一种shRNA‑cluster序列及其表达载体和用途制造技术

本发明专利技术提供一种shRNA‑cluster序列，本发明专利技术还提供了一种表达载体，所述表达载体表达上述所述的shRNA‑cluster序列和CAR分子，本发明专利技术还提供了它们的用途。本发明专利技术通过miRNA‑cluster来源的序列特异性下调PD‑1，Tim‑3，Lag‑3三个受体的表达或下调PD‑1受体表达。本发明专利技术在利用CAR分子改造后的T细胞的同时抑制其表面多个抑制性受体的表达，从而增强其拮抗实体肿瘤微环境的抑制性，进而强有力地介导对肿瘤的杀伤，能更好的用于抗实体肿瘤免疫治疗。

A shRNA cluster sequence and its expression vector and application thereof

【技术实现步骤摘要】
一种shRNA-cluster序列及其表达载体和用途
本专利技术涉及一种shRNA-cluster序列及其表达载体和用途。
技术介绍
自CAR-T免疫技术在2011年针对CD19抗原的急性淋巴型白血病的临床试验取得成果并在2013年被Science杂志评选为当年十大科技突破之首开始，该技术获得的从科学界到金融界一致的好评。中国每年诊断的新发肿瘤患者超过300万人，多数肿瘤术后复发的概率超过50％，中位生存期不足5年，当前的传统治疗手段在面对大多数难治、复发的肿瘤时疗效捉襟见肘，研发可特异性浸润并有效拮抗实体肿瘤微环境进而介导对其的有效杀伤的CAR-T细胞具备重要的意义。相对于CAR-T细胞在血液型肿瘤取得的丰硕成果，CAR-T细胞在针对实体肿瘤的I期临床试验个体差异性极大，只有少量成功的案例，解决CAR-T对实体肿瘤的浸润与避免过早衰竭是攻克实体肿瘤细胞免疫疗法的关键。基于实体肿瘤的免疫疗法的发展，科学家研发了大量可特异性识别实体肿瘤表面抗原的单抗类药物，这些蛋白类药物为针对实体肿瘤的CAR-T免疫细胞疗法的研发提供了保障，例如用于治疗Her-2阳性结肠癌、卵巢癌的单抗类药物Tras本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种shRNA‑cluster序列，其特征在于，所述shRNA‑cluster序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或如SEQ ID NO:2所示。

【技术特征摘要】
1.一种shRNA-cluster序列，其特征在于，所述shRNA-cluster序列的核苷酸序列如SEQIDNO:1或如SEQIDNO:2所示。2.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体是将如SEQIDNO:1或如SEQIDNO:2所示的序列，以及CAR分子的编码序列连接到基础载体上而得的；所述表达载体表达如权利要求1所述的shRNA-cluster序列和CAR分子。3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述基础载体为慢病毒载体。4.一种改造的CAR-T细胞，其特征在于，所述T细胞是将如权利要求2或3所述的表达载体转入CD8+T细胞中而得的。5.一种如权利要求4所述的改造的CAR-T细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)收集外周血单个核细胞并分离富集其中的CD8+T细胞，采用anti-CD3、anti-CD28和IL-2激活所述CD8+T细胞；(2)CD8+T细胞激活48小时后，以1ml/1×106细胞的比例加入如权利要求3所述的慢病毒表达载体进行感染，同时加入聚凝胺溶液，离心后继续培养；8～12小时后，进行第二轮感染，得到改造的CAR-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张辉，邹帆，卢丽娟，
申请(专利权)人：广州千扬生物医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44