从单个样品中分离核酸和蛋白质的方法技术

本发明专利技术包括一种使用固体载体从同一样品中分离核酸和蛋白质的方法，其中该样品所含的核酸和蛋白质成分与不同的固体载体结合。本发明专利技术还涉及从同一样品中分离核酸和蛋白质的试剂盒，以及该分离核酸和蛋白质的方法在ｍＲＮＡ和／或蛋白质表达和／或其与基因组信息相关性的分析和／或对比中的应用。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分析单个样品中DNA、mRNA和蛋白质表达的一种方法。该方法有利于使关于mRNA和蛋白质表达的信息与基因组信息相关联。人类基因组现在已经或多或少地被绘制出来，发现基因数量大大低于原来的估计。这表明人类的复杂性并非在于基因数量，而是在于基因如何被利用，基因产物如何组合和修饰。因此，集中于研究基因产物及其相互作用变得更加重要。已知在单个细胞或细胞型中只有一部分基因转录，一种基因可能产生多种不同的蛋白质。这部分是由于阅读框的不同、翻译起始/终止密码子的不同和mRNA剪接的不同。还已知，mRNA与蛋白质的相对数量水平不总是一致或者很少一致。由于翻译后修饰，一种mRNA也能产生不同的蛋白质。因此，个体的基因组(所有基因的集合)可以被看作代表个体的遗传“可能性”，而转录组(transcriptome，由基因组转录的mRNA的集合)代表可能发生的。然而，蛋白质组(即由转录组翻译并经翻译后修饰的所有蛋白质的集合)代表现实，即实际发生的。因此，所有三个水平—DNA、RNA和蛋白质都可以从不同的方面给出有价值的信息。DNA或基因型给出关于遗传素质(pre-dispositions)和获得性突变/局部重排的重要信息。mRNA和蛋白质谱(profile)都产生生物状态/阶段或疾病的“分子肖像(portraits)”，也可以用来对疾病的发展和治疗进行分期和监视。与DNA不同，mRNA和蛋白质谱都是细胞生物学的“快照(snap shot)”，因为它们由于周围的环境不断改变。由于在转录、翻译和翻译后水平上起作用的调节机制，mRNA和蛋白质水平不总是相关。因此，研究来自同一样品的mRNA和蛋白质是非常重要的。如上所述，mRNA与蛋白质水平之间不一定是1∶1相关联。如果比较蛋白质水平和相应的mRNA水平，则对于mRNA与蛋白质之比不是1∶1的每种蛋白质，该蛋白质要进行某种形式的转录后和/或翻译后调节。在疾病过程中，特定基因的mRNA/蛋白质比常常改变。为了能够研究调节机制，并阐明mRNA/蛋白质比的这种改变的原因，从同一样品中分离mRNA和蛋白质是非常重要的。本专利技术提出了一种进行这种分离的新型、有利的方法。个体之间，例如在与“正常”患者相比具有疾病状态的个体中，蛋白质或mRNA水平的变化，通常是由于他们的基因(即DNA)或调节区中的单核苷酸多态性(SNPs)或其它形式的突变或遗传素质引起的。因此，最好能够从同一样品中分离DNA和蛋白质，优选地DNA、RNA和蛋白质，特别是DNA、mRNA和蛋白质，以便能够直接对比。本专利技术也提供了这样的方法。具体而言，现发现通过一种简单且易于实施的方法，能够以适于下游操作和分析的方式，从单个样品中分离核酸和蛋白质，特别是DNA、RNA和蛋白质。这种分离方法包括使来自同一样品的核酸和蛋白质，或优选地DNA、RNA和蛋白质，结合到不同的固体载体或不同的固体载体区域上，以便能够分别分析分离的成分。这些方法可以有利地与另一个起始步骤组合，该步骤包括在进行核酸和蛋白质分离之前从样品中特异地分离一种或多种具体细胞类型或群体(例如B细胞、T细胞、单核细胞)。具体而言，已经显示可以从单个样品中分离具有证实的高纯度的DNA(例如基因组DNA)、RNA(例如mRNA)和蛋白质。也可以从同一样品中相继分离不同的细胞群，然后对其中每一个进行DNA、RNA和蛋白质分离。本专利技术的一个方面是提供一种从同一样品中分离核酸和蛋白质的方法，该方法包括使该样品与固体载体接触，从而使该样品中的核酸和蛋白质成分与不同的固体载体结合。待分离的核酸可以是DNA、RNA或其自然存在的任何修饰形式，及其组合。因此，本专利技术的方法中可以分离样品的全部核酸成分。然而，在本专利技术的一个优选实施方案中，从同一样品中将DNA和/或RNA分别分离到不同的固体载体上。因此，在优选实施方案中，本专利技术提供了一种从同一样品中分离RNA和蛋白质或DNA和蛋白质的方法。在特别优选的实施方案中，本专利技术提供一种从同一样品中分离DNA、RNA和蛋白质的方法。在本专利技术的方法的实施方案和步骤中，如果要从样品中分离的核酸是DNA，优选该DNA是基因组DNA(gDNA)，可以是单链或双链或其它任何形式。在某些实施方案中，可以分离特定的DNA分子，例如含有编码特定蛋白质的基因。在本专利技术的方法的实施方案和步骤中，如果要从样品中分离的核酸是RNA，可以分离总RNA，或者可以分离RNA的一种具体形式或亚组。在本专利技术的优选实施方案中，从样品中分离mRNA。在某些实施方案中，可以分离特定的RNA分子，例如编码特定蛋白质的特定mRNA。在此处所述的本专利技术的方法中，可以顺序或同时进行将核酸和蛋白质分离到不同固体载体上的步骤，包括样品与这些固相接触。类似地，在希望作为单独成分分离蛋白质、DNA和RNA的实施方案中，这些分离可以在同一步骤中进行或者在分开的相继步骤中进行。如下文进一步描述的，在某些情况下，可能希望对同一样品的不同等份(或级分)(即对分开的或等分的样品)进行蛋白质和核酸(例如DNA和/或RNA)的分离。在这些情况下，分离可以在平行的步骤中进行，例如同时平行地进行。优选地，需要的分离在分开的相继步骤中进行，这些步骤可以以任何顺序依次进行。因此，尽管在本专利技术的优选实施方案中，第一步分离DNA，随后第二步分离RNA，第三步分离蛋白质，但是这些不同的成分可以以任何顺序分离。如此处所用的术语“不同的固相”包括在本专利技术的方法的不同步骤中使用不同的固体载体(即具有不同结合和表面性质的载体)(例如用相继步骤结合希望的核酸成分和蛋白质的实施方案)，在同一步骤中添加不同的载体(例如希望的核酸成分和蛋白质的分离在同一步骤中进行的实施方案)，以及使用在不同步骤中加入的具有相同表面性质的载体，其中由于不同的温育条件，特定的核酸或蛋白质成分能够结合。此外，在某些情况下，当置于不同条件下，例如不同温育条件、试剂、环境等时，一种特定的固体载体可以结合不同的成分(例如蛋白质和核酸，或细胞和蛋白质或核酸等)。这些差别也可用来使不同的成分结合同一固体载体，但是在不同的步骤中，例如在该程序的不同阶段结合，使得希望的成分可以分别分离。该术语也包括一种固体载体的不同区域，例如可以设计为具有不同的表面性质，使得特定的核酸和蛋白质成分与同一载体的不同区域或不同配体结合。如上所述，分析来自同一样品的核酸和蛋白质是本专利技术的一个重要方面。如此处所用的“同一样品”是指从单个(即未分开的)样品中分离适当的核酸和蛋白质成分。这样，本专利技术的方法不同于现有技术方法，后者可包括获得多个样品或类似的程序，例如，获得最初的一个样品，并且在开始时立即将其分成等份，例如获得一个样品，并将其分成等份，对这些等份分别进行DNA、RNA和蛋白质分析(每个等份分析一种)，并比较结果。因此，“未分开的样品”可以被看作在采样后或进行任何分离步骤之前，没有马上(例如立即或最初)分开的样品。因此，不排除随后样品的分开，但是开始时或者作为样品处理方法的第一步并不分开。如下文进一步描述的，在进行核酸和/或蛋白质分离程序之前，首先从样品中分离希望的特定细胞群体或亚群，或者实际上分离全部(或者几乎全部)细胞或希望的任何级分，和/或裂解样品中或任何分离的群体或级分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从同一样品中分离核酸和蛋白质的方法，该方法包括使该样品接触固体载体，其中该样品中所含的核酸和蛋白质成分与不同的固体载体结合。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M博斯尼斯，
申请(专利权)人：戴诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：NO[挪威]