一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法技术

本发明专利技术提出了一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法，该方法包括：通过高效液相色谱分析方法对所述普瑞巴林中残留吡啶进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述普瑞巴林中残留吡啶的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB‑C18，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为240nm，柱温为33℃～37℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸氢二钾缓冲液，所述磷酸氢二钾缓冲液的pH为6.8～7.2，流动相B相为甲醇，流速为0.8mL/min～1.2mL/min，洗脱采用等度洗脱，所述等度洗脱中A相和B相的体积比为68:32～72:28，运行时间为20min。利用该方法，可简便、准确、灵敏地、专属性地测定普瑞巴林原料药中残留吡啶的含量，从而有效控制普瑞巴林原料药的药效、质量和药用安全。

A method for the determination of pyridine in prebar

The present invention provides a method for determining residual pyridine in pregabalin. The method includes: analysis of pyridine in the pregabalin by high performance liquid chromatography analysis to obtain a chromatogram; and based on the chromatogram, the content of pyridine residues in the pregabalin is determined, in which the high level of pyridine is determined. The following conditions are as follows: the chromatographic column is ZORBAX Eclipse XDB C18, 4.6 x 250mm, 5 micron, the detector is DAD, the detection wavelength is 240nm, the column temperature is 33 to 37, and the A phase of the mobile phase is 10mmol/L two potassium phosphate buffer solution, the pH of the two potassium hydrogen phosphate buffer solution is 6.8 to 7.2, the B phase of the mobile phase is methanol, flow phase. The speed is 0.8mL/min ~ 1.2mL/min, elution is carried out by isometric elution, the volume ratio of A phase to B phase in isometric elution is 68:32 ~ 72:28, and the running time is 20min. This method can be used to determine the content of pyridine in pregabalin material easily, accurately, sensitively and specifically, so as to effectively control the efficacy, quality and medical safety of pregabalin.

【技术实现步骤摘要】
一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法专利
本专利技术涉及生物医药领域，具体的，本专利技术涉及一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法。技术背景普瑞巴林是一种新型γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂，用于治疗神经性疼痛，局部发作性癫痛和焦虑症。2004年12月美国食品与药品管理局((FDA)批准用于治疗糖尿病性周围神经病变的神经性疼痛和带状孢疹后遗神经痛。其结构式为是白色或类白色的结晶固体，具有易溶于水、碱性的和酸性的水溶液的特性。在合成普瑞巴林时，人们常常会选用吡啶作为反应溶剂，吡啶的残留会对产品的安全性和有效性带来隐患，因此需要对吡啶残留量进行控制。吡啶的沸点为115.2℃，通常采用气相色谱顶空进样的方法进行药物中残留吡啶的测定。但是由于普瑞巴林原料药在有机溶剂中的溶解性较差，而且待测的残留溶剂吡啶为弱碱性，采用顶空气相分析时峰形较差，回收率也不好。另外采用离子色谱仪分析时，普瑞巴林离子化程度较大，会将待测溶剂吡啶峰包进去，干扰吡啶的测定。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出了一种简便、准确、灵敏地检测普瑞巴林中残留吡啶的方法。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：通过高效液相色谱分析方法对所述普瑞巴林中残留吡啶进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述普瑞巴林中残留吡啶的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为ZORBAXEclipseXDB-C18，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为240nm，柱温为33℃～37℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸氢二钾缓冲液，所述磷酸氢二钾缓冲液的pH为6.8～7.2，流动相B相为甲醇，流速为0.8mL/min～1.2mL/min，洗脱采用等度洗脱，所述等度洗脱中A相和B相的体积比为68:32～72:28，运行时间为20min。利用根据本专利技术实施例的检测方法，该方法具有专属性好，吡啶与相邻色谱峰分离度大于1.5；精密度好，相对标准偏差小于2.0％；准确率高，回收率在90％～110％之间，符合中国药典对原料药中残留溶剂或有关物质检测方法的要求。所述方法能准确定量8ppm至300ppm范围内普瑞巴林原料药中的吡啶。根据本专利技术的实施例，上述测定普瑞巴林原料药中残留吡啶的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述磷酸氢二钾缓冲液的pH为7.0。专利技术人在试验中发现，磷酸氢二钾缓冲液的pH为7.0，缓冲盐的缓冲能力较强，吡啶峰对称因子为1.31，峰形较好。根据本专利技术的实施例，所述流速为1.0mL/min。专利技术人在试验中发现，流速为1.0mL/min，待测物中吡啶的保留时间6.11min，保留合适，吡啶峰与其它峰能有效分离。根据本专利技术的实施例，所述等度洗脱中A相和B相的体积比70:30。专利技术人在试验中发现，等度洗脱中A相和B相的体积比70:30，吡啶的分离度为4.57，分离度高，对称因子为1.28，峰形好，普瑞巴林中的一些杂质被检出，该条件提供足够好的吡啶检测灵敏度。根据本专利技术的实施例，所述柱温为35℃。专利技术人在试验中发现，柱温为35℃，吡啶峰对称因子1.33，峰形较好。根据本专利技术的实施例，所述普瑞巴林原料药是以供试品溶液的形式提供的，其中，所述供试品溶液为普瑞巴林原料药的磷酸氢二钾-甲醇溶液，并且基于每毫升所述供试品溶液，普瑞巴林原料药的含量为10mg，其中，所述磷酸氢二钾-甲醇溶液是所述A相和B相的混合溶液，所述A相和B相的体积比为7:3。专利技术人通过试验发现，普瑞巴林原料药在上述磷酸氢二钾-甲醇溶液中溶解能力较好，同时，普瑞巴林原料药的进样浓度在10mg/mL时，可保证足够好的吡啶检测灵敏度。根据本专利技术的实施例，所述供试品溶液的用量为20微升，对吡啶含量的测定更加真实、可靠、准确。根据本专利技术的实施例，所述基于所述色谱图，确定所述普瑞巴林原料药中吡啶的含量是通过以下公式确定的：其中，Ai为供试品溶液中吡啶的峰面积；AS为对照溶液中吡啶峰面积；WT为供试品的称样量，mg；WS为配制对照溶液所称取吡啶的质量，mg；DT为供试品的稀释倍数；DS为对照溶液的稀释倍数；所述对照溶液是吡啶的磷酸氢二钾-甲醇溶液，并且基于每毫升所述对照溶液，吡啶的含量为2微克。根据本专利技术的实施例，采用上述方式确定普瑞巴林原料药中残留吡啶的含量，准确率高，结果更加真实可靠。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法具体包括：(1)色谱条件色谱柱为ZORBAXEclipseXDB-C18，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为240nm，柱温为35℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸氢二钾缓冲溶液，所述磷酸氢二钾缓冲溶液的pH为7.0，流动相B相为甲醇，流速为1.0mL/min，洗脱梯度为等度洗脱，等度洗脱中A相和B相的体积比为70:30，运行时间为20min，(2)配制空白溶液甲醇和A相的体积比为3:7的混合溶液作为所述空白溶液，(3)配制供试品溶液精密称定供试品100mg，至10mL容量瓶中，用空白溶液溶解，并做超声处理，稀释至刻度，摇匀，即得所述供试品溶液，(4)配制对照溶液精密称定吡啶20mg，至100mL容量瓶中；用空白溶液溶解，并做超声处理，稀释至刻度，摇匀，即得对照储备液；精密移取对照储备液1.0mL至100mL容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，得对照溶液，(5)将20微升供试品溶液注入色谱仪，得到色谱图，根据所述色谱图计算得到供试品溶液中吡啶的含量，其中，按以下公式计算供试品溶液中吡啶的含量，取2次测定结果的平均值作为测定结果：式中：Ai为供试品溶液中吡啶的峰面积；AS为连续进6针对照溶液中吡啶峰面积的平均值；WT为供试品的称样量，mg；WS为配制对照溶液所称取吡啶的质量，mg；DT为供试品的稀释倍数；DS为对照溶液的稀释倍数。所述1针对照溶液的用量为20微升。利用根据本专利技术实施例的检测方法，可简便、准确、灵敏地测定普瑞巴林原料药中残留吡啶的含量，从而有效控制普瑞巴林原料药的质量。附图说明图1是根据本专利技术实施例1的采用IntersilODS-3色谱柱条件下供试品加标溶液的色谱图；图2为根据本专利技术实施例1的采用ZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱条件下供试品加标溶液的色谱图；图3是根据本专利技术实施例1的吡啶的紫外吸收光谱；图4是根据本专利技术实施例1的普瑞巴林的紫外吸收光谱；图5是根据本专利技术实施例1的检测波长为240nm、245nm、250nm条件下，供试品加标溶液的色谱图；图6是根据本专利技术实施例1的不同pH(6.8～7.2)缓冲液条件下的吡啶对照溶液的色谱图；图7是根据本专利技术实施例1的流动相比例为K2HPO4:MeOH＝70:30条件下的供试品加标溶液的色谱图。具体实施例方式下面详细描述本专利技术的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法，其特征在于，通过高效液相色谱分析方法对所述普瑞巴林中残留吡啶进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述普瑞巴林中残留吡啶的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB‑C18，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为240nm，柱温为33℃～37℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸氢二钾缓冲液，所述磷酸氢二钾缓冲液的pH为6.8～7.2，流动相B相为甲醇，流速为0.8mL/min～1.2mL/min，洗脱梯度为等度洗脱，等度洗脱中A相和B相的体积比为68:32～72:28，运行时间为20min。

【技术特征摘要】
1.一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法，其特征在于，通过高效液相色谱分析方法对所述普瑞巴林中残留吡啶进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述普瑞巴林中残留吡啶的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为ZORBAXEclipseXDB-C18，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为240nm，柱温为33℃～37℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸氢二钾缓冲液，所述磷酸氢二钾缓冲液的pH为6.8～7.2，流动相B相为甲醇，流速为0.8mL/min～1.2mL/min，洗脱梯度为等度洗脱，等度洗脱中A相和B相的体积比为68:32～72:28，运行时间为20min。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸氢二钾缓冲液的pH为7.0。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流速为1.0mL/min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述等度洗脱中A相和B相的体积比70:30。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述柱温为35℃。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述液相色谱分析方法中，所述普瑞巴林原料药是以供试品溶液的形式提供的，其中，所述供试品溶液为普瑞巴林原料药的磷酸氢二钾-甲醇溶液，并且基于每毫升所述供试品溶液，普瑞巴林原料药的含量为10mg，其中，所述磷酸氢二钾-甲醇溶液是所述A相和B相的混合溶液，所述A相和B相的体积比为7:3。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液的用量为20微升。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基于所述色谱图，确定所述普瑞巴林中残留吡啶是通过以下公式确定的：其中：Ai为供试品溶液中吡啶的峰面积；AS为对照溶液中吡啶...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏行，刘国柱，杨成，李明，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44