一种非酒精性脂肪肝的miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种非酒精性脂肪肝的miRNA标志物及其应用，可用于判断非酒精性脂肪肝。所述miRNA标志物选自：miRNA‑1911初始miRNA、miRNA‑1911前体miRNA以及成熟miRNA‑1911；所述miRNA‑1911初始miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA‑1911；所述miRNA‑1911前体miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA‑1911。本发明专利技术首次发现miRNA标志物miRNA‑1911可用于判断非酒精性脂肪肝的进程和严重程度。经检验证明，miRNA‑1911可有效区分非酒精性脂肪肝样本和正常样本。在此基础上，miRNA‑1911还可用于制备抑制非酒精性脂肪肝的药物。本发明专利技术为临床在分子水平上开发非酒精性脂肪肝病提供了新的方法，同时为非酒精性脂肪肝的治疗提供了新的药物靶点。

A miRNA marker for nonalcoholic fatty liver and its application

The present invention provides a miRNA marker for nonalcoholic fatty liver and its application, which can be used to judge nonalcoholic fatty liver. The miRNA markers selected from: miRNA 1911 miRNA, miRNA initial 1911 miRNA precursor and mature miRNA 1911; the miRNA 1911 initial miRNA was cut and expression of mature miRNA 1911 in human cells; the miRNA 1911 precursor miRNA was cut and expression of mature miRNA in 1911 the cells. The invention for the first time that miRNA markers can be used to determine the miRNA 1911 nonalcoholic fatty liver disease severity and process. The test result shows that miRNA can effectively distinguish 1911 nonalcoholic fatty liver samples and normal samples. On this basis, miRNA 1911 can also be used for preparing drugs for inhibiting nonalcoholic fatty liver disease. The invention provides a new method for the development of non-alcoholic fatty liver disease at the molecular level, and provides a new drug target for the treatment of non-alcoholic fatty liver disease.

【技术实现步骤摘要】
一种非酒精性脂肪肝的miRNA标志物及其应用
本专利技术属于医学检验
，尤其涉及一种非酒精性脂肪肝的miRNA标志物及其应用。
技术介绍
miRNA是天然存在于体内的21-22nt的非编码RNA分子，是一类通过转录后基因沉默对靶基因表达进行调节的RNA。据估计，生物体内约有1/3的基因受miRNA的调控。miRNA与RISC的复合体通过碱基配对可与靶基因mRNA5’-UTR或者3’-UTR中的互补序列相结合，抑制蛋白质翻译，或是引发mRNA降解，从而负调控靶基因的表达。非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholrelatedfattyliverdisease,NAFLD)是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相关肝硬化。随着肥胖及其相关代谢综合征全球化的流行趋势，非酒精性脂肪性肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因，普通成人NAFLD患病率10％～30％，其中10％～20％为非酒精性脂肪性肝炎，后者10年内肝硬化发生率高达25％。非酒精性脂肪性肝病除可直接导致失代偿期肝硬化、肝细胞癌和移植肝复发外，还可影响其他慢性肝病的进展，并参与2型糖尿病和动脉粥样硬化的发病。代谢综合征相关恶性肿瘤、动脉硬化性心脑血管疾病以及肝硬化为影响非酒精性脂肪性肝病患者生活质量和预期寿命的重要因素。为此，非酒精性脂肪性肝病是当代医学领域的新挑战，近期内非酒精性脂肪性肝病对人类健康的危害仍将不断增加。miRNA是调节基因表达的内源性非编码小分子RNA，在转录后水平对基因表达进行调控，参与细胞周期、凋亡、发育、分化和新陈代谢等生理过程。miRNA在细胞中表达失调会导致非酒精性脂肪肝在内的多种疾病的发生，最新研究表明，一些miRNA在非酒精性脂肪肝患者的血液中异常表达，但何种miRNA与非酒精性脂肪肝的发生、发展有关仍未达成共识。因此有必要寻找与非酒精性脂肪肝发生、发展有关的miRNA，从而为临床上判断和治疗非酒精性脂肪肝提供一种有效手段。
技术实现思路
针对现有技术中的上述问题，本专利技术的主要目的在于提供一种非酒精性脂肪肝的miRNA标志物及其应用，可用于判断非酒精性脂肪肝。为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种非酒精性脂肪肝的miRNA标志物，所述miRNA标志物选自：miRNA-1911初始miRNA、miRNA-1911前体miRNA以及成熟miRNA-1911；所述miRNA-1911初始miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA-1911；所述miRNA-1911前体miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA-1911。作为进一步的优选，所述miRNA标志物还包括：对miRNA-1911进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列。作为进一步的优选，所述成熟miRNA-1911包括miRNA-1911-5p、miRNA-1911-3p。本专利技术还提供了所述miRNA标志物在制备工具中的应用，所述工具用于预判非酒精性脂肪肝风险及诊断非酒精性脂肪肝。作为进一步的优选，所述工具选自芯片和试剂盒；所述芯片包括固相载体以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于miRNA-1911的部分或全部序列；所述试剂盒包括用于检测受试者血样中所述miRNA-1911的表达水平的试剂，所述试剂包括针对miRNA-1911的引物或探针。作为进一步的优选，所述应用方法包括：将受试者血样作为实验组，检测受试者血样中的miRNA-1911水平；将非酒精性脂肪肝的正常血样作为对照组，获得非酒精性脂肪肝的正常血样中的miRNA-1911水平；若所述实验组中的miRNA-1911水平低于对照组中的miRNA-1911水平，则判定受试者存在非酒精性脂肪肝的风险或者已经发生了非酒精性脂肪肝。本专利技术还提供了所述miRNA标志物在高通量测序平台中的应用。作为进一步的优选，所述应用方法包括：将受试者血样作为实验组，通过高通量测序获得受试者血样中的miRNA-1911水平；将非酒精性脂肪肝的正常血样作为对照组，获得非酒精性脂肪肝的正常血样中的miRNA-1911水平；若所述实验组中的miRNA-1911水平低于对照组中的miRNA-1911水平，则判定受试者存在非酒精性脂肪肝的风险或者已经发生了非酒精性脂肪肝。本专利技术还提供了所述miRNA标志物在制备抑制非酒精性脂肪肝的药物中的应用。作为进一步的优选，所述药物包含所述miRNA-1911激动剂。作为进一步的优选，所述miRNA-1911激动剂是所述miRNA-1911的寡核苷酸或所述miRNA-1911模拟物。本专利技术的有益效果是：本专利技术首次发现miRNA标志物miRNA-1911可用于判断非酒精性脂肪肝的进程和严重程度。经检验证明，miRNA-1911可有效区分非酒精性脂肪肝样本和正常样本。在此基础上，miRNA-1911还可用于制备抑制非酒精性脂肪肝的药物，以及用于预判非酒精性脂肪肝风险及诊断非酒精性脂肪肝的工具。本专利技术为临床在分子水平上开发非酒精性脂肪肝病提供了新的方法，同时为非酒精性脂肪肝的治疗提供了新的药物靶点。附图说明图1为本专利技术实施例miRNA-1911在非酒精性脂肪肝人群和正常人群的血清中的表达情况。图2为本专利技术实施例miRNA-1911在非酒精性脂肪肝大鼠模型的血清中的表达情况。图3a-3b为肝细胞系HepG2细胞加入油酸后的染色图。图4为本专利技术实施例miRNA-1911在加入油酸培养的肝细胞系HepG2中的表达情况。具体实施方式本专利技术通过提供一种非酒精性脂肪肝的miRNA标志物及其应用，找到了与非酒精性脂肪肝发生、发展有关的miRNA，从而为临床上判断和治疗非酒精性脂肪肝提供一种有效手段。为了解决上述问题，本专利技术实施例的主要思路是：本专利技术实施例非酒精性脂肪肝的miRNA标志物，所述miRNA标志物选自：miRNA-1911初始miRNA、miRNA-1911前体miRNA以及成熟miRNA-1911；所述miRNA-1911初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA-1911；所述miRNA-1911前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA-1911。应当知道，本专利技术实施例的miRNA-1911包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，其显示完整miRNA-1911核酸分子相同的功能，尽管它们通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入而突变。本领域人员熟知，为了保证miRNA的稳定性，可以在miRNA的一端或者两端增加保护性碱基，如TT，也可对miRNA碱基进行修饰，但是不影响miRNA的功能。因此，本领域技术人员熟知，在不影响miRNA-1911功能的条件下，对miRNA-1911进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列同样包含在本专利技术的保护范围之内。在本专利技术的一些具体的实施方式中，所述miRNA-1911是成熟miRNA-1911。所述成熟miRNA-1911包括miRNA-1911-5p、miRNA-1911-3p，它们享有共同的种子序列。虽然在某些具体实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非酒精性脂肪肝的miRNA标志物，其特征在于：所述miRNA标志物选自：miRNA‑1911初始miRNA、miRNA‑1911前体miRNA以及成熟miRNA‑1911；所述miRNA‑1911初始miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA‑1911；所述miRNA‑1911前体miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA‑1911。

【技术特征摘要】
1.一种非酒精性脂肪肝的miRNA标志物，其特征在于：所述miRNA标志物选自：miRNA-1911初始miRNA、miRNA-1911前体miRNA以及成熟miRNA-1911；所述miRNA-1911初始miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA-1911；所述miRNA-1911前体miRNA在人细胞内被剪切并表达为成熟miRNA-1911。2.根据权利要求1所述的非酒精性脂肪肝的miRNA标志物，其特征在于：所述miRNA标志物还包括：对miRNA-1911进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列。3.如权利要求1-2任一项所述的非酒精性脂肪肝的miRNA标志物在制备工具中的应用，其特征在于：所述工具用于预判非酒精性脂肪肝风险及诊断非酒精性脂肪肝。4.根据权利要求3所述的miRNA标志物在制备工具中的应用，其特征在于：所述工具选自芯片和试剂盒；所述芯片包括固相载体以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于miRNA-1911的部分或全部序列；所述试剂盒包括用于检测受试者血样中所述miRNA-1911的表达水平的试剂，所述试剂包括针对miRNA-1911的引物或探针。5.根据权利要求3所述的miRNA标志物在制备工具中的应用，其特征在于：所述应用方法包括：将受试者血样作为实验组，检测受试者血样中的miRNA-1...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡守奎，赵帆，朱晓雪，高乃姝，农金轻，吴蕾，袁平，赵长坡，薄天慧，
申请(专利权)人：北京大学首钢医院，
类型：发明
国别省市：北京,11