一种达托霉素的纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种达托霉素的纯化方法。本发明专利技术的达托霉素的纯化方法，包括如下步骤：1)将达托霉素粗提取物进行预处理除杂；2)将经步骤1)预处理除杂后的达托霉素溶液上样到层析柱中进行层析，采用流动相对达托霉素溶液进行等度洗脱；3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的达托霉素溶液。本发明专利技术的达托霉素的纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足达托霉素纯度高于91％，回收率高于92％的要求。本发明专利技术达托霉素的纯化方法，方法简单方便，可用于达托霉素的规模化生产，大大降低了生产成本。

A method for purifying daptomycin

【技术实现步骤摘要】
一种达托霉素的纯化方法
本专利技术属于药物纯化
，涉及一种达托霉素的纯化方法。
技术介绍
达托霉素是自链霉菌(S.reseosporus)发酵液中提取得到一种全新结构的环脂肽类抗生素。它不仅具有新颖的化学结构，而且其作用模式也与任何一个已获批准的抗生素都不同：它通过扰乱细胞膜对氨基酸的转运，从而阻碍细菌细胞壁肽聚糖的生物合成，改变细胞质膜的性质，能在多个方面破坏细菌细胞膜功能，并迅速杀死革兰氏阳性菌，因此细菌对达托霉素产生耐药性可能会比较困难。临床用于治疗由一些革兰氏阳性敏感菌株引起的并发性皮肤及皮肤结构感染。治疗革兰氏阳性菌引起复杂性皮肤及皮肤结构感染，如脓肿、手术切口感染和皮肤溃疡，包括对甲氧西林敏感(耐药)的葡萄球菌。用于由金黄色葡萄球菌引起的右侧感染性心膜炎；与RIE或复杂性皮肤与软组织感染并发的由金黄色葡萄球菌引起的菌血症。达托霉素除了能作用于大多数临床相关革兰氏阳性菌外，更重要的是它在体外对已呈现甲氧西林(methicillin)、万古霉素和利奈唑烷等耐药性质的分离菌株具有强力活性，这个特性对于危重感染患者具有非常重要的临床意义。其中，达托霉素的结构式如下：目前国内外专利、文献等对达托霉素的报道多为合成方法专利，分离纯化方法鲜有报道。US6696412公开了一种高度纯化的达托霉素和包含该化合物的药物组合物。该专利技术公开了一种纯化达托霉素的方法，包括阴离子交换色谱，疏水相互作用色谱和阴离子交换色谱的连续步骤，该专利技术还公开了通过改良的缓冲液增强阴离子交换色谱法纯化达托霉素的方法。CN101830970A公开了一种高纯度达托霉素的纯化制备方法，该方法采用缓冲溶液和达托霉素粗品配成样品溶液，上复合型YT-01反相硅胶材料柱吸附，用强极性溶剂的水溶液作解析剂进行梯度洗脱或恒定浓度洗脱，其色谱纯度大于98％。CN102276696A公开了一种达托霉素的纯化方法，将半纯化的达托霉素加载结合到凝胶型弱阴离子树脂后进行洗脱。本专利技术的纯化方法，得到的达托霉素纯度高于98％，且原料易得、相对廉价、易于工业化推广应用。上述专利文件介绍了达托霉素的纯化方法，但是工艺极其复杂且收率低、成本高，产品损耗大，工业应用有限。因此有必要对达托霉素的分离、纯化和制备做进一步研究。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种达托霉素的纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足达托霉素纯度高于91％，回收率高于92％的要求，同时本专利技术方法简单方便，收集体积小，可用于达托霉素的规模化生产，大大降低了生产成本。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：一种达托霉素的纯化方法，所述纯化方法包括如下步骤：1)将达托霉素粗提取物进行预处理除杂；2)将经步骤1)预处理除杂后的达托霉素溶液上样到层析柱中进行层析，采用流动相对达托霉素溶液进行等度洗脱；3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的达托霉素溶液。步骤1)的具体过程为：将达托霉素粗提取物溶解于水中得到达托霉素溶液，采用滤膜对所述达托霉素溶液进行过滤；优选地，所述达托霉素溶液的pH值为6～7，例如达托霉素溶液的pH值为6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7。优选地，所述滤膜的孔径为0.1～0.5μm，例如滤膜的孔径为0.1μm、0.2μm、0.3μm、0.4μm、0.5μm。步骤2)的具体过程为：将经步骤1)预处理除杂后的达托霉素溶液上样到装有聚丙烯酸酯微球的层析柱中进行层析，采用乙酸钠水溶液和盐溶液作为流动相对达托霉素溶液进行等度洗脱。所述聚丙烯酸酯微球为单分散的、具有孔道结构的微球。优选地，所述微球的型号是UniQ50-XS。UniQ50-XS是聚丙烯酸酯和二乙烯基苯交联形成的粒径为50μm左右，孔径的高分子微球，表面带有季胺基强阴离子交换基团，该微球严格控制的粒径大小和孔径结构(如图1)，使其作为色谱填料时具有很好的针对性，较好的契合了达托霉素的分子大小与结构，因此特别适合用于纯化达托霉素。同时该款色谱填料具有很高的动态载量，压缩系数小，远低于软胶基质如葡聚糖、琼脂糖填料。同时，聚丙烯酸酯基质的该微球可耐受2～14pH范围，并可在后期对层析柱进行高pH下的彻底清洗，便于工业上反复利用，填料寿命长，降低成本。本专利技术采用单分散的UniQ50-XS作为固定相，仅需一步层析即可使达托霉素纯度高于92％，收率可达95％。本专利技术采用盐溶液和乙酸钠水溶液作为流动相，仅用4～6个柱体积就可完成达托霉素主峰的洗脱，因此本过程所用流动相安全、无污染且成本较低，并且使用的流动相量较少，收集液浓度高，纯化周期比较短。本专利技术中，所述乙酸钠水溶液的浓度为10～50mmol/L，例如乙酸钠水溶液的浓度为10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L、25mmol/L、30mmol/L、35mmol/L、40mmol/L。优选地，所述乙酸钠水溶液的pH值为5～6，例如乙酸钠水溶液的pH值为5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6。所述盐溶液为浓度为0.5mol/L氯化钠的水溶液或浓度为10～50mmol/L的乙酸钠水溶液。步骤2)中，所述上样前还包括对层析柱进行柱前预处理的步骤。优选地，所述柱前预处理具体过程为：上样前，将层析柱用浓度为10～50mmol/L的乙酸钠水溶液进行平衡处理。步骤2)中，所述等度洗脱过程为，先用8％盐溶液冲洗12～18个柱体积洗杂，再用30％盐溶液冲洗4～6个柱体积洗脱主峰，最后用1mol/L的氯化钠水溶液冲洗2～3个柱体积再生。作为优选方案，本专利技术的达托霉素的纯化方法，包括如下步骤：1)将达托霉素粗提取物溶解于水中得到达托霉素溶液，采用孔径为0.1～0.5μm的滤膜对所述达托霉素溶液进行过滤；2)将经步骤1)过滤后的达托霉素溶液上样到装有聚丙烯酸酯微球UniQ50-XS的层析柱中进行层析，上样前，将层析柱用浓度为10～50mmol/L的乙酸钠水溶液进行平衡处理，采用浓度为10～50mmol/L的乙酸钠水溶液和浓度为0.5mol/L的氯化钠的水溶液作为流动相对达托霉素溶液进行等度洗脱，所述等度洗脱过程为，先用8％盐溶液冲洗12～18个柱体积洗杂，再用30％盐溶液冲洗4～6个柱体积洗脱主峰，最后用1mol/L的氯化钠水溶液冲洗2～3个柱体积再生；3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的达托霉素溶液，对符合要求的组份液进行汇总。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术达托霉素的纯化方法，应用单分散聚甲基丙烯酸酯强阴离子交换层析介质UniQ作为层析柱的填料，不但有利于以水溶液做流动相分离纯化达托霉素粗品，达到高纯度和高回收率，而且层析柱不会随着盐浓度和流速的变化而变化，层析填料可耐高压和高流速、并具备高载量。(2)本专利技术达托霉素的纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足达托霉素纯度高于91％，回收率高于92％的要求。(3)本专利技术达托霉素的纯化方法，方法简单方便，可用于达托霉素的规模化生产，大大降低了生产成本。附图说明图1为本专利技术的实施例1中使用的UniQ50-XS聚丙烯酸酯微球的扫描电镜图；图2为本专利技术的实施例1提纯前的粗品的高效液相色谱分析示意图；图3为本专利技术的实施例1达托霉素纯化后的高本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种达托霉素的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括如下步骤：1)将达托霉素粗提取物进行预处理除杂；2)将经步骤1)预处理除杂后的达托霉素溶液上样到层析柱中进行层析，采用流动相对达托霉素溶液进行等度洗脱；3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的达托霉素溶液。

【技术特征摘要】
1.一种达托霉素的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括如下步骤：1)将达托霉素粗提取物进行预处理除杂；2)将经步骤1)预处理除杂后的达托霉素溶液上样到层析柱中进行层析，采用流动相对达托霉素溶液进行等度洗脱；3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的达托霉素溶液。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤1)的具体过程为：将达托霉素粗提取物溶解于水中得到达托霉素溶液，采用滤膜对所述达托霉素溶液进行过滤；优选地，所述达托霉素溶液的pH值为6～7；优选地，所述滤膜的孔径为0.1～0.5μm。3.根据权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，步骤2)的具体过程为：将经步骤1)预处理除杂后的达托霉素溶液上样到装有聚丙烯酸酯微球的层析柱中进行层析，采用乙酸钠水溶液和盐溶液作为流动相对达托霉素溶液进行等度洗脱。4.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述聚丙烯酸酯微球为单分散的、具有孔道结构的微球；优选地，所述微球的型号是UniQ50-XS。5.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述乙酸钠水溶液的浓度为10～50mmol/L；优选地，所述乙酸钠水溶液的pH值为5～6。6.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述盐溶液为浓度为0.5mol/L氯化钠的水溶液或浓度为10～50mmol/L的乙酸钠水溶液。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：江必旺，毕士峰，邓杰，赵婧，
申请(专利权)人：苏州纳微科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32