性引物对，可以特异性的鉴定人体时候患有幼年型骨质疏松症状。该检测方法相对于现有技术的方法具有检测方便，准确快速的优点，适宜于推广使用。CN107043811A公开了CFAP20基因可以作为骨质疏松症早期诊断的分子标志物。利用高通量测序和QPCR实验研究了骨质疏松症患者中的差异表达基因。该研究成果表明可以通过检测血液中CFAP20基因表达情况来判断受试者是否患有骨质疏松症。基于现有技术中检测骨质疏松症的手段的局限性，寻找骨质疏松早期诊断及预后相关的特异性分子标志物对实现骨质疏松的早期诊断及个体化治疗具有深远意义。
技术实现思路
本专利技术提供了用于检测rs57241669基因型的试剂盒，检测结果能够用于骨质疏松症的辅助分析。本专利技术的第一个目的是提供用于检测基因SNP位点rs57241669基因型的试剂盒，所述试剂盒包括引物对和PCR检测反应试剂。依据本专利技术的试剂盒，可以提供一种对个体的骨质疏松症易感性进行诊断的方法，该方法为：检测个体的rs57241669位点的多态性状态，当位点为G时不表现出低骨密度特性，当突变基因型A导致了骨密度值的降低，从而最终导致骨质疏松症的发生。本专利技术提供了一种检测样本中是否存在rs57241669多态性的方法，该方法包括如下步骤：(1)利用我们自己设计的试剂盒扩增样本，得到PCR扩增产物。本专利技术利用TAQMAN技术检测扩增产物中是否存在单核苷酸多态性。本专利技术的基本技术路线是：一种鉴定rs57241669多态性中SNP分子标记的方法，通过提取样本的基因组DNA，采用本专利技术提供的试剂盒进行PCR扩增，扩增目的片段，利用TAQMAN技术进行检测，发现SNP存在，利用DNA测序方法证实该SNP的存在以及存在的位置。rs57241669位点的检测片段序列如SEQIDNO：1所示。长度为241bp，具体序列如下：其中R为A/G突变。本领域的技术人员都清楚，有很多分析方法可以用于检测基因内含子序列中存在单核酸多态性分布频率。这些技术包括：DNA测序、PCR-SSCP、PCR-HPLC、PCR-TAQMAN等。本专利技术特别地提供了一种使用方便、灵敏度高的检测上述SNP的检测试剂盒，它含有PCR特异扩增引物和用于PCR扩增检测的PCR反应液(如试剂、缓冲液等常规组件)等，本领域技术人员熟知这些常规组件和检测方法。在采用TAQMAN技术检测扩增产物检测突变位点，还需要TAQMAN所需要的一些常规试剂等。具体来说，本专利技术提供了一种检测rs57241669的SNP的PCR试剂盒，其特征是由引物1、引物2、探针3、探针4和PCR反应液构成，其中，所述探针3及探针4的5'端标记有报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团，且探针4的5'端报告基团与探针3的5'端报告基团不同。其中，5'端标记的报告基团可选自：FAM、HEX、TET、JOE、VIC、R0X、Cy3、Cy5、MAR、JUP、SAT、PLU或NEP，且不限于上述基团；3'端标记的荧光淬灭基团可选自：TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3、DABCYL、MGB，且不限于上述基团。优选地，5'端标记的报告基团为FAM或VIC，3'端标记的荧光淬灭基团为MGB。PCR扩增:所使用的扩增引物序列为:正向引物1:ctctattgaacagttttgca；反向引物2:atattgaccaggctggtctt；特异探针序列3:aatttttataacatccattta，其中序列5’段使用FAM标记，3’端用MGB标记，特异探针序列4:aatttttatagcatccattta，其中序列5’段使用VIC标记，3’端用MGB标记。本专利技术的优点和有益效果：本专利技术首次发现了rs57241669多态性与骨质疏松症相关，通过检测受试者中rs57241669的多态性情况，可以判断受试者是否患有骨质疏松症，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。而且操作简单，实验方法，成本低廉。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测骨质疏松症的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括能特异性检测rs57241669的探针和引物。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测骨质疏松症的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括能特异性检测rs57241669的探针和引物。2.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括SEQIDNO：2-5所述的引物组和探针序列。3.SEQIDNO：2-5所述的引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭菲，张垒，
申请(专利权)人：北京岳昊科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11