一种多肽止血材料制造技术

本发明专利技术提供一种多肽止血材料，其氨基酸序列为如下：Asp‑Glu‑leu‑Lys‑val‑Cys(n)‑Ile(m)‑Cys(n)‑Glu‑leu‑Lys‑val‑Arg，其中m为1‑2，n为2‑3。本发明专利技术提供了一种多肽，该多肽与血液相接触的时候会形成凝胶态，具有快速止血功能。该多肽生物可降解、生物相容性良好，质量易于控制；其次，止血过程不受正常凝血机制影响，对使用抗凝剂的病人、血小板和全血细胞低的病人仍能发挥止血作用。

A kind of peptide hemostat

The present invention provides a polypeptide hemostatic material, its amino acid sequence is as follows: Asp Glu Leu Lys val Cys (n) Ile (m) Cys (n) Glu Leu Lys val Arg, which is 1 m 2, N 2 3. The invention provides a polypeptide, when the polypeptide is in contact with the blood, it forms a gelation state and has a rapid hemostasis function. The peptide has good biodegradability and biocompatibility, and its quality is easy to control. Secondly, hemostasis is not affected by normal coagulation mechanism. It can still play a hemostatic role for patients who use anticoagulants, platelets and low blood cells.

【技术实现步骤摘要】
一种多肽止血材料
本专利技术属于医学材料
，具体涉及一种多肽止血材料。
技术介绍
在日常生活中，由于外伤、手术等情况下导致大量出血的状况，如果不及时止血，可能会引起感染和创伤加剧，因此控制出血是急救和创伤治疗的重要步骤。合适的止血材料能明显缩短手术时间，对创伤或术后恢复至关重要。在选择止血材料时应当多方面综合考虑，包括出血部位，术腔形态大小，不同渗出血情况的填塞要求，不同止血材料的止血机制，与机体的相容性，患者的凝血功能和经济条件等。目前局部止血材料主要包括沸石类、多聚糖类如壳聚糖和生物材料类如明胶等。沸石类效果好、成本低但有放热反应且颗粒不易除去；多聚糖类生物相容性好但对伤口大小形状等有要求；因此需要作为止血敷料或止血剂的材料要具备良好的止血性能，优良的生物相容性，无毒副作用，无刺激性，易于加工成型等。
技术实现思路
本专利技术提供一种多肽止血材料，在与血液接触后就能形成凝胶状态，具有快速止血功能，从而弥补现有技术的不足。本专利技术首先提供一种多肽，其氨基酸序列为如下：Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys(n)-Ile(m)-Cys(n)-Glu-leu-Lys-val-Arg(简写为：DELKVC(n)I(m)C(n)ELKVR)；其中m为1-2，n为2-3；作为实施例的一种具体记载，所述的多肽的氨基酸序列为Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys-Ile-Cys-Glu-leu-Lys-val-Arg(DELKVCICELKVR，SEQIDNO:1)；作为实施例的另一种具体记载，该多肽的氨基酸序列如下：Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys-Cys-Ile-Cys-Cys-Glu-leu-Lys-val-Arg(DELKVCCICCELKVR，SEQIDNO:2)；作为优选，所述的多肽的氨基酸序列如下：Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys-Cys-Cys-Ile-Ile-Cys-Cys-Cys-Glu-leu-Lys-val-Arg(DELKVCCCIICCCELKVR，SEQIDNO:3)。本专利技术所提供的多肽用于制备止血制品。本专利技术提供了一种多肽，该多肽与血液相接触的时候会形成凝胶态，具有快速止血功能。该多肽生物可降解、生物相容性良好，质量易于控制；其次，止血过程不受正常凝血机制影响，对使用抗凝剂的病人、血小板和全血细胞低的病人仍能发挥止血作用。附图说明图1：氨基酸序列为SEQIDNO:3的多肽的原子力显微镜(AFM)形貌图，图2：氨基酸序列为SEQIDNO:3的多肽的原子力显微镜(AFM)形貌图。具体实施方式首先对本专利技术所涉及的术语及方法进行描述：1、氨基酸：氨基酸根据其酸性基团(羧基)和碱性基团(氨基，胍基，咪唑基)的多寡而分为酸性氨基酸，碱性氨基酸和中性氨基酸。酸性氨基酸有天冬氨酸和谷氨酸。碱性氨基酸有精氨酸，赖氨酸和组氨酸。中性氨基酸：就是除了酸性氨基酸和碱性氨基酸外的氨基酸。其中20种氨基酸的中文名、三字母和单字母对照如下：甘氨酸glyG；丝氨酸SerS；丙氨酸glaA；苏氨酸thrT；缬氨酸valV；异亮氨酸ileI；亮氨酸leuL；酪氨酸tyrY；苯丙氨酸pheF；组氨酸hisH；脯氨酸proP；天冬氨酸aspD；甲硫氨酸metM；谷氨酸gluE；色氨酸trpW；赖氨酸lysK；半胱氨酸cysC；精氨酸argR。下面结合实施例对本专利技术进行详细的描述。实施例1：多肽的设计及合成本专利技术设计的短肽通过非共价键相互作用，使该短肽能在缓冲液中自组装形成纤维结构。其氨基酸序列为Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys(n)-Ile(m)-Cys(n)-Glu-leu-Lys-val-Arg(简写为：DELKVC(n)I(m)C(n)ELKVR)；其中m为1-2，n为2-3。通过生物公司合成如下三种多肽：P1多肽的氨基酸序列为Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys-Ile-Cys-Glu-leu-Lys-val-Arg(DELKVCICELKVR，SEQIDNO:1)；P2多肽的氨基酸序列如下：Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys-Cys-Ile-Cys-Cys-Glu-leu-Lys-val-Arg(DELKVCCICCELKVR，SEQIDNO:2)；P3多肽的氨基酸序列如下：Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys-Cys-Cys-Ile-Ile-Cys-Cys-Cys-Glu-leu-Lys-val-Arg(DELKVCCCIICCCELKVR，SEQIDNO:3)。合成时多肽的N端进行乙酰化修饰，C端进行氨基化修饰；合成的纯度为95.5％。合成的初始样品为白色冻干粉，使用前无须经过特殊处理。使用时将精密称量后的短肽冻干粉末加入到超纯水中配制成浓度为20mg/ml的母液，密封并避光储存在4℃冰箱中备用，后续使用时将其直接稀释成相应浓度短肽溶液。实施例2：凝血活性的测定首先从志愿者采集血液，血液装入含有0.9mL枸橼酸钠的离心管中，混合均匀后血液样本以3000r/min离心10min得到待测血液。在96孔微孔板中，采用倍比稀释方法进行。首先在每个孔中加入20μl的10mmol的HEPES缓冲液(pH7.4)，取合成的多肽溶液(初始浓度为10mg/ml)20μl加入到第一实验孔中；混均后，取20μl加入到第二孔中；混合均匀后，再20μl加入到第三孔中，以此类推作倍比稀释；然后再每孔中加入40μl的待检测血液，添加结束后再混合仪上震动混均5min，室温下放置1小时后，肉眼检测凝集结果，凝血活性单位定义为表现凝血活性的最高稀释倍数的倒数。结果表明氨基酸序列为SEQIDNO:1的多肽，其最高稀释倍数为6倍，即凝血活性为12；氨基酸序列为SEQIDNO:7的多肽，其最高稀释倍数为8倍，即凝血活性为16；而氨基酸序列为SEQIDNO:3的多肽，其最高稀释倍数为9倍，即凝血活性为18。上述结果表明上述氨基酸序列为SEQIDNO:1-3的多肽都具有体外凝血活性，且SEQIDNO:3的凝血活性最佳，推测与异亮氨酸和半胱氨酸的数目多少有关系。实施例3：对氨基酸序列为SEQIDNO:3的多肽进行原子力显微镜(AFM)的检测：将30μl的多肽溶液置于新解离的云母片上，室温下吸附10秒左右，用超纯水冲洗吸附后的云母片去除多余的溶液，用氮气轻轻吹扫确保云母片干燥。利用原子力显微镜观测组装体的形貌图，实验中采用TESP型探针(Veeco,SantaBarbara,CA)在轻敲模式下扫描云母片表面，扫描速率为1-1.5Hz，数字分辨率512×512，利用AFM自带软件(Nanoscope5.31r1)对图像进行检测。对氨基酸序列为SEQIDNO:3的多肽进行透射电子显微镜(TEM)的检测：将30μl的多肽溶液滴在封口膜上，然后将300目的镀碳铜网贴放在样品上约30秒，用干净的镊子取出铜网，并用滤纸吸干铜网周围多余的液体静置晾干，然后将吸附有两亲性短肽的铜网一面贴附在2％的乙酸双氧铀溶液液滴(同样品溶液相同放置在封口膜上)上进行负染约1分钟，用镊子取出铜网将多余的液体用滤纸吸干静置晾干。采用JEOLJEM-2100UHR型电子显微镜观测形貌，加速电压为2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽，其氨基酸序列为如下：Asp‑Glu‑leu‑Lys‑val‑Cys(n)‑Ile(m)‑Cys(n)‑Glu‑leu‑Lys‑val‑Arg；所述的m为1‑2，n为2‑3。

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其氨基酸序列为如下：Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys(n)-Ile(m)-Cys(n)-Glu-leu-Lys-val-Arg；所述的m为1-2，n为2-3。2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽的氨基酸序列为Asp-Glu-leu-Lys-val-Cys-Ile-Cys-Glu-leu-Lys-val-Arg。3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽的氨基酸序列为Asp-Glu-...

【专利技术属性】
技术研发人员：类延乐，张军，吴海军，郑爽，
申请(专利权)人：青岛宏昊生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37