类血小板蛋白微粒及利用类血小板蛋白微粒传递药物的方法技术

本揭示内容是关于诸如蛋白脂质体等蛋白微粒，其包含微粒(例如脂质体)及血小板膜蛋白，其中该蛋白微粒会与能移动到受伤位置的单核细胞、中性粒细胞或其它循环血细胞结合。本揭示内容也有关于蛋白脂质体的用途，其由单核细胞将治疗药剂传递到受伤位置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】类血小板蛋白微粒及利用类血小板蛋白微粒传递药物的方法相关申请的交叉引用本申请要求于2015年4月20日提交的专利技术名称为“类血小板蛋白微粒及利用类血小板蛋白微粒传递药物的方法”的美国临时申请号为62/149,849的申请日的权益，通过引用的方式将其内容作为一个整体并入本文。专利技术背景诸如癌症及缺血性心脏病等慢性疾病仍旧为许多国家主要死亡原因之一(Baueretal.,(2014),TheLancet384:45-52)。该些疾病的防治不仅占了各国年度卫生保护预算的大部分，而且成为受影响家庭经济及感情上的沉重负担。即使相关领域持续发展出用以治疗不同慢性疾病的新颖疗法及确认新潜力药物的靶点，但该些潜力疗法的治疗应用性仍受限。许多疗法至今面对的主要挑战之一即为靶点专一性：如何将治疗作用仅局限于靶点位置(Rajetal.,(2014),DrugDelivery2014:1-20)。过去数十年间，在确认及研发用以治疗缺血性心脏病(ischemicheartdisease,IHD)的新颖药物上已有持续性的进展。然而在许多国家，IHD仍为主要死亡原因之一(Goetal.,(2014),Circulation129:e28-e292)。目前已经确定的多数的治疗效用并非仅局限于靶点位置(VanderHeideetal.,(2013),CirculationRes113:464-477)。因此，如何成功地将一已经确定的治疗药剂传递至目标位置，仍为相关领域待克服的主要挑战之一。在缺血性心脏病发展过程中发生的一个关键事件是将循环的单核细胞招募到梗死区域(Liuetal.,(2011),ArteriosclerThrombVascBiol31:834-841；Sarmaetal.,(2002),Circulation105:2166-2171；Furmanetal.,(2001),JAmCollCardiol38:1002-1006)。一旦这些循环单核细胞穿透内皮细胞层，即会转变为巨噬细胞，进而通过发炎活性造成梗塞心脏更严重的损伤。即使已研发可靶向该些巨噬细胞的治疗方法，研究已经表明，该些治疗方法不仅会影响梗塞心脏区域的巨噬细胞，也会影响位于身体其它位置的巨噬细胞(Leyetal.,(2011),ArteriosclerThrombVascBiol31:1506-1516)。专利技术概述本揭示内容是基于包含脂质体及血小板膜蛋白的蛋白脂质体的设计。该蛋白脂质体会与单核细胞等循环血细胞结合，而不会结合至内皮细胞。如此一来，该蛋白脂质体可用以传递包覆于其中的治疗药剂，其通过结合至能移动到受伤位置(例如心脏梗塞区域)的单核细胞来达到传递药剂的目的。一旦单核细胞转变为巨噬细胞，巨噬细胞会经由胞饮作用(endocytosis)吸收该蛋白脂质体，从而将治疗药剂传递至单核细胞聚集的位置(例如梗塞区域)。或者是，在蛋白脂质体进行胞饮作用前，即会将治疗药剂释放于单核细胞或巨噬细胞聚集的疾病位置。因此，本揭示内容提供了一种蛋白微粒，例如包含一微粒(例如一脂质体)及一种或多种血小板膜蛋白的蛋白脂质体，其中该蛋白脂质体可结合至能移动(不论被动或主动)到受伤位置的单核细胞(monocyte)、中性粒细胞(neutrophil)或其它循环性细胞。在某些实施方式中，该蛋白微粒包覆一治疗药剂，例如一心脏保护药剂，举例来说，一抗炎药剂(anti-inflammatoryagent)、一抗凋亡药剂(anti-apoptoticagent)、一抗纤维化药剂(anti-fibroticagent)、一免疫调节药剂(immuno-modulatoryagent)或一促血管新生药剂(proangiogenicagent)。在某些实施方式中，该脂质体包含一磷脂及胆固醇。在上述任一种蛋白微粒(例如蛋白脂质体)中，该一种或多种血小板膜蛋白可包含一由血小板膜分离的蛋白混合物。在某些实施方式中，血小板是静息(resting)血小板或部分活化的血小板。如本文所用，部分活化的血小板是指会表达早期活化标记物(例如CD62P)且不会表达完全活化标记物(例如CD40L及CD18)的血小板。在某些实施方式中，本揭示内容所述的蛋白粒子(例如蛋白脂质体)几乎不包含血小板膜的脂质成分。或者或此外，任一种本揭示内容所述的蛋白微粒(例如蛋白脂质体)不会结合至内皮细胞。在另一方面，本揭示内容提供了一种用以将一治疗药剂传递至一个体的方法，该方法包含对该个体施用任一种本揭示内容所述的蛋白微粒(例如任一种蛋白脂质体)，其中该蛋白微粒包覆所述的治疗药剂。在另一方面中，本揭示内容提供了一种用以治疗一缺血性心脏病的方法，该方法包含对一有需要的个体施用一有效量的任一种本揭示内容所述的蛋白微粒(例如蛋白脂质体)，其中该蛋白微粒包覆一用以治疗缺血性心脏病(ischemicheartdisease,IHD)的治疗药剂。在某些实施方式中，该抗IHD的药剂是一抗炎药剂。本揭示内容的范畴还包含(a)一用以将一治疗药剂传递至一靶点位置(例如一受伤位置)或用以治疗IHD的药物组合物，该药物组合物包含任一种本揭示内容所述的蛋白微粒(例如蛋白脂质体)，其中该蛋白微粒包覆一诸如抗IHD药剂(例如抗炎药剂)的治疗药剂及一药学上可接受的载体；以及(b)本揭示内容所述的蛋白脂质体的用途，其用以制备一可将治疗药剂传递到靶点位置的药物，或用以制备一可治疗IHD的药物。此外，本揭示内容提供了一种用以传递药物的试剂盒，其包含任一种本揭示内容所述的蛋白微粒及一种本揭示内容所述的那些治疗药剂。该治疗药剂是包覆于该蛋白微粒中。在下面的描述中阐述了本专利技术的一个或多个实施方式的细节。本专利技术的其他特征或优点将从以下附图、若干实施方式的详细描述以及所附权利要求中显而易见的获得。附图说明图第1A-1G是关于纯化人类PMP及制备PLP。图1A为制备PLP的示意图，其包含利用薄膜水合作用方法(thin-filmhydrationmethod)将纯化的人类血小板膜蛋白(plateletmembraneprotein,PMP)与基于DOPC的脂质体接合。图第1B为整体策略的示意图。在心肌梗塞的进展中，血小板会附着于聚集的单核细胞表面(详见1)。因此，血小板-单核细胞聚集物会外渗(详见2)。因此，类血小板蛋白脂质体(platelet-likeproteoliposome,PLP)会以类似于血小板的作用模式与单核细胞进行反应(详见3)。一旦穿过内皮细胞，源自单核细胞的巨噬细胞即会吞噬(phagocytosis)PLP(详见4)。图1C是经数次超速离心步骤后，由新鲜分离的人类血小板所纯化的PMP。图1D为SDS-PAGE照片，用来检测证明膜蛋白的纯度。黑框指出在最终纯化的膜蛋白溶液中不会观测到β-肌动蛋白(β-actin，黑框位置)。白框指出由最终膜蛋白溶液得到的蛋白带(band)。图1E为利用蛋白免疫印迹分析所检测的某些血小板膜蛋白照片。图1F包含纯脂质体(plainliposome，即没有与PMP结合)及PLP的冷冻电子显微(cryo-EM)照片；比例尺为100微米。图1G为显示在各指定样本中是否存在GPIIb及CD42c的照片。以超速离心将每毫升10毫克的PLP浓缩至每本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白微粒，其特征在于，包含微粒及一种或多种血小板膜蛋白，其中所述蛋白微粒可结合至能移动到受伤位置的循环血细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.20 US 62/149,8491.一种蛋白微粒，其特征在于，包含微粒及一种或多种血小板膜蛋白，其中所述蛋白微粒可结合至能移动到受伤位置的循环血细胞。2.如权利要求1所述的蛋白微粒，其特征在于，所述循环血细胞是中性粒细胞(neutrophil)或单核细胞(monocyte)。3.如权利要求1或2所述蛋白微粒，其特征在于，所述蛋白微粒是一种包含脂质体的蛋白脂质体。4.如权利要求1-3任一所述的蛋白微粒，其特征在于，其包覆一种治疗药剂。5.如权利要求1-4任一所述的蛋白微粒，其特征在于，所述蛋白微粒是一种包含脂质体的蛋白脂质体，其中所述脂质体包含磷脂及胆固醇。6.如权利要求1-5任一所述的蛋白微粒，其特征在于，所述一种或多种血小板膜蛋白包含由血小板膜所分离的蛋白混合物。7.如权利要求6所述的蛋白微粒，其特征在于，所述血小板是静息或部分活化的血小板。8.如权利要求1-7任一所述的蛋白微粒，其特征在于，所述蛋白脂质体几乎不包含血小板膜的脂质成分。9.如权利要求1-8任一所述的蛋白微粒，其特征在于，所述蛋白微粒不会结合至...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·C·H·谢，B·程，
申请(专利权)人：中央研究院，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71