一种检测鱼腥草黄酮类成分含量的HPLC方法技术

本发明专利技术公开了一种检测鱼腥草黄酮类成分含量的HPLC方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液制备：取鱼腥草粉末，用低级醇提取，过滤得供试品溶液；(2)对照品溶液制备：取金丝桃苷和槲皮苷对照品，混合，加低级醇配置成混合对照品溶液；(3)分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；洗脱程序：等度洗脱30min，A与B的体积比为18～22：82～78；检测波长：205nm；(4)根据检测结果计算得到鱼腥草中金丝桃苷和槲皮苷的含量。本发明专利技术的检测方法准确可靠，简便快速，为提高鱼腥草质量控制水平奠定了基础。

A HPLC method for the determination of flavonoids in Houttuynia Houttuyniae

The invention discloses HPLC method for detecting the content of total flavonoids from Houttuynia cordata, which comprises the following steps: (1) for sample preparation: Houttuynia powder, extracted with lower alcohol, filtering the testsolution; (2) standard solution preparation: Hyperoside and quercitrin in control. Mixed with lower alcohol, configured to mixed standard solution; (3) the sample solution and standard solution was injected into the HPLC detection, chromatographic conditions are as follows: chromatographic column: C18 column; mobile phase: the mobile phase A was 0.1% B, the mobile phase elution phosphorus acid solution; program: isocratic 30min, A and B, the volume ratio of 18 ~ 22:82 ~ 78; detection wavelength: 205nm; (4) the calculated content in Houttuynia Hyperoside and quercitrin according to the detection result. The detection method of the invention is accurate, reliable, simple and fast, and lays a foundation for improving the quality control level of Houttuynia cordata.

【技术实现步骤摘要】
一种检测鱼腥草黄酮类成分含量的HPLC方法
本专利技术涉及中药材质量控制
，具体涉及一种鱼腥草黄酮类成分含量的HPLC测定方法。
技术介绍
鱼腥草为三白草科蕺菜属植物蕺菜(HouttuyniacordataThunb.)的新鲜全草或干燥地上部分。具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋等功效，用于痰热喘咳、热淋、热痢、痈肿等症。是国家卫生部正式批准的“既是食品，又是药品”的大宗中药材之一。鱼腥草的有效成分主要是挥发油和黄酮类物质。现代药理研究表明，鱼腥草中黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗诱变和消除自由基等功能。目前生产的制剂中除鱼腥草注射液的主要活性物质为挥发油外，大部分制剂的主要活性成分为黄酮类化合物。目前鱼腥草的质量控制研究主要集中在挥发性成分，黄酮类成分研究较少，并且鱼腥草的挥发油成分不稳定，易氧化聚合失效，在干制或不当提取过程中，其有效成分会发生较大的变化，直接影响到药物的疗效。由此可知，现有鱼腥草的质量控制指标可靠性不高。因此，急需一种能够更好地控制鱼腥草药材质量的方法。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种检测鱼腥草黄酮类成分含量的HPLC方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液制备：取鱼腥草粉末，用低级醇提取，过滤得供试品溶液；(2)对照品溶液制备：取金丝桃苷和槲皮苷对照品，混合，加低级醇配置成混合对照品溶液；(3)分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；梯度洗脱程序：等度洗脱30min，A与B的体积比为18～22：82～78；检测波长：205nm；(4)根据检测结果计算得到鱼腥草中金丝桃苷和槲皮苷的含量。进一步地，所述低级醇为甲醇、乙醇、丙醇；优选甲醇。进一步地，所述甲醇的浓度为30-70％V/V；优选50％V/V。进一步地，步骤(1)中，所述提取是超声或回流提取。进一步地，所述提取的时间为30min。进一步地，步骤(1)中，所述鱼腥草与甲醇的质量体积比为1:100～200。进一步地，所述鱼腥草与甲醇的质量体积比为1:150。进一步地，步骤(3)中，所述色谱柱为WatersSunfireC18柱4.6×250mm，5μm。进一步地，步骤(3)中，所述A与B的体积比为18:82。进一步地，所述色谱条件的柱温为25～40℃，流速为1.0mL/min。本专利技术通过提取方法和色谱条件的筛选，成功建立了测定鱼腥草中金丝桃苷和槲皮苷含量的HPLC检测方法，该方法准确可靠，简便快速，为提高鱼腥草质量控制水平奠定了基础。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为鱼腥草样品溶液的HPLC色谱图，峰a为金丝桃苷。峰b为槲皮苷。图2为对照品溶液的HPLC色谱图，峰a为金丝桃苷。峰b为槲皮苷。图3为流动相乙腈-0.1％磷酸水体积比为22:78时候的HPLC色谱图。图4为流动相乙腈-0.1％磷酸水体积比为20:80时候的HPLC色谱图。图5为流动相乙腈-0.1％磷酸水体积比为18:82时候的HPLC色谱图。具体实施方式仪器与试药金丝桃苷(中国检定研究院，批号：MUST-16102605)、槲皮苷(中国检定研究院，批号：111538-201606)。高效液相色谱仪：WatersSunfireC18柱(4.6mm×250mm，5μm)。甲醇、磷酸均为国产分析纯；HPLC用甲醇、乙腈均为色谱纯；水为超纯水。20批鱼腥草样品的来源如下表实施例1、本专利技术检测方法1、检测方法(1)供试品的制备：精密称取过四号60目筛鱼腥草粉末0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇15mL，称定重量，超声提取30min，放冷，称定重量，用甲醇补足重量，摇匀，用微孔滤膜过滤，取滤液进行色谱测定，色谱图见图1。(2)对照品的制备：精密称取金丝桃苷对照品10.26mg，配制成浓度为102.6ng/mL的对照品溶液，精密称取槲皮苷对照品10.87mg，配制成浓度为108.7ng/mL的对照品溶液。取对照品溶液进行色谱测定，色谱图见图2。(3)高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：WatersSunfireC18柱(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；梯度洗脱程序：等度洗脱30min，A与B的体积比为18:82；检测波长：205nm。(4)根据检测结果计算得到鱼腥草中金丝桃苷和槲皮苷的含量。2、结果20批鱼腥草样品中金丝桃苷和槲皮苷含量的测定结果见表2表220批鱼腥草样品金丝桃苷和槲皮苷的含量编号金丝桃苷含量(mg/g)槲皮苷含量(mg/g)BZ-10.622.27BZ-21.072.22BZ-30.762.24BZ-40.441.32BZ-50.832.57BZ-60.741.86BZ-70.502.00BZ-90.721.26AG-11.013.07AG-21.304.37AG-31.555.27AG-40.893.07AG-51.022.76AG-60.862.62AG-71.113.77AG-81.173.19YL-11.073.19YL-20.651.98YL-31.033.38YL-40.843.28平均0.912.78结果表明，市售的鱼腥草中金丝桃苷的平均含量为0.91mg/g，最高值为1.55mg/g；槲皮苷的平均含量为2.78mg/g，最高值为5.27mg/g。实施例2、本专利技术方法的工艺参数筛选1色谱条件的考察(1)流动相考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1％磷酸水的洗脱效果及图谱效果，结果表明乙腈-0.1％磷酸水的洗脱效果较好，所测定的图谱基线较平稳，色谱峰峰形较好，因此最终选择乙腈-0.1％磷酸水作为流动相。(2)流动相梯度考察了乙腈-0.1％磷酸水比例分别为22:78、20:80、18:82等不同比例的色谱条件，通过比较不同洗脱程序所测得的样品图(图3、图4、图5)，以梯度为18:82的色谱峰分离度高，杂质少，基线较平稳且分析时间较为合理分离效果较好，时间较短。因此最终选择梯度乙腈-0.1％磷酸水比例为18:82。(3)检测波长通过对样品全波长检测发现，鱼腥草干药材中金丝桃苷和槲皮苷的最大吸收波长在205nm，故确定波长205nm为鱼腥草药材中金丝桃苷和槲皮苷的测定波长。(4)柱温考察不同柱温25℃、30℃、35℃、40℃对色谱峰的影响，结果不同温度的柱温，各主要成分的色谱峰分离度、峰面积差异不明显，综合考虑柱温为30℃。(5)流速采用上述最佳色谱条件，考察不同流速条件下(0.8mL/min、1mL/min)，同一份样品的色谱图，结果各主要成分的色谱峰分离度和峰面积差异不大，其中以流速1.0mL/min的图谱峰形较好，因此最终选用流速为1.0mL/min。综上，最终色谱条件确定为：色谱柱：WatersSunfireC18柱(4.6mm×250mm，5μm)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测鱼腥草黄酮类成分含量的HPLC方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)供试品溶液制备：取鱼腥草粉末，用低级醇提取，过滤得供试品溶液；(2)对照品溶液制备：取金丝桃苷和槲皮苷对照品，混合，加低级醇配置成混合对照品溶液；(3)分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；洗脱程序：等度洗脱30min，A与B的体积比为18～22：82～78；检测波长：205nm；(4)根据检测结果计算得到鱼腥草中金丝桃苷和槲皮苷的含量。

【技术特征摘要】
1.一种检测鱼腥草黄酮类成分含量的HPLC方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)供试品溶液制备：取鱼腥草粉末，用低级醇提取，过滤得供试品溶液；(2)对照品溶液制备：取金丝桃苷和槲皮苷对照品，混合，加低级醇配置成混合对照品溶液；(3)分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液；洗脱程序：等度洗脱30min，A与B的体积比为18～22：82～78；检测波长：205nm；(4)根据检测结果计算得到鱼腥草中金丝桃苷和槲皮苷的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述低级醇为甲醇、乙醇、丙醇；优选甲醇。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述甲醇的浓度为30-70％V/V；优选50％V/V。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：李敏，周娟，张思荻，卿艳，杨超，
申请(专利权)人：成都中医药大学，四川省食品药品检验检测院，
类型：发明
国别省市：四川,51