质谱鉴定副溶血性弧菌分型的方法及产品技术

本发明专利技术公开了一种利用飞行时间质谱技术快速鉴定副溶血性弧菌分型的方法，主要包括如下步骤：使用特定引物组合对待测副溶血性弧菌的特征片段进行多重PCR扩增；将多重PCR产物通过吸附柱进行纯化；将纯化后的多重PCR产物点样于基质结晶上，通过质谱检测多重PCR产物的片段的大小；将质谱结果与副溶血性弧菌指纹图谱库比较，以确定待检副溶血性弧菌的具体分型。本发明专利技术还保护用于该方法中的质谱试剂盒。该方法可对环境卫生、食品安全检测、公共场所安全、进出口检验检疫等领域的副溶血性弧菌分型进行鉴定，以维护公共卫生安全。

Identification and typing of Vibrio parahaemolyticus by mass spectrometry

The present invention discloses a method for rapid identification of Vibrio parahaemolyticus by time of flight mass spectrometry, which mainly includes the following steps: multiple PCR amplification is used to treat the characteristic fragment of Vibrio parahaemolyticus using specific primers, and multiple PCR products are purified by the adsorption column, and the multiple PCR products after the purification are obtained. The size of multiple PCR products was detected by mass spectrometry on the matrix, and the mass spectrometry results were compared with the fingerprint Library of Vibrio parahaemolyticus to determine the specific typing of Vibrio parahaemolyticus. The invention also protects the mass spectrogram kit used in the method. This method can be used to identify the subtypes of Vibrio parahaemolyticus in the fields of environmental hygiene, food safety inspection, public safety and import and export inspection and quarantine, in order to maintain public health safety.

【技术实现步骤摘要】
质谱鉴定副溶血性弧菌分型的方法及产品
本专利技术属于分子生物学检测领域，涉及一种利用飞行时间质谱技术快速鉴定副溶血性弧菌分型的方法及其产品。
技术介绍
副溶血性弧菌(VibrioParahemolyticus)分布极广，主要分布在海水和水产品中，我国华东地区沿岸的海水的副溶血性弧菌检出率为47.5％～66.5％，海产鱼虾的平均带菌率为45.6％～48.7％，夏季可高达90％以上。此外，畜禽肉、咸菜、咸蛋、淡水鱼等都发现有副溶血性弧菌的存在。副溶血性弧菌对人类危害仅次于霍乱弧菌，致病菌株可引起人类腹泻、恶心、呕吐、腹部痉挛，严重的可以引起昏迷、脱水甚至死亡。除了临床上需要加强副溶血性弧菌的检测之外，在食品安全(如肉制品加工、烧烤店)、环境卫生(如学校机关的后勤场所)、进出口检验检疫、公共场所安全方面也需要对副溶血性弧菌进行分型鉴定，以维护公共卫生安全。研究发现副溶血性弧菌的主要毒力因子包括多种溶血毒素，主要有不耐热直接溶血毒素(TLH)、耐热直接溶血毒素(TDH)与耐热直接溶血相关毒素(TRH)，分别由tlh、tdh和trh基因编码。通常副溶血性弧菌的鉴定方法是分离培养、镜检观察、生化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种质谱鉴定副溶血性弧菌分型的方法，步骤包括使用特定引物组合对待测副溶血性弧菌的特征片段进行多重PCR扩增；将多重PCR产物通过吸附柱进行纯化；将纯化后的多重PCR产物点样于基质结晶上，通过质谱检测多重PCR产物的片段的大小；将质谱结果与副溶血性弧菌指纹图谱库比较，以确定待检副溶血性弧菌的具体分型；其中，所述引物为扩增副溶血性弧菌的tlh基因片段的特异性引物的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，其扩增产物的质谱峰值为33708Da；扩增副溶血性弧菌的tdh基因片段的特异性引物的SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，其扩增产物的质谱峰值为37250Da；扩增副溶血性弧菌的t...

【技术特征摘要】
1.一种质谱鉴定副溶血性弧菌分型的方法，步骤包括使用特定引物组合对待测副溶血性弧菌的特征片段进行多重PCR扩增；将多重PCR产物通过吸附柱进行纯化；将纯化后的多重PCR产物点样于基质结晶上，通过质谱检测多重PCR产物的片段的大小；将质谱结果与副溶血性弧菌指纹图谱库比较，以确定待检副溶血性弧菌的具体分型；其中，所述引物为扩增副溶血性弧菌的tlh基因片段的特异性引物的SEQIDNO.1和SEQIDNO.2，其扩增产物的质谱峰值为33708Da；扩增副溶血性弧菌的tdh基因片段的特异性引物的SEQIDNO.3和SEQIDNO.4，其扩增产物的质谱峰值为37250Da；扩增副溶血性弧菌的trh基因片段的特异性引物的SEQIDNO.5和SEQIDNO.6，其扩增产物的质谱峰值为42702Da。2.权利要求1的方法，其中所述副溶血性弧菌为O1群和/或O139群。3.权利要求1或2的方法，其中所述PCR扩增的反应体系30μl中含有：4.权利要求3的方法，其中所述MALDI-TOFMS检测中所使用的点样基质的组成为，3-HPA∶DHC∶甲酸＝4∶2∶1。5.权利要求1-4的方法，其中所述方法用于环境卫生、公共场所等领域的副溶血性弧菌分型的鉴定。...

【专利技术属性】
技术研发人员：马庆伟，钟逾，刘昕超，
申请(专利权)人：北京毅新博创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11