一种快速准确检测单增李斯特菌培养基及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种快速准确检测单增李斯特菌培养基及检测方法，公开了培养基的成分如下：大豆卵磷脂、琼脂、胰酪胨、葡萄糖、大豆蛋白胨、磷酸氢二钾、酵母粉、牛心粉、氯化钠、氯化锂、活性炭粉、蒸馏水；把上述成分按方法制备培养基，然后选取样品先进行LB1前增菌、李斯特菌液增菌，然后接种本发明专利技术制备的培养基，培养完成，挑取产生沉淀环的菌落，按国标GB4789.30‑2016进行纯化和鉴定细菌。本发明专利技术的主要优点在于：检测单增李斯特菌出现沉淀环时间早，缩短检测时间。在检出率、特异性和假阳性率方面和国标相当，能有效检测单增李斯特菌。本发明专利技术的检测方法周期比国家标准大为缩短，方法之间无显著性差异。

Rapid and accurate detection of the culture medium and detection method of mono Lester bacteria

The invention discloses a method for rapid detection of Listeria Lester bacteria culture medium and detection method, discloses the composition of the culture are as follows: soybean lecithin, agar, tryptone, glucose, soy peptone, two yeast powder, potassium hydrogen phosphate, niuxin powder, sodium chloride, lithium chloride, activated carbon powder, distillation water; the composition in the preparation method of culture medium, and then select the samples of the first LB1 Preenrichment, Lester broth enriching, then medium, the prepared inoculum were completed, precipitate ring colony, purification and identification of bacteria according to GB GB4789.30 2016. The main advantage of the invention is that the detection period of the precipitation ring is early and the detection time is shortened in the detection of mono - increasing Lester bacteria. The detection rate, specificity and false positive rate are equivalent to the national standard, which can effectively detect monocycule monocytogenes. The detection method of the invention is shorter than the national standard, and there is no significant difference between the methods.

【技术实现步骤摘要】
一种快速准确检测单增李斯特菌培养基及检测方法
本专利技术涉及细菌检测
，尤其涉及单增李斯特菌的鉴别培养基与检测技术。
技术介绍
现行单增李斯特菌检测的国家标准及国际标准流程为LB1前增菌24小时，LB2后增菌24小时，划线显色培养基分离出可疑菌落再进行生化鉴定，一般需要4-7天。显色培养基分离鉴别原理是：依据待测菌有无β-D-glucosidase葡萄糖苷酶的产生而区分是否李斯特菌属，再依据lecithinase磷脂酶的有无而区分单增李斯特菌和英诺克李斯特菌、威氏李斯特菌、斯氏李斯特菌及格氏李斯特菌(伊氏李斯特菌能产磷脂酶，但其在食品中罕见)。文献表明，许多其它菌属的菌种能在该类显色培养基上生长，产生β-D-glucosidase葡萄糖苷酶阳性样菌落，难以与李斯特菌属区分，达不到鉴别的效果；而且，李斯特菌显色培养基价格昂贵，导致检测成本高；单增李斯特菌在显色培养基上产磷脂酶速度慢，出现沉淀环的时间一般需要24小时以上甚至需要48小时，所以检测周期比较长。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速准确检测单增李斯特菌培养基及检测方法，以解决现有技术对单增李斯特菌检测的培养基成本昂贵，鉴别效果不佳，检测周期长的问题。为了达到上述目的本专利技术采用如下技术方案：一种快速准确检测单增李斯特菌活性炭鉴别培养基，包括如下成分：大豆卵磷脂、琼脂、胰酪胨、葡萄糖、大豆蛋白胨、磷酸氢二钾、酵母粉、牛心粉、氯化钠、氯化锂、活性炭粉、蒸馏水。进一步地，每1000mL培养基中包含的组分为：大豆卵磷脂1.5-3.5g、琼脂15g、胰酪胨10g、葡萄糖1g、大豆蛋白胨4g、磷酸氢二钾2g、酵母粉6g、牛心粉2g、氯化钠5g、氯化锂1g、活性炭粉3-8g、蒸馏水1000mL。进一步地，每1000mL培养基中包含活性炭粉5g。进一步地，每1000mL培养基中包含大豆卵磷脂2.5g。一种快速准确检测单增李斯特菌活性炭鉴别培养基的制备方法，包括如下步骤：(1)先将大豆卵磷脂1.5-3.5g加入50mL蒸馏水中灭菌待用；(2)将琼脂15g、胰酪胨10g、葡萄糖1g、大豆蛋白胨4g、磷酸氢二钾2g、酵母粉6g、牛心粉2g、氯化钠5g、氯化锂1g、活性炭粉3-8g溶于950mL蒸馏水中；(3)把步骤(2)制得的成分于121℃15min高压灭菌后调节pH至7.3；(4)待冷至45℃，无菌操作加入步骤(1)制得的50mL大豆卵磷脂溶液，混匀，倾注平板。一种快速准确检测单增李斯特菌的检测方法，包括如下步骤：把样品用LB1前增菌液培养24小时后，取LB1前增菌液1mL加入李斯特菌培养液9mL中，置于BacTrac4300阻抗仪进行36℃±1℃，4～24h的实时培养监测，一旦出现电导率超过阈值5的情况即划线分离于单增李斯特菌活性炭鉴别培养基或者如增菌24h未超过阈值则划线分离于单增李斯特菌活性炭鉴别培养基，然后进行36℃±1℃，24h培养，培养基上出现沉淀环的菌落即是可疑菌落，挑取可疑菌落进行纯化和鉴定。本专利技术的优点在于：LB1前增菌液和李斯特菌培养液对李斯特菌属进行选择性增菌；琼脂、胰酪胨、大豆蛋白胨、酵母粉、牛心粉、葡萄糖提供细菌生长的营养条件；氯化钠、磷酸氢二钾维持细菌生长的渗透压和酸碱度；氯化锂抑制杂菌生长；活性炭粉促进单增李斯特菌分泌卵磷脂酶；卵磷脂检测是否存在卵磷脂酶；阳性样品在李斯特菌培养液中于阻抗仪培养时，一般在6-8小时出现电导率超过阈值5，采用本专利技术的培养基配合阻抗法检测可缩短检测周期。附图说明此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本专利技术的不当限定，在附图中：图1是本专利技术实施例一实验图片；图2是本专利技术实施例二实验图片；图3是本专利技术实施例二实验图片；图4是本专利技术实施例二实验图片；图5是本专利技术实施例五实验图片；图6是本专利技术实施例六实验图片；图7是本专利技术实施例七实验图片；图8是本专利技术实施例八实验图片；图9是本专利技术实施例九实验图片；图10是本专利技术实施例十实验图片；图11是本专利技术实施例十一实验图片。具体实施方式下面将结合具体实施例来详细说明本专利技术，在此以本专利技术的示意性实施例及说明用来解释本专利技术，但并不作为对本专利技术的限定。一、各实施例实施例一1.1培养基的制备每1000mL培养基成分包括：大豆卵磷脂2.5g、琼脂15g、胰酪胨10g、葡萄糖1g、大豆蛋白胨4g、磷酸氢二钾2g、酵母粉6g、牛心粉2g、氯化钠5g、氯化锂1g、活性炭粉2.5g。琼脂、胰酪胨、大豆蛋白胨、酵母粉、牛心粉、LB1前增菌液均为北京陆桥技术股份有限公司生产，氯化钠来自天津鼎盛鑫化工有限公司，大豆卵磷脂来自广东环凯微生物科技有限公司，氯化锂来自天津风船化学试剂科技有限公司，活性炭来自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，葡萄糖、磷酸氢二钾来自广州化学试剂厂，李斯特菌培养液来自SY-LAB公司。培养基配制步骤：(1)先将大豆卵磷脂2.5g加入50mL蒸馏水中灭菌待用；(2)将琼脂15g、胰酪胨10g、葡萄糖1g、大豆蛋白胨4g、磷酸氢二钾2g、酵母粉6g、牛心粉2g、氯化钠5g、氯化锂1g、活性炭粉2.5g溶于950mL蒸馏水中；(3)把步骤(2)制得的成分于121℃15min高压灭菌后调节pH至7.3；(4)待冷至45℃，无菌操作加入步骤(1)制得的50mL大豆卵磷脂溶液，混匀，倾注平板，待用。1.2单增李斯特菌检测方法包括如下步骤：A.增菌以无菌操作取阳性样品25g(mL)加入到含有225mLLB1前增菌液的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min-2min；或放入盛有225mLLB1前增菌液的均质杯中，以8000r/min-10000r/min均质1min-2min。于30℃±1℃培养24h，取LB1前增菌液1mL加入SY-LAB公司的李斯特菌培养液9mL中，置于BacTrac4300阻抗仪(36℃±1℃，4～24h)进行实时培养监测；B.一旦出现电导率超过阈值5即划线分离于上述的单增李斯特菌活性炭鉴别培养基或者如增菌24h未超过阈值则划线分离于上述的单增李斯特菌活性炭鉴别培养基，然后36℃±1℃，24h培养。如图1所示，单增李斯特菌在本实施例的培养基上不能产生沉淀环或者沉淀环不明显。纯化和鉴定步骤参照GB4789.30-2016，此处不赘述。实施例二2.1培养基的制备每1000mL培养基成分包括：大豆卵磷脂2.5g、琼脂15g、胰酪胨10g、葡萄糖1g、大豆蛋白胨4g、磷酸氢二钾2g、酵母粉6g、牛心粉2g、氯化钠5g、氯化锂1g、活性炭粉3g。材料来源同实施例一。培养基配制步骤：(1)先将大豆卵磷脂2.5g加入50mL蒸馏水中灭菌待用；(2)将琼脂15g、胰酪胨10g、葡萄糖1g、大豆蛋白胨4g、磷酸氢二钾2g、酵母粉6g、牛心粉2g、氯化钠5g、氯化锂1g、活性炭粉3g溶于950mL蒸馏水中；(3)把步骤(2)制得的成分于121℃15min高压灭菌后调节pH至7.3，(4)待冷至45℃，无菌操作加入步骤(1)制得的50mL大豆卵磷脂溶液，混匀，倾注平板，待用。2.2单增李斯特菌检测方法参照实施例一。纯化和鉴定步骤参照GB4789.30-2016，此处不赘述。单增李斯特菌在本实施例培养基上能产生沉淀环。实施例三3.1培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速准确检测单增李斯特菌活性炭鉴别培养基，其特征在于：包括如下成分：大豆卵磷脂、琼脂、胰酪胨、葡萄糖、大豆蛋白胨、磷酸氢二钾、酵母粉、牛心粉、氯化钠、氯化锂、活性炭粉、蒸馏水。

【技术特征摘要】
1.一种快速准确检测单增李斯特菌活性炭鉴别培养基，其特征在于：包括如下成分：大豆卵磷脂、琼脂、胰酪胨、葡萄糖、大豆蛋白胨、磷酸氢二钾、酵母粉、牛心粉、氯化钠、氯化锂、活性炭粉、蒸馏水。2.根据权利要求1所述的一种快速准确检测单增李斯特菌活性炭鉴别培养基，其特征在于：每1000mL培养基中包含的组分为：大豆卵磷脂1.5-3.5g、琼脂15g、胰酪胨10g、葡萄糖1g、大豆蛋白胨4g、磷酸氢二钾2g、酵母粉6g、牛心粉2g、氯化钠5g、氯化锂1g、活性炭粉3-8g、蒸馏水1000mL。3.根据权利要求1-2任一所述的一种快速准确检测单增李斯特菌活性炭鉴别培养基，其特征在于：每1000mL培养基中包含活性炭粉5g。4.根据权利要求1-2任一所述的一种快速准确检测单增李斯特菌活性炭鉴别培养基，其特征在于：每1000mL培养基中包含大豆卵磷脂2.5g。5.一种如权利要求4所述的快速准确检测单增李斯特菌活性炭鉴别培养基的制备方法，其特征在于：包括如下步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：李太存，周清芳，许纯，刘二龙，王乔笙，
申请(专利权)人：番禺出入境检验检疫局综合技术服务中心，
类型：发明
国别省市：广东,44