固相萃取‑高效液相色谱‑荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物的方法技术

固相萃取‑高效液相色谱‑荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物的方法，包括如下步骤，S1、样品的预处理；S2、样品的制备，采用自制固相萃取柱进行固相萃取；S3、标准溶液的配制；S4、标准曲线的绘制：S5、测定：取用S2获得的样品上样，进行HPLC分析，保留时间定性，峰面积定量，醋酸纤维为载体，柚子皮瓤粉作为吸附剂，柚子皮瓤粉均匀分布在醋酸纤维的间隙内，柚子皮瓤粉对尿液中的单胺类神经递质及其代谢物具有优异的灵敏度和选择性，使得人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物富集在柚子皮瓤粉上，大大提高了样品的纯净度和灵敏度，降低了检出限，提高了回收率，提高了检测的效率；成本低廉，可以降低检测成本。

Method for the determination of monoamine neurotransmitters and their metabolites in human urine fluorescence method solid-phase extraction HPLC

Method for the determination of monoamine neurotransmitters and their metabolites in human urine fluorescence method solid phase extraction high performance liquid chromatography, which comprises the following steps: preprocessing, S1 sample; S2, sample preparation, using solid phase extraction and solid-phase extraction column; the preparation of standard solution, S3; S4, drawing the standard curve. S5, determination: take samples obtained by S2, HPLC analysis, retention time qualitative, quantitative peak area, acetate fiber as the carrier, grapefruit peel pulp powder as adsorbent, grapefruit peel pulp powder evenly distributed in the gap of acetate fiber in grapefruit peel pulp powder has excellent sensitivity and selectivity to monoamine neurotransmitters and their metabolites in the urine, in human urine monoamine neurotransmitter and metabolite accumulation in grapefruit peel pulp powder, greatly improving the sample purity and sensitivity, The detection limit is reduced, the recovery rate is increased, the efficiency of detection is improved, the cost is low, and the detection cost can be reduced.

【技术实现步骤摘要】
固相萃取-高效液相色谱-荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物的方法
本专利技术涉及人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物测定方法
，特别是涉及固相萃取-高效液相色谱-荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物的方法。
技术介绍
神经递质是神经末梢分泌的化学物质，在化学突触传递中担当信使的作用。单胺类神经递质(MNTs)是最早发现的一类，包括多巴胺(DA)、肾上腺素(EP)、去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)及其代谢产物香草扁桃酸(VMA)、高香草酸(HVA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)。MNTs在中枢神经系统、外周植物神经系统和激素介导的内分泌及外分泌活动中起着极其重要的作用。固相萃取(Solid-PhaseExtraction，简称SPE)是近年发展起来一种样品预处理技术，由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来，主要用于样品的分离、纯化和浓缩，与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，正成为复杂样品的净化、富集的有效手段。人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物含量的准确检测，对嗜铬细胞瘤等相关疾病诊断、新药研制开发、评价本文档来自技高网...

【技术保护点】
固相萃取‑高效液相色谱‑荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、样品的预处理：取新鲜人体尿液2ml，加200μl 1mol/L的盐酸溶液将尿液进行酸化处理，随后加入2.0ml 0.5mol/L的乙酸铵，混匀，超声5min后，以5000r/min离心10min，取上清液，经0.45μm滤膜过滤，滤液于4℃冰箱保存待用；S2、样品的制备：将柚子皮瓤烘干粉碎过300～500目筛，得到柚子皮瓤粉，然后柚子皮瓤粉在真空条件下焙烧0.6‑1h，焙烧的温度为300‑550℃，获得柚子皮瓤吸附剂，把香烟过滤嘴内的醋酸纤维填充在SPE玻璃管内，然后再添加柚子皮瓤吸附剂...

【技术特征摘要】
1.固相萃取-高效液相色谱-荧光法测定人体尿液中单胺类神经递质及其代谢物的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、样品的预处理：取新鲜人体尿液2ml，加200μl1mol/L的盐酸溶液将尿液进行酸化处理，随后加入2.0ml0.5mol/L的乙酸铵，混匀，超声5min后，以5000r/min离心10min，取上清液，经0.45μm滤膜过滤，滤液于4℃冰箱保存待用；S2、样品的制备：将柚子皮瓤烘干粉碎过300～500目筛，得到柚子皮瓤粉，然后柚子皮瓤粉在真空条件下焙烧0.6-1h，焙烧的温度为300-550℃，获得柚子皮瓤吸附剂，把香烟过滤嘴内的醋酸纤维填充在SPE玻璃管内，然后再添加柚子皮瓤吸附剂，加上垫片，获得自制固相萃取柱；依次用5ml甲醇、5ml水活化自制固相萃取柱，取上述处理过的尿样4ml上样，流速为1ml/min，依次用2ml20mmol/L乙酸铵-甲醇溶液、2ml甲醇淋洗杂质，超声2min后，最后用5ml含2％甲酸的乙腈水溶液(85∶15)洗脱被分析物，流速为1ml/min，所得洗脱液氮吹至近干，用初始流动相复溶至1.0ml，经0.22μm滤膜过滤后，供HPLC分析；S3、标准溶液的配制：准确称取EP、NE、DA、5-HT、VMA、HVA和5-HIAA标准品各20mg，分别置于10ml容量瓶中，0.01mol/L的盐酸溶液定容，充分震荡使其溶解，得浓度均为2000μg/ml的标准储备液，保存于4℃冰箱中；S4、标准曲线的绘制：准确吸取EP、NE、DA、5-HT、VMA、HVA和5-HIAA7种标准储备液用0.01mol/L的盐酸溶液稀释为EP30.0μg/ml、NE50.0μg/ml、DA50.0μg/ml、5-HT20.0μg/ml、VMA60.0μg/ml、HVA65.0μg/ml和5-HIAA70.0μg/ml的标准应用液，分别准确吸取标准应用液0.01、0.05、0.30、1.00、2.00ml、2.50ml和2.50ml于10ml容量瓶中，初始流动相定容，用HPLC分析，绘制标准曲线；S5、测定：取用S2获得的样品上样，进行HPLC分析，保留时间定性，峰...

【专利技术属性】
技术研发人员：王旭，邢燕，陈毓，吴淑春，赵小菁，徐敬敬，
申请(专利权)人：杭州医学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33