一种筛选山羊免疫相关基因DQA1 Exon 2‑(A‑C)等位基因型的方法技术

本发明专利技术公开了一种筛选山羊免疫相关基因DQA1 Exon 2‑(A‑C)等位基因型的方法，根据DQA1基因外显子2的序列设计引物，以白山羊的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，对PCR产物进行纯化测序，初步筛选DQA1基因的外显子2的多态性位点，以白山羊基因组DNA为模板，PCR扩增目的片段，用变性剂处理PCR产物，对变性后的扩增片段进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，应用银染法染胶，并根据聚丙烯酰胺凝胶电泳结果判定贵州白山羊DQA1基因外显子2的部分等位基因型。本发明专利技术为不同品种山羊DQA1基因外显子2多态性的PCR‑SSCP筛选及判型提供一种方便、快捷、准确的方法，能够检测山羊免疫性状相关的DQA1基因第二外显子的部分等位基因，解决了目前PCR‑SSCP技术对于呈高度多态性基因判型困难的问题。

【技术实现步骤摘要】
—种筛选山羊免疫相关基因DQA1 Exon 2-(A-C)等位基因型的方法
本专利技术涉及动物生物
中的山羊分子标记辅助育种技术，具体设计到一种筛选山羊免疫相关基因DQAl Exon 2-(A-C)等位基因型的方法。
技术介绍
贵州白山羊是贵州省的优良地方山羊品种，具有适应性强、耐粗饲、繁殖力高、育肥性能好、肉质好、板皮质优等特点，宜于在山地丘陵等地势放牧饲养。但国内对于贵州白山羊免疫性状的研究还鲜见报道，所以如何利用分子生物学的技术快速高效的筛选培育出具有较高抗病能力的贵州白山羊成为改良我国优良地方山羊品种的重中之重。 MHC (主要组织相容性复合体，major histocompatibility complex),是脊椎动物中一个与免疫相关的多基因家族，具有共显性、连锁不平衡等遗传特性，其主要功能是编码细胞表面的转膜蛋白，通过传递抗原给T淋巴细胞参与调节免疫反应。MHC决定着动物的免疫排斥反应，同时也与动物的抗病能力有较强的相关性。山羊的MHC基因(即GoLA)分为I类、II类和III类，MHC Class II区域分子在免疫应答中起重要的调本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种筛选山羊免疫相关基因DQA1 Exon 2‑(A‑C)等位基因型的方法，其特征在于：A、同时将待检测基因组DNA，DQA1 Exon 2‑A、DQA1 Exon 2‑B和DQA1 Exon 2‑C的DNA标准样1.5μL/50ng分别与试剂Ⅰ混合，按PCR反应条件进行目的片段的扩增；B、取3μL PCR产物经1%琼脂糖凝胶检测，产物片段大小为406bp；C、向步骤B中剩余的PCR产物中各加入10μL上样变性缓冲液，98℃水浴15min,冰浴15min；D、将试剂Ⅱ与540μL 10%过硫酸铵，30μL TEMED混匀，制电泳胶；E、将步骤C中的样品，采用步骤D中制取的电泳胶按PCR‑SSC...

【技术特征摘要】
1.一种筛选山羊免疫相关基因DQAl Exon 2-(A-C)等位基因型的方法，其特征在于: A、同时将待检测基因组DNA，DQAl Exon 2_A、DQA1 Exon 2-B 和 DQAl Exon 2-C 的 DNA标准样1.5 μ L/50ng分别与试剂I混合，按PCR反应条件进行目的片段的扩增； B、取3μ L PCR产物经1%琼脂糖凝胶检测，产物片段大小为406bp ； C、向步骤B中剩余的PCR产物中各加入10μ L上样变性缓冲液，98°C水浴15min，冰浴15min ； D、将试剂II与540μ L 10%过硫酸铵，30 μ L TEMED混匀，制电泳胶； Ε、将步骤C中的样品，采用步骤D中制取的电泳胶按PCR-SSCP检测方法进行检测； F、步骤 E 中检测到的带型与 DQAl Exon 2_A、DQA1 Exon 2-B 和 DQAl Exon 2-C 的 DNA标准样一致的即为已知等位基因型个体； 所述试剂I总体积13.5yL，其中2XEs Taq MasterMix为7.5 μ L，上下游引物各0.75 μ L，余量为ddH20 ;其中上游引物为5’ -GAAGCCCACAATGTTTGATAG-3’，下游引物:5’ -TCATACCAGCTTCACTCCCT-3’ ； 所述试剂II为12%聚丙烯酰胺凝胶，其中Arc:Bis=29:1，成分包括5 X TBE 15mL, 30%丙烯酰胺 30mL, ddH20 30 mL ； 所述DQAl Exon 2_A的DNA标准样的核苷酸序列为: gaagcccaca atgtttgata gtcaatttct tctttcactg cttaatgagg atcttttctc60 tgtttttccc tttcttgctc ctcactccga ctcagctgac cacattgccg cctatggcat120 aaacgtctac cactcatatg gtccctctgg ccactatacc catgaatttg atggagatga 180 agagttctac gtcgacctgg aaaagaagga gactgtctgg cgcctgcctg agtttagtaa 240 atttgtaggt tttgaccctc agggtgcact gagaaacatg gcttcaggga aacggacttt 300 ggagatcatg attcaaaggt ccaactctac tgctgctacc aacagtaagt gttcgccatt360 ctgcctctct ttattaatct tccccttcat accagcttca ctccct406 所述DQAl Exon 2-B的DNA标准样的核苷酸序列为: gaagcccaca atgtttgata gtcaatttct tctttcactg cttaatgaag atcttttctc60 tatttttccc tttctggctc ctcaccctga ctcagctgac cacattggca cctatggcat120 aagcatctac caaacatatg g...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗卫星，刘彬，蔡慧芬，康建兵，孙岩岩，钱成，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52