一种用于筛选 DNA 甲基化敏感基因的方法技术

本发明专利技术公开了一种用于筛选DNA甲基化敏感基因的方法，涉及基因工程领域，所述方法包括如下步骤：低度甲基化细胞模型构建步骤、基因表达变化的检测步骤、基因特异区域甲基化的检测步骤以及甲基敏感基因鉴定步骤。本发明专利技术利用普通实验室易于获得成体成纤维细胞系，运用体外转染抗DNMT1小RNA连续抑制细胞中负责DNA甲基化维持的DNMT1基因的表达，根据传代细胞的活力和增殖表现，连续干扰1～3代，实践表明，可获得高效的低度甲基化细胞模型，再根据不同研究目的，结合普通PCR或高通量测序，可判断目的基因是否对DNA甲基化敏感或大规模筛选DNA甲基化敏感转录序列。本发明专利技术技术建立的细胞模型简单高效、容易获得且易于操作。

A method for screening DNA methylation sensitive genes

The present invention discloses a method for screening DNA methylation sensitive gene, which involves the following steps: construction steps of low methylation cell model, detection steps of gene expression change, detection steps of gene specific region methylation, and methyl sensitive gene identification step. The present invention is easy to obtain adult fibroblast cell lines, using in vitro transfection to the expression of DNMT1 gene that is maintained by DNA methylation in DNMT1 small RNA cells, and interferes continuously for 1~3 generations according to the vitality and proliferation of the cells. Practice shows that a highly efficient low degree methylation cell model can be obtained. Type, according to different research purposes, combined with common PCR or high throughput sequencing, it can be used to determine whether the target gene is sensitive to DNA methylation or to screen the DNA methylation sensitive transcriptional sequence on a large scale. The cell model established by the invention is simple, efficient, easy to obtain and easy to operate.

【技术实现步骤摘要】
一种用于筛选DNA甲基化敏感基因的方法
本专利技术涉及基因工程领域，特别是涉及一种用于筛选DNA甲基化敏感基因的方法。
技术介绍
DNA甲基化对生命活动非常重要，是基因调控的手段之一(主要通过对位于5＇-UTR区域、启动子区域及第一外显子等功能调节区的CpG岛及其邻近序列的甲基化而抑制基因的表达)，它在维持细胞正常功能、传递基因组印迹，胚胎发育、肿瘤发生等方面起着至关重要的作用，更是表观遗传学研究的热点。目前对甲基化组的理解仍然很有限。像其他表观遗传学现象一样，甲基化水平的研究受到不同细胞型需要不同研究模式而使研究工作变得非常复杂(Lairdetal.2010)。目前筛选DNA甲基化敏感的基因的主要技术方法包括：DNA甲基化免疫共沉淀技术(MeDIP或mDIP)结合基因特异的PCR或全基因组测序，同时仍然需要不同分化的细胞模型或疾病模型。MeDIP技术的局限性包括：需要特异性结合甲基化DNA的蛋白MBD2b或5＇-甲基胞嘧啶抗体，细胞用量大、对实验技术要求高、对低度甲基化的DNA片段富集度偏低，同时仍需要不同分化的细胞模型或疾病模型(Parketal.2009,Bocketal.20本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于筛选DNA甲基化敏感基因的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：低度甲基化细胞模型构建步骤：解冻动物成体成纤维细胞，培养至1～2代至细胞生长状态良好，待细胞生长至60％～70％的富集度，干扰组转染anti‑DNMT1 siRNA，并配制阴性对照和/或空白组对照，待细胞开始长满，进行传代或检测操作；基因表达变化的检测步骤：检测所述干扰组、所述阴性对照组和/或所述空白组的目的基因的表达水平；基因特异区域甲基化的检测步骤：筛查目的基因转录调节区域CpG岛，在所述CpG岛及邻近区域设计甲基化特异引物，检测所述干扰组、所述阴性对照组和/或所述空白组的目的基因DNA甲基化水平；甲基敏感基因鉴定步...

【技术特征摘要】
1.一种用于筛选DNA甲基化敏感基因的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：低度甲基化细胞模型构建步骤：解冻动物成体成纤维细胞，培养至1～2代至细胞生长状态良好，待细胞生长至60％～70％的富集度，干扰组转染anti-DNMT1siRNA，并配制阴性对照和/或空白组对照，待细胞开始长满，进行传代或检测操作；基因表达变化的检测步骤：检测所述干扰组、所述阴性对照组和/或所述空白组的目的基因的表达水平；基因特异区域甲基化的检测步骤：筛查目的基因转录调节区域CpG岛，在所述CpG岛及邻近区域设计甲基化特异引物，检测所述干扰组、所述阴性对照组和/或所述空白组的目的基因DNA甲基化水平；甲基敏感基因鉴定步骤：比较所述干扰组、所述阴性对照组和/或所述空白组的目的基因的表达水平；比较所述干扰组、所述阴性对照组和/或所述空白组的目的基...

【专利技术属性】
技术研发人员：许卫华，康丽珠，杨小燕，
申请(专利权)人：龙岩学院，
类型：发明
国别省市：福建,35