一种高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子及制备与应用制造技术

本发明专利技术公开一种高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子及制备与应用。基于该功能化磁性纳米粒子对食品中的微生物进行高效富集和核酸检测的方法，主要的步骤包括：(1)对磁性纳米粒子进行修饰及功能化；(2)在液体环境中对食品中的微生物进行磁富集；(3)对富集到的细菌进行基因组分离、纯化；(4)对分离纯化的细菌基因组进行基于PCR的核酸检测。该方案可在短时间内对食品中的致病性细菌进行高效的富集，并从富集到细菌中分离纯化到高质量的基因组模板，进行核酸检测。相对于传统的方法更加快速，节省了大量的人力、物力，可以对食品中低浓度的致病菌进行有效地检出，检测结果也更为可靠，易于在生产、生活、科研等领域的推广和应用。

【技术实现步骤摘要】
一种高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子及制备与应用
本专利技术属于生物检测
，特别涉及一种高效富集微生物的功能化磁性纳米 粒子及制备与应用。
技术介绍
随着社会进步，食品安全日益受到人们重视，尤其是食品中的致病性细菌对人们 的健康产生了严重的威胁。目前主要的检测方法都是通过培养基增菌、平板菌落形态观察 来对微生物进行检测，这种方法相对可靠，但也有这明显的不足。培养基增菌、单菌落划分 以及鉴定往往需要5天以上的时间，这已经无法满足现在市场高流通性和时效性的需求， 无法对食品致病菌的传染进行有效预防。同时，基于菌落形态的检测更是不甚可靠，也需要 专业的人士来操作。因此，开发一种能对食品致病菌进行快速、可靠检测的方案显得尤为迫 切。增菌往往需要很久的时间，而富集则相反，只需要将一定体系中的病原菌进行有效的 集中即可。现在已经出现了多种对细菌的富集方式，主要是通过基于抗体、适配体、抗生素、 化学基团等和细菌能特异性结合的方式，但这些方法也都存在着一些问题，比如抗体价格 较高且只能识别单一的细菌，同时不方便储存和运输；抗生素比如万古霉素修饰的纳米磁 珠会因本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于包括如下步骤： 通过氨基、羧基脱水缩合作用将万古霉素修饰到氨基磁珠上，再用一端羧基活化的聚乙二醇对磁珠上剩余的氨基位点进行封闭；即得到能高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子。

【技术特征摘要】
1. 一种高效富集微生物的功能化磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于包括如下步 骤： 通过氨基、羧基脱水缩合作用将万古霉素修饰到氨基磁珠上，再用一端羧基活化的聚 乙二醇对磁珠上剩余的氨基位点进行封闭；即得到能高效富集微生物的功能化磁性纳米粒 子。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的氨基磁珠为四氧化三铁磁性 纳米微球，表面基团：_NH2,粒径为100?200nm，浓度为5mg/mL，分散于PBS缓冲液中； 所述的一端羧基活化的聚乙二醇为其分子量是2000?6000。3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的氨基、羧基脱水缩合作用的反 应步骤及体系如下： 1) 取氨基磁珠，进行磁富集，加入30mM/pH6的MES缓冲液清洗三次并重悬于30mM/pH6 的MES缓冲液中； 2) 称取万古霉素盐酸盐，N-羟基琥珀酰亚胺，1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺 盐酸盐； 3) 将步骤1)中的氨基磁珠和步骤2)中的药品均匀混合并加入30mM/pH6的MES缓冲 液，得到混合液，反应； 4) 反应完成后，对磁珠进行磁分离，30mM/pH6的MES缓冲液清洗三次，并重悬于30mM/ PH6MES缓冲液中，得到修饰上万古霉素的纳米磁珠。4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述的氨基磁珠与步骤2) 中所述的万古霉素盐酸盐的体积质量比为（400?425)mL :3g ; 步骤2)中所述的万古霉素盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和I-(3-二甲氨基丙基）-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐的质量比为3: (5?7) : (7?9); 步骤3)中所述的混合液中万古霉素盐酸盐的浓度为3?6g/mL。5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的封闭的反应步骤及体系如下： 取上述万古霉素修饰的纳米磁珠5mL，称取0. 025g -端羧基活化的PEG，混合均匀，反应； 反应完成后，对磁珠进行磁分离，30mM/pH6的MES缓冲液清洗三次，并重悬于5mL 30mM/ PH6MES缓冲液中，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢达，周小明，朱敏君，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东;44