单个基因mRNA甲基化水平检测方法技术

本发明专利技术公开了一种单个基因mRNA甲基化水平检测方法，包括以下步骤：1)、设计靶基因甲基化区域的荧光定量引物；2)、提取总RNA，用化学断裂法将总RNA片段化为RNA片段；3)、将步骤2)得到的片段化的RNA通过特异性识别m6A的抗体将带有m6A位点的所有mRNA片段沉淀下来，并用琼脂糖磁珠进行收集富集；4)、将步骤3)中抗体富集得到的mRNA片段反转录，用步骤1)的荧光定量PCR引物进行实时荧光定量PCR，即可得到含甲基化的靶基因相对表达量，相对表达量的高低就代表了单个基因mRNA甲基化水平高低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种基于单个基因 mRNA甲基化水平检测 方法及所用引物。
技术介绍
RNA甲基化修饰发现于1974年，是一种最常见的转录后水平修饰，大约占全部RNA 修饰的三分之二。在真核生物中，最常见的mRNA转录后修饰是发生在碱基A第6位N原子 上的甲基化修饰，m6A大约占细胞mRNA全部腺苷含量的0. 1 % -0. 4%，即哺乳动物中平均每 一条mRNA含有3-5个6-甲基修饰的腺苷。m6A甲基化位点主要发生在高度保守的RRACH (R =G，A ;H = A，C，T)序列中，在表观遗传中可能发挥重要的作用，但由于m6A修饰方式并没有 破坏碱基之间的配对，故无法通过直接的测序对其进行基因组上的定位，同时由于缺乏有 效的检测分析手段，相关的研究一直停滞不前。直到2012年，文献相继报道鉴定出FTO和 ALKBH5等是RNA去甲基化的修饰酶类，METTL3、METTL14等是RNA的甲基化酶，这促使RNA 甲基化成为一种重要的表观遗传学标记，结合FTO超表达的小鼠被检测到各组织RNA甲基 化水平明显升高，且容易发生肥胖，ALKBH5缺失的小鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】
单个基因mRNA甲基化水平检测方法中所用的引物，其特征是：靶基因为C/EBPα基因，引物为：C/EBPα‑P2F gacacggtgcgtctaagatgagC/EBPα‑P2R tcggagcggtgagtttgc。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：汪以真，王新霞，江芹，蔡旻，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33