重组鹅白细胞介素-2蛋白的制备方法及其用途技术

一种重组鹅白细胞介素－２蛋白的制备方法，其特征在于它的步骤如下：　　　　１）自浙东白鹅单核淋巴细胞中克隆出鹅白细胞介素－２（ｇｓＩＬ－２）的ＤＮＡ片段与含有Ｐ↓［ＢＡＤ］启动子的原核表达载体ｐＢＡＤ／Ｈｉｓ　　Ｂ组建成表达载体ｐＢＡＤ／Ｈｉｓ　　Ｂ／ｇｓＩＬ－２；或者上述ｇｓＩＬ－２ＤＮＡ片段与含有Ｐ↓［ＡＵＧＩ］启动子的真核表达载体ｐＭＥＴαＢ组建成分泌型表达载体ｐＭＥＴαＢ／ｇｓＩＬ－２；或者上述ｇｓＩＬ－２ＤＮＡ片段与含有Ｐ↓［ＡＵＧＩ］启动子的真核表达载体ｐＭＥＴＢ组建成胞内型表达载体ｐＭＥＴ　　Ｂ／ｇｓＩＬ－２；　　　　２）用ＲＭ作为基础培养基，通过发酵扩增大肠杆菌工程菌ＬＭＧ１９４；　　　　　３）用ＢＭＤＹ作为基础培养基，通过发酵扩增酵母工程菌ＰＭＡＤ１１和ＰＭＡＤ１６，在表达不同时间加氮源、碳源等营养素；　　　　４）大肠杆菌ＬＭＧ１９４和酵母菌ＰＭＡＤ１６诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即为ｇｓＩＬ－２粗制品，ＰＭＡＤ１１表达的ｇｓＩＬ－２主要分泌于培养基中，经过离心取上清即为ｇｓＩＬ－２粗制品。用Ｎｉ－ＮＴＡ　Ａｒｇａｒｏｓｅ蛋白纯化系统可得到ｇｓＩＬ－２纯品；　　　　５）粗制品或纯品加入甘氨酸等稳定剂和助溶剂后，无菌过滤、分装和冻干后制成成品，保存于－２０℃的冷藏环境中。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种重组鹅白细胞介素-2蛋白的制备方法及其用途。
技术介绍
1.Schauenstein等(1982)首先发现了鸡脾淋巴细胞分泌一种具有类似于哺乳动物白细胞介素-2样活性的细胞因子，随后，Schnetlzler等(1983)应用硫酸铵沉淀，碳酸氢铵重悬浮，Sephadex G-100凝胶过滤得到两类具有活性的分离物，其分子量分别位于9～11.5KDa和19.5～21.5Kda之间。Vainio等此后用同样方法得到了分子量为13KDa的分子，而且他们用等电聚焦估计鸡IL-2的PI为5.9。Frederickson等(1987)应用Phenyl-sepharose、阴离子交换及superose-12过柱等方法，分离出两类具有活性的物质，其一分子量为14KDa，其二分子量约为26～30KDa，后者比前者活性更强，两者均具有低亲水性。Myers(1992)报道了一种从ConA刺激的鸡脾淋巴细胞培养液中纯化鸡IL-2的“五步法”，即(1)凝胶过滤初步浓缩ConA刺激的鸡脾淋巴细胞悬液；(2)硫酸铵沉淀；(3)用Sephadex G-100层析；(4)反向本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周继勇，陈吉刚，王金勇，腾巧泱，吴建祥，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：