一种荧光染料及其制备方法与在细菌检测中的应用技术

本发明专利技术涉及一种荧光染料及其制备方法与在细菌检测中的应用，本发明专利技术的荧光染料以高亲和力结合dsDNA的光反应性染料，自身的荧光非常微弱，但是结合核酸后荧光信号很强，这些染料是细胞膜不可渗透的，只能进入破损的细胞膜与DNA通过共价键结合从而导致永久的DNA修饰，这些被修饰过的DNA不能够再扩增，因此与PCR方法联合使用能够很好的弥补常规检测方法的不足。

A fluorescent dye and its preparation method and its application in bacteria detection

The present invention relates to a fluorescent dye and its preparation method and application in the detection of bacteria. The fluorescent dye of the present invention has a light reactive dye with high affinity to dsDNA, and its fluorescence is very weak, but the fluorescent signal is strong after the combination of nucleic acid. These dyes are impermeable to the cell membrane and can only enter the damaged cells. The combination of membrane and DNA through covalent bonds leads to permanent DNA modification, and these modified DNA can not be reamplified, so the combination of the PCR method can make up for the shortcomings of the conventional detection methods.

【技术实现步骤摘要】
一种荧光染料及其制备方法与在细菌检测中的应用
本专利技术属于染料化合物
，具体涉及一种荧光染料及其制备方法与在细菌检测中的应用。
技术介绍
常规细菌培养法是最常见的细菌检测方法。但是有些细菌处于特殊的存活状态中，即处于细菌活的非可培养状态（Viablebutnonculturablestate，VBNC），其特征是具有生物活性和致病性（即隐形传染源），但在常规条件下培养时，在培养基上不生长繁殖导致常规细菌培养法失去效力。对于这样状态细菌的检测，在食品检疫、水质检测与疾病预防与控制等领域显得尤其重要。比如食源性病原菌一旦进入VBNC状态常会造成漏检，从而引起严重的公共卫生危机，甚至会发生传染病的爆发。为了检测到处于活的非可培养状态的细菌的方法有很多种，其中一种是基于核酸（DNA）分子的VBNC细菌PCR检测方法。该方法具备很大的优点，因为VBNC细菌基因组DNA易提取，PCR技术又非常快速、灵敏、特异，并且操作简便。但在实际应用中，该法一个最大的缺憾便是难以排除假阳性的干扰。因为在对基因组DNA的提取时，如果无法对死细菌和活细菌进行区分时，死细菌中的DNA有时会依然具备扩增性，死本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种荧光染料，具有如下化学结构式：

【技术特征摘要】
1.一种荧光染料，具有如下化学结构式：其中，R1、R2独立的选自C1～C3的直链烷基；n为1～4；m为1～4；R为阴离子；R`为阴离子。2.根据权利要求1所述荧光染料，其特征在于，R`为两个氯离子；R为四个氯离子。3.根据权利要求1所述荧光染料，其特征在于，所述荧光染料化学结构式如下：。4.一种荧光染料的制备方法，包括以下步骤：（1）以3,8-二氨基-6-苯基菲啶与氯甲酸乙酯为原料制备中间体I；（2）以中间体I与碘化物为原料制备中间体II；（3）以中间体II与胺化合物为原料制备中间体III；（4）以中间体III与碘化合物为原料制备中间体IV；（5）以中间体IV与氢溴酸为原料制备中间体V；（6）将中间体V、酸混合后再滴加亚硝酸钠溶液，搅拌后滴加叠氮化钠溶液，反应得到荧光染料。5.根据权利要求4所述荧光染料的制备方法，其特征在于，所述碘化物的化学结构式为I（C...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏继波，聂承斌，赵文俊，杨钰，
申请(专利权)人：苏州宇恒生物科技有限公司，宿迁艾瑞斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32