一种一步式胚胎培养液及其制备方法技术

本发明专利技术属于辅助生殖领域，具体涉及一种一步式胚胎培养液及其制备方法。本发明专利技术中用于制备一步式胚胎培养液的组合物，所述组合物由(±)‑α‑硫辛酸、乙酰L‑肉碱或乙酰L‑肉碱盐酸盐组成；所述(±)‑α‑硫辛酸与乙酰L‑肉碱或乙酰L‑肉碱盐酸盐的摩尔比为0.055‑0.098：0.044‑0.078。利用该组合物制备的一步式胚胎培养液保留了胚胎分泌入培养液中的有效成分，能起到保护细胞并抑制分解利用有害产物的作用，避免胚胎移植过程中可能受到的机械损伤和培养环境不同造成的应激反应而导致的囊胚形成率不高的问题。

A one-step embryo culture solution and its preparation method

The invention belongs to the field of assisted reproduction, in particular to a one-step embryo culture liquid and a preparation method thereof. In the present invention, a composition for preparing one step embryo culture fluid is made up of (+) (+) alpha lipoic acid, acetyl L carnitine or acetyl L sodium carnitine hydrochloride; the molar ratio of (+) alpha lipoic acid to acetyl L or acetyl carnitine or acetyl L carnitine hydrochloride is 0.055. The one step embryo culture liquid prepared by this composition preserves the effective components of the embryo secreted into the culture medium, can protect the cells and inhibit the decomposition and utilization of harmful products, and avoid the blastocyst formation rate caused by the possible mechanical damage and the different culture environment in the embryo transfer process. The high problem.

【技术实现步骤摘要】
一种一步式胚胎培养液及其制备方法
本专利技术属于辅助生殖领域，具体涉及一种一步式胚胎培养液及其制备方法。
技术介绍
体外受精-胚胎移植InVitroFertilization-EmbryoTransfer简称IVF-ET，是指分别将卵子与精子取出后，体外受精，再将胚胎前体——受精卵移植回母体子宫内发育成胎儿。试管婴儿是用人工方法让卵子和精子在体外受精并进行早期胚胎发育，然后移植到母体子宫内发育而诞生的婴儿。自从世界上第一个“试管”婴孩于1978年7月25日在英国出生后，到2012年7月1日已有500万个“试管”婴孩诞生。IVF为全球超过占5000万不孕症夫妇带来了福音。然而，三十多年的临床实践并没有显著提高IVF的成功率。2011年，美国妊娠协会统计35岁病人IVF成功率(受孕率)在25-30％左右，而1997年也在30％左右，而婴儿出生率更低。其中一个重要的原因是IVF胚胎培养液的质量，这是IVF胚胎质量最重要的决定性因素之一。IVF培养通常分为两种流程即两种培养液系列：全程(单/一步式培养液系列)和分程(双培养液系列)。利用双培养液系列流程对胚胎早期和后期阶段提供不同的培养液成份，但也丢失了由胚胎分泌入培养液中的重要的有效成份，如胚胎营养因子。全程培养液系列流程保留了这些重要的有效成份，但也保留了培养液中有害的分解产物。目前使用的受精液调配的营养不全，或其物理或化学指标过余宽，同样的试验过程、同批次精液在培养过程中容易使精子或卵细胞死亡、或精子获能不足活力较低、或卵细胞生存受到影响，如在精子活力试验中，精子保持活力的比率较低，或其比率接近或低于合格标准(保持活力率≥75％)。有些受精液的稠度较高，其含有有害成份和炎细胞去除不干净，严重影响受精卵的发育成长。另外，一般培养液在使用前不能直观地判断有效性的好坏，如果在其变质后仍继续使用将对试验或临床操作造成不可逆转的结果。因此需要开发一种无需更换培养液、含有重要有效成分并能抑制有害产物的一步式胚胎培养液。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于制备一步式胚胎培养液的组合物及一步式胚胎培养液，本专利技术的一步式胚胎培养液保留了胚胎分泌入培养液中的有效成分，能起到保护细胞并抑制分解利用有害产物的作用。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：用于制备一步式胚胎培养液的组合物，所述组合物由(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐组成；所述(±)-α-硫辛酸与乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐的摩尔比为0.055-0.098：0.044-0.078。关键物料A：(±)-α-硫辛酸α-硫辛酸(LA)以闭环二硫化物形式和开链还原形式两种结构混合物存在，这两种形式通过氧化-还原循环相互转换，像生物素一样，硫辛酸事实上常常不游离存在，而是以其羧基同酶分子(如二氢硫辛酸乙酰转移酶)中赖氨酸残基的ε-NH2基以酰胺键共价结合(结构上与生物胞素十分相似)。硫辛酸享有“万能抗氧化剂”之称，在生物体内广泛存在，是一种具有广泛生物学活性的二硫化合物，具有很强的抗氧化活性，LA可以清除体内氧自由基，螯合金属离子，再生体内其他抗氧化剂来发挥抗氧化作用，保护线粒体功能、调节能量代谢。其中活性氧(reactiveoxidativespecies，ROS)/氧自由基导致的氧化应激对男性睾丸和精子的损伤可能是男性不育的原因之一。LA在生物体内可以转化为还原型的DHLA，两者共同作用，几乎能清除生殖系统中所有的ROS及自由基，如单线态氧、羟基自由基、过氧化氢、过氧化亚硝基、一氧化氮和次氯酸等。对于轻度的氧化损伤，维生素C(vitaminC，VitC)、维生素E(vitaminE，VitE)和LA均可修复，但重度的氧化损伤只有维生素E和LA有效，尤其是LA，不仅能修复重度氧化损伤，而且能够抵抗长时间、持续性的氧化损伤。机体的抗氧化防御系统主要由LA、VitC、VitE、辅酶Q10、谷胱甘肽(GSH)5种抗氧化剂构成。LA(包括DHLA)是唯一能够使该系统中所有的抗氧化剂包括LA自己，被再生为还原型抗氧化剂，从而激活生物体内其他抗氧剂的代谢循环，形成独特的抗氧化剂再生循环网络，共同发挥生物抗氧化作用，维持机体正常的氧化-抗氧化动态平衡。螯合金属离子睾丸是重金属的重要靶器官之一，对人体毒害最大的重金属主要为铅、汞、铬、砷、镉5种，镉是已知的最容易在体内蓄积的毒物，排出速度慢，慢性积累可直接破坏睾丸细胞DNA结构并抑制其修复，催化产生的大量自由基，易引发睾丸与精子细胞膜脂质过氧化等严重的生殖损伤。LA和DHLA可以在体内外螯合多种重金属离子，如铜、锌、铅、砷、镉等金属离子。线粒体是细胞生命活动的控制中心，是细胞内能量转换体系和供能中心，且参与一般抗氧化防御及细胞凋亡等重要生理过程的调控。精子运动所需能量来自糖酵解和线粒体呼吸代谢中产生的ATP，所以各种原因导致的线粒体结构和功能改变均可导致线粒体能量合成障碍，精子活力降低。LA被称为线粒体营养素，即可保护线粒体酶、减少线粒体ROS的产生或清除过量的ROS、诱导Ⅱ相酶增强细胞抗氧化能力、修复线粒体。关键物料B：乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐是左旋肉碱的酯化物，它呈白色粉末，易溶于水，不溶于丙酮。乙酰L-肉碱是存在于体内的一种自然物质，尤其在肌肉、大脑及精子中含量特别丰富，在人体内参与一系列重要的代谢过程，它从细胞中带走乙酰基并协助能量转移。乙酰L-肉碱在中枢神经系统和男性生殖中起到重要作用。乙酰L-肉碱的主要作用：①转运脂肪酸进入线粒体并在此进行B-氧化；②保护细胞：将过量的脂酰辅酶A排除体外防止其损坏细胞；③防止乳酸积累。激烈运动后产生大量乳酸，左旋肉碱可减少乳酸生成量，提高运动耐力；同时，它还有促进碳水化合物等物质能量利用，提高精子数目和活力等作用。乙酰L-肉碱可防止细胞质中脂肪酸和线粒体中乙酰辅酶A的毒性积累，同时为线粒体中能量的产生提供足够的乙酰辅酶A。乙酰L-肉碱及其盐酸盐具有多种生理活性，包括营养作用，神经保护作用，周围神经系统的止痛作用，促进能量代谢以及将长链脂肪酸转运至线粒体内膜参与氧化磷酸化并产生ATP供能，调节病理条件下的抗氧化酶类发挥抗氧化作用以及在男性生殖系统中的作用等。进一步，所述(±)-α-硫辛酸与乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐的摩尔比为0.065-0.098：0.054-0.078。作为一种优选，所述(±)-α-硫辛酸与乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐的摩尔比为0.065-0.0875：0.064-0.078。作为一种优选，所述(±)-α-硫辛酸与乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐的摩尔比为0.078：0.078。(±)-α-硫辛酸含量过低导致胚胎发育过程出现中毒现象，胚胎形成率低，形态差等现象；如果过高导致胚胎无法正常分裂并死亡。乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐含量过低导致胚胎发育后期细胞裂解，过高导致胚胎活性低。本专利技术的目的之二在于提供一种一步式胚胎培养液，由(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐和基本培养液组成，所述(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐和基本培养液的摩尔比为0.055-0.098：0.044-0.078：135.251-167.614。一步式胚胎培养液本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于制备一步式胚胎培养液的组合物，其特征在于，所述组合物由(±)‑α‑硫辛酸、乙酰L‑肉碱或乙酰L‑肉碱盐酸盐组成；所述(±)‑α‑硫辛酸与乙酰L‑肉碱或乙酰L‑肉碱盐酸盐的摩尔比为0.055‑0.098：0.044‑0.078。

【技术特征摘要】
1.用于制备一步式胚胎培养液的组合物，其特征在于，所述组合物由(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐组成；所述(±)-α-硫辛酸与乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐的摩尔比为0.055-0.098：0.044-0.078。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述(±)-α-硫辛酸与乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐的摩尔比为0.065-0.098：0.054-0.078。3.一步式胚胎培养液，其特征在于，由(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐和基本培养液组成，所述(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐和基本培养液的摩尔比为0.055-0.098：0.044-0.078：135.251-167.614。4.根据权利要求3所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述基本培养液包括无机盐缓冲液、氨基酸、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、人血清白蛋白和杀菌剂。5.根据权利要求4所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述无机盐缓冲液、氨基酸、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇的摩尔比为98.303-120.12：1.2-3.8：0.009-0.012：9.459-11.561：24.741-30.239：0.432-0.528：0.9-1.1：0.207-0.254。6.根据权利要求4所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，在100ml一步式胚胎培养液中所述人血清白蛋白的含量为0.45-0.55g/L；在100ml一步式胚胎培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：余裕炉，戴甄，王瞿波，贾晓伟，米乐，刘红军，严飞，
申请(专利权)人：成都艾伟孚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51