一种质粒提取方法技术

本发明专利技术涉及一种质粒提取方法，包括如下步骤：（1）将含有质粒的菌体裂解液上样第一层析柱，使用第一溶液进行洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第一洗脱液；（2）将所述第一洗脱液上样第二层析柱，使用第二溶液进行洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第二洗脱液；（3）将所述第二洗脱液上样第三层析柱，使用第三溶液进行洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第三洗脱液；（4）将所述第三洗脱液上样第四层析柱，使用第四溶液洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第四洗脱液。本发明专利技术涉及的质粒提取方法提高了质粒提取过程中质粒的回收率。

A method of Plasmid Extraction

The invention relates to a plasmid extraction method, including the following steps: (1) the first chromatography column containing the plasmid containing the bacterial lysate, eluting with the first solution, collecting the eluant containing the plasmid, obtaining the first eluent, and (2) the second chromatography column of the first eluent, using second solution for washing. Remove, collect the eluent containing plasmids, obtain second eluent; (3) eluate the third chromatography column of the second eluent, elute with third solution, collect the eluant containing the plasmid, obtain third eluent, and (4) the third eluent sample fourth layer column, and use fourth solution to elute and collect containing Fourth eluent was obtained with plasmids eluent. The plasmid extraction method of the invention improves the recovery rate of plasmid in the process of plasmid extraction.

【技术实现步骤摘要】
一种质粒提取方法
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种质粒提取方法。
技术介绍
质粒(plasmid)是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体(或拟核)以外的DNA分子，存在于细胞质中，具有自主复制能力，一般包括超螺旋、开环和线性三种结构，其中超螺旋结构的质粒DNA在细胞中的转化和表达效率最高。质粒的长度一般在2-20kbp，分子量一般在106以上，质粒DNA分子因具有磷酸基团而显负电，也会与一些基团发生特异性结合。目前基于质粒DNA的基因编辑和调控技术已广泛应用于科学研究，农业检测，医疗诊断等领域中，在疾病治疗研究中乃至临床上的应用倍受瞩目。基因编辑和基因治疗是利用基因修正手段从分子水平上进行疾病治疗的新兴技术。治疗机理主要是通过基因转移技术奖携带治疗性基因的外源基因导入病变细胞中从而修饰或阻断致病基因，从而实现对疾病的治疗。因质粒DNA分子具有更好的安全性及更低的毒性和免疫原性等优点，高质量DNA质粒的大规模的分离纯化技术被迫切需要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种质粒提取方法，用于提取不同大小的质粒和提高质粒提取的回收率。本专利技术提供了一种质粒提取方法，包括如下步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种质粒提取方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将含有质粒的菌体裂解液上样第一层析柱，使用第一溶液进行洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第一洗脱液；其中，所述第一层析柱填料为琼脂糖凝胶6FF；(2)将所述第一洗脱液上样第二层析柱，使用第二溶液进行洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第二洗脱液；其中，所述第二层析柱填料为琼脂糖珠与固定在琼脂糖珠上的2‑巯基吡啶配体；(3)将所述第二洗脱液上样第三层析柱，使用第三溶液进行洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第三洗脱液；其中，所述第三层析柱填料为葡聚糖；(4)将所述第三洗脱液上样第四层析柱，使用第四溶液洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第四洗脱液；其中，所述第...

【技术特征摘要】
1.一种质粒提取方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将含有质粒的菌体裂解液上样第一层析柱，使用第一溶液进行洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第一洗脱液；其中，所述第一层析柱填料为琼脂糖凝胶6FF；(2)将所述第一洗脱液上样第二层析柱，使用第二溶液进行洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第二洗脱液；其中，所述第二层析柱填料为琼脂糖珠与固定在琼脂糖珠上的2-巯基吡啶配体；(3)将所述第二洗脱液上样第三层析柱，使用第三溶液进行洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第三洗脱液；其中，所述第三层析柱填料为葡聚糖；(4)将所述第三洗脱液上样第四层析柱，使用第四溶液洗脱，收集含有质粒的洗脱液，获得第四洗脱液；其中，所述第四层析柱填料为带有季铵基团单苯乙烯/二乙烯基苯珠粒。2.一种根据权利要求1所述的质粒提取方法，其特征在于，所述第四溶液为1.0MNaCl,10mMEDTA,100mMTris-HCl,pH7.5。3.根据权利要求2所述的质粒提取方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，所述第四溶液洗脱为线性梯度洗脱。4.根据权利要求3所述的质粒提取方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐宇虹，陈鸣晓，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海,31