基于内吗啡肽-1和神经降压素(8-13)的嵌合肽及其合成方法和应用技术

基于内吗啡肽‑1和神经降压素(8‑13)的嵌合肽及其合成方法和应用，涉及一种嵌合肽及其合成方法和应用。是要解决现有内吗啡肽‑1的镇痛持续时间较短，外周给药的镇痛活性较低，及具有镇痛耐受与胃肠道副作用的问题。该嵌合肽的氨基酸序列为Tyr‑Pro‑Trp‑Phe‑Gly‑Gly‑Arg‑Arg‑Pro‑Tyr‑Ile‑Leu。方法：一、“Fmoc”保护的Wang树脂预处理；二、脱除“Fmoc”保护基团；三、氨基酸缩合反应；四、肽链的延长；五、肽链从树脂上的切割；六、粗肽的脱盐与纯化。本发明专利技术嵌合肽镇痛持续时间长，并具有无镇痛耐受和对胃肠道副作用低的优点。本发明专利技术嵌合肽用于制备多肽镇痛药物。

Chimeric peptides based on morphine -1 and neurotensin (8-13) and their synthetic methods and Applications

The chimeric peptide based on the morphine peptide 1 and neurotensin 8 (13), and its synthetic method and application, relate to a chimeric peptide and its synthetic method and application. It is to solve the problem that the analgesic activity of the existing internal morphine peptide 1 is shorter, the analgesic activity of the drug is low, and the side effects of analgesic tolerance and gastrointestinal tract are also solved. The amino acid sequence of the chimeric peptide is Tyr Pro Trp Phe Gly Gly Gly Arg Arg Arg Pro Pro Tyr Tyr Ile Tyr. Methods: 1, \Fmoc\ protection of Wang resin pretreatment; two, removal of \Fmoc\ protection group; three, amino acid condensation reaction; four, peptide chain extension; five, peptide chain from the resin cutting; six, crude peptide desalination and purification. The chimeric peptide has long analgesic duration, and has no analgesic tolerance and low side effects on gastrointestinal tract. The chimeric peptide of the invention is used for preparing polypeptide analgesic drugs.

【技术实现步骤摘要】
基于内吗啡肽-1和神经降压素(8-13)的嵌合肽及其合成方法和应用
本专利技术涉及一种嵌合肽及其合成方法和应用。
技术介绍
世界疼痛研究联合会(IASP)将神经病理性疼痛定义为由中枢或外周神经系统的感觉通路损伤或功能障碍而引起的疼痛综合征，以自发性疼痛、痛觉过敏、痛觉超敏或诱触发痛为特征。神经性疼痛持续时间长，恢复较慢，其疼痛机制还不完全清楚，临床上缺乏满意的治疗方法，严重影响着人类的生活质量。神经肽在痛觉感受及调制方面的研究一直是神经科学研究的热点。目前已发现有多种神经肽在痛觉信息的传递和调制过程中起重要作用，其中最为熟悉的就是阿片肽。内吗啡肽是哺乳动物体内广泛存在的内源性的μ-阿片受体配体，分为内吗啡肽-1(Tyr-Pro-Trp-Phe-NH2,EM-1)和内吗啡肽-2(Tyr-Pro-Phe-Phe-NH2,EM-2)。在所有已知的阿片物质中，内吗啡肽对μ-阿片受体具有极高的亲和性和选择性。内吗啡肽通过与G蛋白偶联的μ-阿片受体结合，参与对痛觉、心血管、呼吸、胃肠、运动、行为、内分泌及免疫等诸多功能的调节，但其主要作用是强效的镇痛活性，特别是在神经性疼痛动物模型中也表现出明显本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于内吗啡肽‑1和神经降压素(8‑13)的嵌合肽，其特征在于该嵌合肽的氨基酸序列如下：Tyr‑Pro‑Trp‑Phe‑Gly‑Gly‑Arg‑Arg‑Pro‑Tyr‑Ile‑Leu。

【技术特征摘要】
1.基于内吗啡肽-1和神经降压素(8-13)的嵌合肽，其特征在于该嵌合肽的氨基酸序列如下：Tyr-Pro-Trp-Phe-Gly-Gly-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu。2.如权利要求1所述的基于内吗啡肽-1和神经降压素(8-13)的嵌合肽的合成方法，其特征在于该方法包括以下步骤：一、“Fmoc”保护的Wang树脂预处理：检查固相合成仪的气密性，将带有一个氨基酸残基的Fmoc-Leu-Wang树脂放入合成仪，加二氯甲烷搅拌30～40min，使树脂充分浸泡溶胀后，减压抽滤溶剂；其中带有一个氨基酸残基的Fmoc-Leu-Wang树脂的质量与二氯甲烷的体积比为1g：(7～12)mL；二、脱除“Fmoc”保护基团：将抽干后的溶胀树脂用DMF洗涤3～5min，抽干，重复3～5次，然后在树脂中加入体积百分浓度为20％～25％的哌啶/DMF脱保护溶液，搅拌5～10min后抽干，重复2～3次，再加入体积百分浓度为20％～25％的哌啶/DMF脱保护溶液，搅拌15～20min，使“Fmoc”保护基团充分脱除，之后抽干溶剂，最后用DMF洗涤除净脱保护溶液，得到脱除“Fmoc”保护基团的树脂；其中树脂的质量与第一次加入的脱保护溶液的体积比为1g：(8～12)mL；树脂的质量与第二次加入的脱保护溶液的体积比为1g：(10～14)mL；三、氨基酸缩合反应：依次将“Fmoc”基团保护的氨基酸、N-羟基苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲-六氟磷酸盐溶于DMF中，再加入二异丙基乙胺后混匀得混合溶液，然后将混合溶液加入到步骤二脱除“Fmoc”保护基团的树脂中，在氩气保护下搅拌反应60～72min；通过茚检试剂检测缩合反应完成的程度，反应完全后用DMF重复洗涤以除去未反应的残留液体；四、肽链的延长：重复步骤二和三，按照嵌合肽氨基酸序列的顺序，从多肽的C-端到N-端依次将“Fmoc”基团保护的氨基酸逐个缩合到树脂上，直至所有氨基酸残基缩合完成，得到肽树脂；五、肽链从树脂上的切割：将肽树脂上最后连接的氨基酸的“Fmoc”基团完全脱除，然后用二氯甲烷和甲醇交替洗涤肽树脂，充分抽干溶剂后，向肽树脂中加入切割试剂，于室温下切割反应3～5h；收集切割试剂并减压旋干，用冰冷乙醚析出沉淀，静置后去除乙醚上清，再用水及乙酸充分溶解沉淀，倒入分液漏斗，并加入乙酸乙酯萃取，收集水相，经冷冻干燥，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：王长林，袁碧玉，杨代军，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23