基因工程制备人白细胞介素24的方法及其表达载体和工程菌技术

本发明专利技术提供一种高效地制备具有一定生物活性的基因工程人白介素２４的方法，及其表达载体和工程菌。本发明专利技术选用融合表达载体来表达ｈＩＬ－２４或ｈｓＩＬ－２４蛋白，所述的表达载体为含有人白细胞介素２４基因序列（ＩＬ－２４）或人白细胞介素２４基因突变序列（ｓＩＬ－２４）的质粒载体ｐＥＴ３２ａ（＋），且ｈＩＬ－２４或ｈｓＩＬ－２４编码序列位于ｐＥＴ３２ａ（＋）载体上Ｋｐｎ１和ＢａｍＨ１酶切位点之间。所述的基因工程菌是大肠杆菌，并被本发明专利技术所述的表达载体所转化，是ｐＥＴ３２ａ（＋）－ｈＩＬ－２４／ＢＬ２１或ｐＥＴ３２ａ（＋）－ｈｓＩＬ－２４／ＢＬ２１。本发明专利技术的制备工艺中提供了全套的溶解、复性、消化以及纯化的工艺，使目的蛋白的表达量能够达到３０％，复性得率大于５０％，ＩＬ－２４的纯度大于９５％，且完全适用于工业大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基因工程人白细胞介素２４的表达载体，其特征在于，该载体为含有人白细胞介素２４基因序列ｈＩＬ－２４或人白细胞介素２４基因突变序列ｈｓＩＬ－２４的质粒载体ｐＥＴ３２ａ（＋），且ｈＩＬ－２４或ｈｓＩＬ－２４编码序列位于ｐＥＴ３２ａ（＋）载体上Ｋｐｎ１和ＢａｍＨ１酶切位点之间，该载体为ｐＥＴ３２ａ（＋）－ｈＩＬ－２４或ｐＥＴ３２ａ（＋）－ｈｓＩＬ－２４；克隆ｈＩＬ－２４或ｈｓＩＬ－２４基因的引物为：Ｐ１５’－ＧＧＴＡＣＣＧＡＣＧＡＣＧＡＣＧＡＣＡＡＧＧＣＣＣＡＧＧＧＣ ＣＡＡＧＡＡＴＴ（Ｋｐｎ１）Ｐ２５’－ＧＧＡＴＣＣＴＴＡＣＡＧＡＧＣＴＴＧＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧ（ＢａｍＨＩ）为避免在Ｎ端引入Ａｌａ和Ｍｅｔ两个多余的氨基酸，在设计引物时将肠激酶识别位点的编码碱基，即加黑斜体 部分，加入到上游引物中。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邹全明，杨珺，张卫军，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]