人工核酸分子制造技术

本发明专利技术涉及人工核酸分子，其包含至少一个可读框和至少一个3’‑非翻译区元件(3’‑UTR元件)和/或至少一个5’‑非翻译区元件(5’‑UTR元件)，其中所述人工核酸分子的特征在于高翻译效率。所述翻译效率至少部分归因于所述5’‑UTR元件或所述3’‑UTR元件，或者归因于所述5’‑UTR元件和所述3’‑UTR元件二者。本发明专利技术还涉及所述人工核酸分子在基因治疗和/或基因疫苗接种中的用途。此外，提供了新型的3’‑UTR元件和5’‑UTR元件。

Artificial nucleic acid molecule

The invention relates to an artificial nucleic acid molecule, which contains at least one readable frame and at least one 3 'untranslated region element (3' UTR element) and / or at least one 5 'untranslated region element (5' UTR element), in which the characteristics of the artificial nucleic acid molecules lie in the translation efficiency. The translation efficiency is at least partly attributable to the 5 'UTR element or the 3' UTR element, or to the 5 'UTR element and the 3' UTR element. The invention also relates to the use of the artificial nucleic acid molecules in gene therapy and / or gene vaccine inoculation. In addition, a new 3 'UTR component and a 5' UTR element are provided.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人工核酸分子本专利技术涉及人工核酸分子，其包含可读框、3’-非翻译区元件(3’-UTR元件)和/或5’-非翻译区元件(5’-UTR元件)和任选地聚腺苷酸序列(poly(A)序列)和/或聚腺苷酸化-信号。本专利技术还涉及包含3’-UTR元件和/或5’-UTR元件的载体，涉及包含所述人工核酸分子或所述载体的细胞，涉及包含所述人工核酸分子或所述载体的药物组合物，以及涉及包含所述人工核酸分子、所述载体和/或所述药物组合物的试剂盒，优选用于基因治疗和/或基因接种疫苗的领域。基因治疗和基因接种疫苗属于最有希望和快速发展的现代医学方法。它们可以为多种疾病的治疗提供高度特异和个性化选择。尤其是，不仅遗传病，而且自身免疫疾病、癌或肿瘤相关疾病以及炎性疾病可以是此种治疗方法的对象。而且，人们设想通过这些方法预防此类疾病的早期发病。基因治疗背后的主要构思理念为适当调节与特定疾病的病理状态相关的受损的基因表达。病理学上改变的基因表达可以导致缺少或过量生产关键基因产物，例如，信号传导因子诸如激素，看家因子(housekeepingfactors)，代谢酶，结构蛋白等。改变的基因表达可以不仅由于转录和/或翻译的错误调节引起，而且还由于编码特定蛋白的ORF内的突变引起。病理突变可以由例如染色体畸变，或由更特异突变，如点或移码突变引起，它们全部都导致受限的功能，以及可能完全丧失基因产物的功能。然而，如果突变影响编码参与细胞的转录或翻译机制的蛋白的基因，转录或翻译的错误调节也可能发生。此种突变可以导致基因病理上调或下调，所述基因本身是功能性的。编码发挥此种调节功能的基因产物的基因，可以是例如，转录因子、信号受体、信使蛋白等。然而，此种编码调节蛋白的基因的功能缺失，在某些情况下可以由人工引入进一步作用于受损的基因产物下游的其它因子反转。此种基因缺陷还可以通过置换受影响基因本身的基因治疗补偿。基因接种疫苗允许引起对选择的抗原所需的免疫应答，所述选择的抗原诸如细菌表面的特征组分、病毒粒子、肿瘤抗原等。一般而言，疫苗接种是现代医学的关键性成就之一。然而，目前仅对有限的疾病有可用的有效疫苗。因此，不能由疫苗接种预防的感染每年仍然影响数百万人。通常，疫苗可以细分为“第一代”、“第二代”和“第三代”疫苗。“第一代”疫苗典型地是全生物体疫苗。它们基于活的和减毒或被杀灭的病原体，例如病毒、细菌等。活疫苗和减毒疫苗的主要缺点是向危及生命的变体回复的风险。因此，尽管被减毒，但此种病原体本质上仍然可以带有不可预测的风险。杀灭的病原体可能不如所需要的那样有效产生特异免疫应答。为了最小化这些风险，开发了“第二代”疫苗。这些典型地为亚单位疫苗，所述亚单位疫苗由源自病原体的限定的抗原或重组蛋白组分组成。基因疫苗，即用于基因接种的疫苗，通常被理解为“第三代”疫苗。它们典型地由遗传改造的核酸分子构成，所述遗传改造的核酸分子允许在体内表达病原体或肿瘤抗原特征性的肽或蛋白(抗原)片段。在施用于患者，由靶细胞摄取后，基因疫苗表达。施用的核酸的表达导致产生编码的蛋白。如果这些蛋白被患者的免疫系统识别为外源物，则引发免疫应答。如从上文可以看出的，基因治疗和基因接种疫苗这两种方法基本上都基于向患者施用核酸分子并随后转录和/或翻译编码的遗传信息。备选地，基因接种疫苗或基因治疗还可以包括以下方法：所述方法包括从要治疗的患者分离特定的体细胞，随后离体转染此种细胞，并将处理后的细胞再施用于患者。DNA以及RNA可以用作在基因治疗或基因接种疫苗范畴内施用的核酸分子。已知DNA相对稳定并易于操作。然而，使用DNA承担施用的DNA-片段不希望的插入患者基因组中、从而潜在地导致突变事件如受损基因功能的丧失的风险。作为进一步的风险，出现不希望产生的抗DNA抗体。另一个缺点是在DNA施用后可以获得的编码肽或蛋白的有限表达水平，因为DNA必需进入核，才能被转录，之后得到的mRNA可以被翻译。在其它原因中，施用的DNA的表达水平将依赖于调节DNA转录的特定转录因子的存在。在缺少此种因子的情况下，DNA转录将不产生令人满意量的RNA。从而，获得的翻译的肽或蛋白的水平有限。通过使用RNA替代DNA用于基因治疗或基因接种疫苗，不希望的基因组整合和抗DNA抗体产生的风险被最小化或被避免。然而，RNA被认为是相当不稳定的分子种类，其可以容易地被遍在的RNA酶降解。通常，RNA-降解促进调节RNA半衰期。该效果被认为和证明是精细调整真核基因表达的调节(Friedel等人，2009.ConservedprinciplesofmammaliantranscriptionalregulationrevealedbyRNAhalf-life，NucleicAcidResearch37(17)：1-12)。因此，每个天然存在的mRNA具有依赖于mRNA源自的基因以及其在何种细胞类型中表达的其各自的半衰期。其促进调节该基因的表达水平。不稳定RNA对于及时在不同点实现瞬时基因表达是重要的。然而，耐久的RNA可能与不同蛋白的积累或基因的连续表达相关。在体内，mRNA的半衰期还可以依赖于环境因素，如激素处理，如例如对胰岛素样生长因子I、肌动蛋白和白蛋白mRNA所显示的(Johnson等人，NewlysynthesizedRNA：SimultaneousmeasurementinintactcellsoftranscriptionratesandRNAstabilityofinsulin-likegrowthfactorI，actin，andalbuminingrowthhormone-stimulatedhepatocytes，Proc.Natl.Acad.Sci.，第88卷，第5287-5291页，1991)。对于基因治疗和基因接种疫苗，通常需要稳定的RNA。一方面，这是由于通常需要由RNA序列编码的产物在体内积累的事实。另一方面，当在其储存过程中制备成合适剂型时，和当施用时，RNA必须保持其结构和功能完整性。因此，对提供用于基因治疗或基因接种疫苗的稳定RNA分子进行尝试，以阻止它们经历早期降解或衰变。据报道，核酸分子的G/C-含量可以影响其稳定性。因此，包含增加量的鸟嘌呤(G)和/或胞嘧啶(C)残基的核酸可以比含有大量腺嘌呤(A)和胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)核苷酸的核酸在功能上更稳定。在这方面，WO02/098443提供含有由编码区中的序列修饰稳定化的mRNA的药物组合物。此序列修饰利用遗传密码简并性。因此，含有不太有利的核苷酸组合(就RNA稳定性而言不太有利)的密码子可以在不改变编码的氨基酸序列的情况下被替代的密码子置换。该RNA稳定化方法受提供不允许留下所需氨基酸序列间隔的各个单个RNA分子的特定核苷酸序列限制。此外，该方法限于RNA的编码区。作为mRNA稳定化的备选方案，已经发现天然存在的真核mRNA分子含有特有的稳定化元件。例如，它们可以包含在其5′末端(5′-UTR)和/或在其3′末端(3′-UTR)的所谓非翻译区(UTR)以及其它结构特征，如5′-帽结构或3′-聚腺苷酸(poly(A))尾。5′-UTR和3′-UTR二者都典型地从基因组DNA转录并且因此是成熟前(premature)mRNA元件。在mRNA加本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人工核酸分子，其包含a.至少一个可读框(ORF)；和b.至少一个3’‑非翻译区元件(3’‑UTR元件)和/或至少一个5’‑非翻译区元件(5’‑UTR元件)，其中所述人工核酸分子的特征为高翻译效率。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.08.28 EP PCT/EP2015/0017551.一种人工核酸分子，其包含a.至少一个可读框(ORF)；和b.至少一个3’-非翻译区元件(3’-UTR元件)和/或至少一个5’-非翻译区元件(5’-UTR元件)，其中所述人工核酸分子的特征为高翻译效率。2.权利要求1的人工核酸分子，其中所述高翻译效率由所述至少一个3’-非翻译区元件(3’-UTR元件)和/或所述至少一个5’-非翻译区元件(5’-UTR元件)提供。3.权利要求1或权利要求2的人工核酸分子，其中所述人工核酸分子的翻译效率与参比核酸分子的翻译效率进行比较，其中所述参比核酸分子包含至少一个可读框(ORF)，所述可读框与所述人工核酸分子的至少一个ORF相同；并且，其中所述参比核酸分子不包含所述人工核酸分子的至少一个3’-非翻译区元件(3’-UTR元件)和/或所述人工核酸分子的至少一个5’-非翻译区元件(5’-UTR元件)，其中所述人工核酸分子的翻译效率与所述参比核酸分子的翻译效率通过包括下述步骤的方法进行比较：(i)用所述人工核酸分子转染哺乳动物细胞，并且在转染后特定时间点(例如，24或48小时)测量由所述人工核酸分子的ORF编码的蛋白的表达量，(ii)用所述参比核酸分子转染哺乳动物细胞，并且在转染后相同时间点测量所述参比核酸分子的ORF编码的蛋白的表达量，(iii)计算从所述人工核酸分子表达的蛋白量与从所述参比核酸分子表达的蛋白量的比率，其中在(iii)中计算的比率≥1，优选＞1。4.根据权利要求3所述的人工核酸分子，其中所述ORF编码能被定量的蛋白，优选报道蛋白。5.权利要求3或4的人工核酸分子，其中所述参比核酸分子包含在所述人工核酸分子中不存在的3’-UTR元件，或其中所述参比核酸分子包含在所述人工核酸分子中不存在的5’-UTR元件。6.权利要求5的人工核酸分子，其中所述参比核酸分子包含源自下述的3’-UTR元件：白蛋白基因的3’-UTR，优选对应于SEQIDNO：207所示的序列的3’-UTR，或其中所述参比核酸分子包含源自下述的5’-UTR元件：TOP基因的5’-UTR，优选缺少5’端寡嘧啶束的人大核糖体蛋白32的5’-UTR，优选对应于SEQIDNO：208所示的序列的5’-UTR。7.权利要求3或4的人工核酸分子，其中所述参比核酸分子不包含任意3’-非翻译区元件(3’-UTR元件)，或其中所述参比核酸分子不包含任意5’-非翻译区元件(5’-UTR元件)。8.权利要求6的人工核酸分子，其中所述方法进一步的特征在于：(a)在转染步骤中，所述细胞是选自HDF、L929、HEP2G和HeLa细胞的组的哺乳动物细胞；(b)测量的时间点是转染后24小时；和(c)所述参比核酸分子是SEQIDNO：205的mRNA(图1A)。9.根据权利要求1至4中任一项所述的人工核酸分子，其中所述可读框源自与所述至少一个3’-UTR元件和/或所述至少一个5’-UTR元件来源的基因不同的基因。10.根据权利要求1至9中任一项所述的人工核酸分子，其包含至少一个3’-UTR元件和至少一个5’-UTR元件。11.据权利要求10所述的人工核酸分子，其中所述至少一个可读框、所述至少一个3’-UTR元件和所述至少一个5’-UTR元件中的每一个彼此异源。12.根据权利要求1至11中任一项所述的人工核酸分子，其中所述人工核酸分子不包含下述的3’-UTR和/或5’-UTR：核糖体蛋白S6，RPL36AL，rps16或核糖体蛋白L9，并且其中所述人工核酸分子的可读框不编码GFP蛋白。13.根据权利要求12所述的人工核酸分子，其中所述人工核酸分子的可读框不编码报道蛋白。14.根据权利要求1至13中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个3’-UTR元件和/或所述至少一个5’-UTR元件源自稳定mRNA。15.根据权利要求1至14中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个3’-UTR元件和/或所述至少一个5’-UTR元件包含下述核酸序列或由下述核酸序列组成：所述核酸序列源自真核生物蛋白编码基因的3’-UTR和/或5’-UTR，优选源自脊椎动物蛋白编码基因的3’-UTR和/或5’-UTR，更优选源自哺乳动物蛋白编码基因的3’-UTR和/或5’-UTR，甚至更优选源自灵长类蛋白编码基因的3’-UTR和/或5’-UTR，特别源自人或鼠蛋白编码基因的3’-UTR和/或5’-UTR。16.根据权利要求1至15中任一项所述的人工核酸分子，其中，与从缺少3’-UTR和/或至少一个5’-UTR的参比核酸分子的蛋白产生相比，所述至少一个3’-UTR元件和/或所述至少一个5’-UTR元件分别使所述人工核酸分子的翻译效率增加至少1.2倍，优选至少1.5倍，更优选至少2倍，甚至更优选至少2.5倍，和/或，其中，与从缺少3’-UTR和/或至少一个5’-UTR的参比核酸分子的蛋白产生相比，所述至少一个3’-UTR元件和/或所述至少一个5’-UTR元件为所述人工核酸分子提供至少1.5倍、优选至少2倍、更优选至少2.5倍的高翻译效率。17.根据权利要求1至16中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个3’-UTR元件和/或所述至少一个5’-UTR元件包含下述核酸序列或由下述核酸序列组成：所述核酸序列源自选自由下述组成的组的基因的转录本的3’-UTR和/或5’-UTR：ZNF460，TGM2，IL7R，BGN，TK1，RAB3B，CBX6，FZD2，COL8A1，NDUFS7，PHGDH，PLK2，TSPO，PTGS1，FBXO32，NID2，ATP5D，EXOSC4，NOL9，UBB4B，VPS18，ORMDL2，FSCN1，TMEM33，TUBA4A，EMP3，TMEM201，CRIP2，BRAT1，SERPINH1，CD9，DPYSL2，CDK9，TFRC，PSMB35’-UTR，FASN，PSMB6，PRSS56，KPNA6，SFT2D2，PARD6B，LPP，SPARC，SCAND1，VASN，SLC26A1，LCLAT1，FBXL18，SLC35F6，RAB3D，MAP1B，VMA21，CYBA，SEZ6L2，PCOLCE，VTN，ALDH16A1，RAVER1，KPNA6，SERINC5，JUP，CPN2，CRIP2，EPT1，PNPO，SSSCA1，POLR2L，LIN7C，UQCR10，PYCRL，AMN，MAP1S，NDUFS7，PHGDH，TSPO，ATP5D，EXOSC4，TUBB4B，TUBA4A，EMP3，CRIP2，BRAT1，CD9，CDK9，PSMB3，PSMB6，PRSS56，SCAND1，AMN，CYBA，PCOLCE，MAP1S，VTN，ALDH16A1(全部优选是人的)和Dpysl2，Ccnd1，Acox2，Cbx6，Ubc，Ldlr，Nudt22，Pcyox11，Ankrd1，Tmem37，Tspyl4，Slc7a3，Cst6，Aacs，Nosip，Itga7，Ccnd2，Ebp，Sf3b5，Fasn，Hmgcs1，Osr1，Lmnb1，Vma21，Kif20a，Cdca8，Slc7a1，Ubqln2，Prps2，Shmt2，Aurkb，Fignl1，Cad，Anln，Slfn9，Ncaph，Pole，Uhrf1，Gja1，Fam64a，Kif2c，Tspan10，Scand1，Gpr84，Fads3，Cers6，Cxcr4，Gprc5c，Fen1，Cspg4，Mrpl34，Comtd1，Armc6，Emr4，Atp5d，1110001J03Rik，Csf2ra，Aarsd1，Kif22，Cth，Tpgsl，Ccl17，Alkbh7，Ms4a8a，Acox2，Ubc，Slpi，Pcyox11，Igf2bp1，Tmem37，Slc7a3，Cst6，Ebp，Sf3b5，Plk1，Cdca8，Kif22，Cad，Cth，Pole，Kif2c，Scand1，Gpr84，Tpgs1，Ccl17，Alkbh7，Ms4a8a，Mrpl34，Comtd1，Armc6，Atp5d，1110001J03Rik，Nudt22，Aarsd1(全部优选是小鼠的)。18.根据权利要求17所述的人工核酸分子，其中所述至少一个5’-UTR元件包含源自选自由下述组成的组的基因的转录本的5’-UTR的核酸序列：ZNF460-5’-UTR，TGM2-5’-UTR，IL7R-5’-UTR，BGN-5’-UTR，TK1-5’-UTR，RAB3B-5’-UTR，CBX6-5’-UTR，FZD2-5’-UTR，COL8A1-5’-UTR，NDUFS7-5’-UTR，PHGDH-5’-UTR，PLK2-5’-UTR，TSPO-5’-UTR，PTGS1-5’-UTR，FBXO32-5’-UTR，NID2-5’-UTR，ATP5D-5’-UTR，EXOSC4-5’-UTR，NOL9-5’-UTR，UBB4B-5’-UTR，VPS18-5’-UTR，ORMDL2-5’-UTR，FSCN1-5’-UTR，TMEM33-5’-UTR，TUBA4A-5’-UTR，EMP3-5’-UTR，TMEM201-5’-UTR，CRIP2-5’-UTR，BRAT1-5’-UTR，SERPINH1-5’-UTR，CD9-5’-UTR，DPYSL2-5’-UTR，CDK9-5’-UTR，TFRC-5’-UTR，PSMB35’-UTR，FASN-5’-UTR，PSMB6-5’-UTR，PRSS56-5’-UTR，KPNA6-5’-UTR，SFT2D2-5’-UTR，PARD6B-5’-UTR，LPP-5’-UTR，SPARC-5’-UTR，SCAND1-5’-UTR，VASN-5’-UTR，SLC26A1-5’-UTR，LCLAT1-5’-UTR，FBXL18-5’-UTR，SLC35F6-5’-UTR，RAB3D-5’-UTR，MAP1B-5’-UTR，VMA21-5’-UTR，CYBA-5’-UTR，SEZ6L2-5’-UTR，PCOLCE-5’-UTR，VTN-5’-UTR，ALDH16A1-5’-UTR，RAVER1-5’-UTR，KPNA6-5’-UTR，SERINC5-5’-UTR，JUP-5’-UTR，CPN2-5’-UTR，CRIP2-5’-UTR，EPT1-5’-UTR，PNPO-5’-UTR，SSSCA1-5’-UTR，POLR2L-5’-UTR，LIN7C-5’-UTR，UQCR10-5’-UTR，PYCRL-5’-UTR，AMN-5’-UTR，MAP1S-5’-UTR，(全部优选是人的)和Dpysl2-5’-UTR，Ccnd1-5’-UTR，Acox2-5’-UTR，Cbx6-5’-UTR，Ubc-5’-UTR，Ldlr-5’-UTR，Nudt22-5’-UTR，Pcyox11-5’-UTR，Ankrd1-5’-UTR，Tmem37-5’-UTR，Tspyl4-5’-UTR，Slc7a3-5’-UTR，Cst6-5’-UTR，Aacs-5’-UTR，Nosip-5’-UTR，Itga7-5’-UTR，Ccnd2-5’-UTR，Ebp-5’-UTR，Sf3b5-5’-UTR，Fasn-5’-UTR，Hmgcs1-5’-UTR，Osr1-5’-UTR，Lmnb1-5’-UTR，Vma21-5’-UTR，Kif20a-5’-UTR，Cdca8-5’-UTR，Slc7a1-5’-UTR，Ubqln2-5’-UTR，Prps2-5’-UTR，Shmt2-5’-UTR，Aurkb-5’-UTR，Fignl1-5’-UTR，Cad-5’-UTR，Anln-5’-UTR，Slfn9-5’-UTR，Ncaph-5’-UTR，Pole-5’-UTR，Uhrfl-5’-UTR，Gja1-5’-UTR，Fam64a-5’-UTR，Kif2c-5’-UTR，Tspan10-5’-UTR，Scand1-5’-UTR，Gpr84-5’-UTR，Fads3-5’-UTR，Cers6-5’-UTR，Cxcr4-5’-UTR，Gprc5c-5’-UTR，Fen1-5’-UTR，Cspg4-5’-UTR，Mrpl34-5’-UTR，Comtd1-5’-UTR，Armc6-5’-UTR，Emr4-5’-UTR，Atp5d-5’-UTR，1110001J03Rik-5’-UTR，Csf2ra-5’-UTR，Aarsd1-5’-UTR，Kif22-5’-UTR，Cth-5’-UTR，Tpgs1-5’-UTR，Ccl17-5’-UTR，Alkbh7-5’-UTR，Ms4a8a-5’-UTR(全部优选是小鼠的)。19.根据权利要求17所述的人工核酸分子，其中所述至少一个3’-UTR元件包含源自选自由下述组成的组的基因的转录本的3’-UTR的核酸序列：NDUFS7-3’-UTR，PHGDH-3’-UTR，TSPO-3’-UTR，ATP5D-3’-UTR，EXOSC4-3’-UTR，TUBB4B-3’-UTR，TUBA4A-3’-UTR，EMP3-3’-UTR，CRIP2-3’-UTR，BRAT1-3’-UTR，CD9-3’-UTR，CDK9-3’-UTR，PSMB3-3’-UTR，PSMB6-3’-UTR，PRSS56-3’-UTR，SCAND1-3’-UTR，AMN-3’-UTR，CYBA-3’-UTR，PCOLCE-3’-UTR，MAP1S-3’-UTR，VTN-3’-UTR，ALDH16A1-3’-UTR(全部优选是人的)和Acox2-3’-UTR，Ubc-3’-UTR，Slpi-3’-UTR，Pcyox11-3’-UTR，Igf2bp1-3’-UTR，Tmem37-3’-UTR，Slc7a3-3’-UTR，Cst6-3’-UTR，Ebp-3’-UTR，Sf3b5-3’-UTR，Plk1-3’-UTR，Cdca8-3’-UTR，Kif22-3’-UTR，Cad-3’-UTR，Cth-3’-UTR，Pole-3’-UTR，Kif2c-3’-UTR，Scand1-3’-UTR，Gpr84-3’-UTR，Tpgs1-3’-UTR，Ccl17-3’-UTR，Alkbh7-3’-UTR，Ms4a8a-3’-UTR，Mrpl34-3’-UTR，Comtd1-3’-UTR，Armc6-3’-UTR，Atp5d-3’-UTR，1110001J03Rik-3’-UTR，Nudt22-3’-UTR，Aarsdl-3’-UTR，(全部优选是小鼠的)。20.根据权利要求17-19中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个5’-UTR元件包含源自选自由下述组成的组的人基因的转录本的5’-UTR的核酸序列：ZNF460-5’-UTR，TGM2-5’-UTR，IL7R-5’-UTR，COL8A1-5’-UTR，NDUFS7-5’-UTR，PLK2-5’-UTR，FBXO32-5’-UTR，ATP5D-5’-UTR，TUBB4B-5’-UTR，ORMDL2-5’-UTR，FSCN1-5’-UTR，CD9-5’-UTR，PYSL2-5’-UTR，PSMB3-5’-UTR，PSMB6-5’-UTR，KPNA6-5’-UTR，SFT2D2-5’-UTR，LCLAT1-5’-UTR，FBXL18-5’-UTR，SLC35F6-5’-UTR，VMA21-5’-UTR，SEZ6L2-5’-UTR，PCOLCE-5’-UTR，VTN-5’-UTR，ALDH16A1-5’-UTR，KPNA6-5’-UTR，JUP-5’-UTR，CPN2-5’-UTR，PNPO-5’-UTR，SSSCA1-5’-UTR，POLR2L-5’-UTR，LIN7C-5’-UTR，UQCR10-5’-UTR，PYCRL-5’-UTR，AMN-5’-UTR，MAP1S-5’-UTR；或源自选自由下述组成的组的小鼠基因的转录本的5’-UTR的核酸序列：Dpysl2-5’-UTR，Acox2-5’-UTR，Ubc-5’-UTR，Nudt22-5’-UTR，Pcyox11-5’-UTR，Ankrd1-5’-UTR，Tspyl4-5’-UTR，Slc7a3-5’-UTR，Aacs-5’-UTR，Nosip-5’-UTR，Itga7-5’-UTR，Ccnd2-5’-UTR，Ebp-5’-UTR，Sf3b5-5’-UTR，Fasn-5’-UTR，Hmgcs1-5’-UTR，Osr1-5’-UTR，Lmnb1-5’-UTR，Vma21-5’-UTR，Kif20a-5’-UTR，Cdca8-5’-UTR，Slc7a1-5’-UTR，Ubqln2-5’-UTR，Prps2-5’-UTR，Shmt2-5’-UTR，Fignl1-5’-UTR，Cad-5’-UTR，Anln-5’-UTR，Slfn9-5’-UTR，Ncaph-5’-UTR，Pole-5’-UTR，Uhrf1-5’-UTR，Gja1-5’-UTR，Fam64a-5’-UTR，Tspan10-5’-UTR，Scand1-5’-UTR，Gpr84-5’-UTR，Cers6-5’-UTR，Cxcr4-5’-UTR，Gprc5c-5’-UTR，Fenl-5’-UTR，Cspg4-5’-UTR，Mrpl34-5’-UTR，Comtd1-5’-UTR，Armc6-5’-UTR，Emr4-5’-UTR，Atp5d-5’-UTR，Csf2ra-5’-UTR，Aarsdl-5’-UTR，Cth-5’-UTR，Tpgs1-5’-UTR，Ccl17-5’-UTR，Alkbh7-5’-UTR，Ms4a8a-5’-UTR。21.根据权利要求17-19中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个3’-UTR元件包含源自选自由下述组成的组的人基因的转录本的3’-UTR的核酸序列：NDUFS7-3’-UTR，PHGDH-3’-UTR，TSPO-3’-UTR，ATP5D-3’-UTR，EXOSC4-3’-UTR，TUBB4B-3’-UTR，TUBA4A-3’-UTR，EMP3-3’-UTR，CRIP2-3’-UTR，BRAT1-3’-UTR，PSMB3-3’-UTR，PSMB6-3’-UTR，SCAND1-3’-UTR，AMN-3’-UTR，CYBA-3’-UTR，PCOLCE-3’-UTR，MAP1S-3’-UTR，VTN-3’-UTR，ALDH16A1-3’-UTR；或源自选自由下述组成的组的小鼠基因的转录本的3’-UTR的核酸序列：Acox2-3’-UTR，Ubc-3’-UTR，Slpi-3’-UTR，Igf2bp1-3’-UTR，Tmem37-3’-UTR，Slc7a3-3’-UTR，Cst6-3’-UTR，Ebp-3’-UTR，Sf3b5-3’-UTR，Cdca8-3’-UTR，Kif22-3’-UTR，Cad-3’-UTR，Pole-3’-UTR，Kif2c-3’-UTR，Scand1-3’-UTR，Gpr84-3’-UTR，Tpgs1-3’-UTR，Ccl17-3’-UTR，Alkbh7-3’-UTR，Ms4a8a-3’-UTR，Mrpl34-3’-UTR，Comtdl-3’-UTR，Armc6-3’-UTR，Atp5d-3’-UTR，1110001J03Rik-3’-UTR，Nudt22-3’-UTR。22.根据权利要求1-21中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个3’-UTR元件包含下述核酸序列或由下述核酸序列组成：所述核酸序列与选自由SEQIDNOs：152-204组成的组的核酸序列具有至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，或者，其中所述至少一个3’-UTR元件包含下述核酸序列的片段或由下述核酸序列的片段组成：所述核酸序列的片段与选自由SEQIDNOs：152-204组成的组的核酸序列的片段具有至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性。23.根据权利要求1-22中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个5’-UTR元件包含下述核酸序列或由下述核酸序列组成：所述核酸序列与选自由SEQIDNOs：1-151组成的组的核酸序列具有至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，或者，其中所述至少一个5’-UTR元件包含下述核酸序列的片段或由下述核酸序列的片段组成：所述核酸序列的片段与选自由SEQIDNOs：1-151组成的组的核酸序列具有至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性。24.根据权利要求22或23所述的人工核酸分子，其中所述片段呈现3-约500个核苷酸、优选5-约150个核苷酸、更优选10-100个核苷酸、甚至更优选15-90个核苷酸、最优选20-70个核苷酸的长度。25.根据权利要求1-24中任一项所述的人工核酸分子，其中所述至少一个3’-UTR元件和/或所述至少一个5’-UTR元件呈现3-约500个核苷酸、优选5-约150个核苷酸、更优选10-100个核苷酸、甚至更优选15-90个核苷酸、最优选20-70个核苷酸的长度。26.根据权利要求1-25中任一项所述的人工核酸分子，其还包含：c.聚腺苷酸序列和/或聚腺苷酸化信号。27.根据权利要求26所述的人工核酸分子，其中所述聚腺苷酸序列或所述聚腺苷酸化信号位于所述3’-UTR元件的3’。28.根据权利要求26或27所述的人工核酸分子，其中所述聚腺苷酸化信号包含共有序列NN(U/T)ANA，其中N＝A或U，优选为AA(U/T)AAA或A(U/T)(U/T)AAA。29.根据权利要求26-28中任一项所述的人工核酸分子，其中所述聚腺苷酸化信号，优选所述共有序列NNUANA，位于所述3’-UTR元件的3’-端下游少于约50个核酸。30.根据权利要求26-28中任一项所述的人工核酸分子，其中所述聚腺苷酸序列具有约20-约300个腺嘌呤核苷酸、优选约40-约200个腺嘌呤核苷酸、更优选约50-约100个腺嘌呤核苷酸、甚至更优选约60-约70个腺嘌呤核苷酸的长度。31.根据权利要求1-30中任一项所述的人工核酸分子，其还包含5’-帽结构、聚胞苷酸序列、组蛋白茎环和/或IRES-基序。32.根据权利要求31所述的人工核酸分子，其中所述组蛋白茎环包含SEQIDNO：209所述的序列。33.根据权利要求1-32中任一项所述的人工核酸分子，其中所述核酸包含启动子。34.根据权利要求1-33中任一项所述的人工核酸分子，其中所述核酸包含5’-TOPUTR。35.根据权利要求1-34中任一项所述的人工核酸分子，其中所述核酸包含3’-UTR，所述3’-UTR包含源自白蛋白基因3’-UTR的核酸序列或由源自白蛋白基因3’-UTR的核酸序列组成。36.根据权利要求1-35中任一项所述的人工核酸分子，其中所述人工核酸分子，优选所述可读框，是至少部分G/C修饰的，优选其中所述可读框的G/C含量与野生型可读框相比是增加的。37.根据权利要求1-36中任一项所述的人工核酸分子，其中所述可读框包含密码子优化的区域，优选地，其中所述可读框是密码子优化的。38.根据权利要求1-37中任一项所述的人工核酸分子，其是RNA，优选是mRNA分子。39.包含根据权利要求1-38中任一项所述的人工核酸分子的载体。40.根据权利要求39所述的载体，其是DNA载体。41.根据权利要求39或40所述的载体，其是质粒载体或病毒载体，优选是质粒载体。42.根据权利要求39-41中任一项所述的载体，其是环形分子。43.根据权利要求42所述的载体，其中编码链的所述聚腺苷酸序列、所述聚胞苷酸序列、所述组蛋白茎环或所述3’-UTR元件在5’→3’方向上后接用于使环形载体分子线性化的限制性位点。44.包含根据权利要求1-38中任一项所述的人工核酸分子或权利要求39-43中任一项的载体的细胞。45.根据权利要求44的细胞，其是哺乳动物细胞。46.根据权利要求44或45所述的细胞，其是哺乳动物受试者的细胞，优选是哺乳动物受试者分离的细胞，优选是人受试者分离的细胞。47.药物组合物，其包含根据权利要求1-38中任一项所述的人工核酸分子、根据权利要求39-43中任一项所述的载体或根据权利要求44-46中任一项所述的细胞。48.根据权利要求47所述的药物组合物，其还包含一种或多种药用载体、稀释剂和/或赋形剂和/或一种或多种佐剂。49.根据权利要求1-38中任一项所述的人工核酸分子、根据权利要求39-43中任一项所述的载体、根据权利要求44-46中任一项所述的细胞或根据权利要求47或48所述的药物组合物，其用作药物。50.根据权利要求1-38中任一项所述的人工...

【专利技术属性】
技术研发人员：托马斯·施拉克，斯缔芬尼·格朗德，
申请(专利权)人：库瑞瓦格股份公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE