质谱鉴定霍乱弧菌分型的多重PCR产物的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种鉴定霍乱弧菌分型的多重PCR产物的试剂盒，包括用于扩增霍乱弧菌的ctxA片段、ctxB片段、ompW片段的特异性引物、质谱专用点样基质、质谱专用微阵列芯片、质谱内标标准品、质谱外标标准品。本发明专利技术的试剂盒通过将所得核酸指纹特征图谱与库中霍乱弧菌的核酸指纹图谱进行比较，从而判断待测细菌的种属。基于该试剂盒所产生的质谱峰图，可对待检样品中的霍乱弧菌进行分类与鉴定，结果可广泛运用于霍乱弧菌的分型与分类，以及环境卫生和公共安全检疫等领域。

Identification of multiplex PCR products of Vibrio cholerae typing by mass spectrometry

The invention discloses a kit for identifying multiple PCR products of Vibrio cholerae classification, including specific primers for ctxA fragment, ctxB fragment, ompW fragment, mass specific point sample matrix, mass mass microarray chip, mass spectrum standard standard, and standard quality standard products for the amplification of Vibrio cholerae. The kit of the invention compares the nucleic acid fingerprint of the obtained nucleic acid with the nucleic acid fingerprint of the Vibrio cholerae in the library to determine the species of the bacteria to be tested. Based on the mass spectra produced by the kit, the Vibrio cholerae can be classified and identified, and the results can be widely used in the classification and classification of Vibrio cholerae, as well as in the areas of environmental hygiene and public safety quarantine.

【技术实现步骤摘要】
质谱鉴定霍乱弧菌分型的多重PCR产物的试剂盒
本专利技术属于分子生物学检测领域，涉及一种利用飞行时间质谱技术快速鉴定霍乱弧菌的产品。
技术介绍
霍乱是一种由霍乱弧菌(Vibriocholerae)引起的以腹泻为主要症状的烈性传染病，在我国被列为甲类传染病。霍乱弧菌进入消化道到达小肠，在肠黏膜表面吸附并迅速繁殖，产生的霍乱肠毒素作用于小肠黏膜，引起小肠液过度分泌。严重者出现上吐下泻，导致脱水和代谢性酸中毒、循环衰竭，甚至产生休克和死亡。除了临床上需要加强霍乱弧菌的检测之外，在食品安全(如肉制品加工、烧烤店)、环境卫生(如学校机关的后勤场所)、进出口检验检疫、公共场所安全方面也需要对霍乱弧菌进行分型鉴定，以维护公共卫生安全。研究发现霍乱弧菌是革兰氏阴性菌，共分为139个血清群，其中O1群和O139群可引起霍乱。霍乱弧菌的致病因子主要有CTX基因元件(其中的ctx基因编码霍乱肠毒素)、TCP致病岛(编码TCP菌毛)和toxR(毒力调节基因，调控编码CT和TCP的基因)3种。霍乱肠毒素(choleratoxin，CT)也称霍乱毒素，是一种外毒素，具有很强的抗原性，而且霍乱毒素基因(ctx)的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鉴定霍乱弧菌分型的多重PCR产物的引物组合，其中该引物组合包括，所述引物为扩增霍乱弧菌的ctxA片段的特异性引物的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，其扩增产物的质谱峰值为22115Da；扩增霍乱弧菌的ctxB片段的特异性引物的SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，其扩增产物的质谱峰值为30010Da；扩增霍乱弧菌的ompW片段的特异性引物的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，其扩增产物的质谱峰值为34874Da。

【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定霍乱弧菌分型的多重PCR产物的引物组合，其中该引物组合包括，所述引物为扩增霍乱弧菌的ctxA片段的特异性引物的SEQIDNO.1和SEQIDNO.2，其扩增产物的质谱峰值为22115Da；扩增霍乱弧菌的ctxB片段的特异性引物的SEQIDNO.3和SEQIDNO.4，其扩增产物的质谱峰值为30010Da；扩增霍乱弧菌的ompW片段的特异性引物的SEQIDNO.5和SEQIDNO.6，其扩增产物的质谱峰值为34874Da。2.权利要求1的组合物，其中所述引物组合可根据需要加入tag序列，使多重PCR产物的大小能够容易地由MALDI-TOFMS进行区分。3.权利要求2的组合物，其中所述tag序列为ACGTTGGATG。4.包含权利要求1-3的引物组合物并用于鉴定霍乱弧菌分型的多重PCR产物的质谱试剂盒，其中该试剂盒包含上述用于扩增上述...

【专利技术属性】
技术研发人员：马庆伟，钟逾，刘昕超，
申请(专利权)人：北京毅新博创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11