五羟色胺-磁性微粒复合物及富集唾液酸化糖蛋白的方法技术

本发明专利技术提供一种五羟色胺‑磁性微粒复合物及富集唾液酸化糖蛋白的方法，复合物为表面固定有五羟色胺的磁性微粒。本发明专利技术利用环氧化修饰的磁性微粒作为固定五羟色胺的载体，在偏碱性条件下，通过氨基与环氧基的开环反应，将五羟色胺共价偶联于环氧磁粒表面。通过磁性微粒对磁场的定向响应及五羟色胺对唾液酸的特异性识别，建立了操作简便、稳定性良好的唾液酸糖蛋白富集方法。对复杂蛋白质样品进行了唾液酸糖蛋白的富集，显示出较好的结果。

Five hydroxytryptamine magnetic microparticle complex and method for enriching sialic glycoprotein

The invention provides a method for the five hydroxytryptamine magnetic particle complex and the enrichment of the sialic acid glycoprotein. The compound is a magnetic particle with five serotonin on the surface. The invention uses the epoxidation modified magnetic particles as the carrier of five hydroxytryptamine. Under the alkaline condition, the valence of five hydroxytryptamine is covalently coupled to the surface of the epoxy magnetic particle through the ring opening reaction of the amino group with the epoxy group. Through the directional response of magnetic particles to the magnetic field and the specific identification of five hydroxytryptamine on sialic acid, a simple and stable method for the enrichment of sialic acid glycoprotein was established. The sialic glycoprotein from complex protein samples was enriched, showing good results.

【技术实现步骤摘要】
五羟色胺-磁性微粒复合物及富集唾液酸化糖蛋白的方法
本专利技术涉及唾液酸化糖蛋白检测，具体涉及一种五羟色胺-磁性微粒复合物及利用该复合物富集唾液酸化糖蛋白的方法。
技术介绍
唾液酸是一类带羧基的九碳单糖化合物及其衍生物的通称，蛋白质唾液酸化修饰是重要的蛋白质翻译后修饰之一，对于蛋白质的结构和功能具有非常重要的影响，在生物体内发挥着重要的生物学作用，如病毒与细胞间的识别、信号的传导，免疫应答以及细胞间的相互作用，此外，生物体内异常的唾液酸化与许多肿瘤的发生发展有密切的关系。由于唾液酸糖蛋白在复杂样品中丰度低和微观结构的不均一性，尤其酶解后唾液酸糖肽的含量更低，因此对于唾液酸糖蛋白的研究，首先要解决唾液酸糖蛋白/糖肽的富集问题。目前，针对唾液酸糖蛋白/糖肽的富集方法主要有利用特异凝集素富集、亲水色谱、强阳离子交换色谱、二氧化钛色谱、木质纤维色谱，以及利用五羟色胺(简称5-HT)为配体进行富集。但这些方法均有各自的缺点，比如利用凝集素富集的方法特异性低、成本高，而亲水色谱、强阳离子交换色谱、二氧化钛色谱、木质纤维色谱受到磷酸化蛋白的影响，富集过程耗时长，反应条件苛刻。目前利用五羟色胺为配体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种五羟色胺‑磁性微粒复合物，其特征在于：该复合物为表面固定有五羟色胺的磁性微粒。

【技术特征摘要】
1.一种五羟色胺-磁性微粒复合物，其特征在于：该复合物为表面固定有五羟色胺的磁性微粒。2.根据权利要求1所述一种五羟色胺-磁性微粒复合物，其特征在于：所述复合物包括结合于Fe3O4磁性微粒表面的硅原子以及与所述硅原子连接的功能化基团，所述功能化基团的结构如式1所示：式1中，n的取值为3～5，R为五羟色胺的氨基脱去一个氢原子剩余的部分。3.根据权利要求2所述一种五羟色胺-磁性微粒复合物，其特征在于：所述n的取值为3。4.根据权利要求2所述一种五羟色胺-磁性微粒复合物，其特征在于：所述Fe3O4磁性微粒采用化学共沉淀法制成。5.一种五羟色胺-磁性微粒复合物的制备方法，其特征在于：该制备方法包括以下步骤：利用环氧化修饰的磁性微粒作为固定五羟色胺的载体，在碱性条件下，将五羟色胺通过氨基与环氧基的开环反应共价偶联于所述载体表面。6.根据权利要求5所述一种五羟色胺-磁性微粒复合物的制备方法，其特征在于：所述制备方法具体包括以下步骤：1)向分散均匀的0.4～1.2gFe3O4磁性微粒中加入3～7mL环氧化试剂和0.2～0.6mL冰乙酸，然后于20～30℃水浴中反应2～4h，反应结束后用无水乙醇清洗，然后于60～80℃下烘干，得到环氧化修饰的磁性微粒；2)将1mg环氧化修饰的磁性微粒与1mL10～50μM五羟色胺盐酸盐溶液混合后避光反应2～8h，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李铮，王喜龙，肖志强，秦秋红，苏建英，麻纪斌，高湘，马恬然，张志伟，
申请(专利权)人：陕西中药研究所，
类型：发明
国别省市：陕西,61