一种提高多杀霉素产量的发酵方法技术

本发明专利技术属于发酵技术领域，具体涉及一种提高多杀霉素产量的发酵方法，包括使用添加淀粉酶的发酵培养基。具体地，所述发酵培养基中淀粉酶的浓度为0.1‑1g/L；所述淀粉酶包括α‑耐高温淀粉酶。本发明专利技术通过在发酵培养基中添加淀粉酶可以显著提高多杀霉素产量。本发明专利技术方法简便易行，发酵培养基中将添加适量淀粉酶，多杀霉素发酵水平的提高可达约30％。

A fermentation method to increase the yield of mycophenolate

The invention belongs to the field of fermentation technology, in particular to a fermentation method for improving the production of mycophencin, including the use of a fermentation medium adding amylase. Specifically, the concentration of amylase in the culture medium for fermentation of 0.1 1g/L; the thermostable amylase including alpha amylase. The invention can significantly increase the yield of mycophenin by adding amylase in the fermentation medium. The method of the invention is simple and convenient, a proper amount of amylase will be added in the fermentation medium, and the improvement of fermentation level of mycophencin can be up to about 30%.

【技术实现步骤摘要】
一种提高多杀霉素产量的发酵方法
本专利技术属于发酵
，具体涉及一种提高多杀霉素产量的发酵方法。
技术介绍
多杀霉素，又名多杀菌素(Spinosad)或刺糖菌素、赤糖菌素，是刺糖多孢菌有氧发酵产生的次级代谢产物，属于大环内酯类化合物。多杀霉素具有很好的杀虫活性，对鳞翅目和缨翅目害虫有较广的杀虫谱，对双翅目、鞘翅目和膜翅目中某些大量吞食叶片的害虫种类有很好的防治作用。多杀霉素具有见效快、无副作用、选择性高、对天敌安全、半衰期短、易降解、不易产生药物抗性等优点，是理想的高效低毒绿色农药，是治理抗性害虫的首选替代农药新品种。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种提高多杀霉素产量的发酵方法，以解决现有技术发酵生产多杀霉素产量不高的技术问题。为实现上述目的，本专利技术一种提高多杀霉素产量的发酵方法，包括使用添加淀粉酶的发酵培养基。若无特殊指明，本专利技术所述发酵均为液体发酵。优选地，所述发酵培养基中淀粉酶的浓度为0.01-1g/L，进一步优选为0.5g/L。优选地，所述淀粉酶包括α-淀粉酶。进一步优选地，所述淀粉酶为α-耐高温淀粉酶。本专利技术所述α-耐高温淀粉酶最适作用温度为90-110℃。优选地，所述α-淀粉酶或α-耐高温淀粉酶的活为10000u/g-15000u/g，进一步优选为12000u/g。本专利技术所述酶活与本领域常规定义相同。例如，α-耐高温淀粉酶的酶活力定义：1mL酶液在70℃，pH6.0条件下，1分钟液化可溶性淀粉的毫克数。本专利技术所述淀粉酶可通过市售购得，例如α-耐高温淀粉酶购自江苏锐阳生物科技有限公司。本专利技术方法可用刺糖多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)进行发酵。所述刺糖多孢菌可用本领域市售可得的常规菌种。优选地，所述刺糖多孢菌为刺糖多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)Z68，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏日期2009年11月25日，保藏编号CGMCCNo.3460。该菌种已在中国专利CN102337219A中公开。优选地，所述发酵培养基包括如下组分：可溶性淀粉30-60g/L、葡萄糖20-35g/L、黄豆饼粉5-20g/L、棉籽饼粉5-20g/L、酵母浸粉1-10g/L、玉米浆15-25g/L、碳酸钙2-10g/L、豆油2-10g/L、淀粉酶0.01-1g/L；灭菌前pH为6.9-7.2；进一步优选地，所述发酵培养基包括如下组分：可溶性淀粉40g/L、葡萄糖30g/L、黄豆饼粉10g/L、棉籽饼粉10g/L、酵母浸粉5g/L、玉米浆20g/L、碳酸钙5g/L、豆油5g/L、淀粉酶0.5g/L；灭菌前发酵培养基pH为7.0。优选地，所述发酵温度为27-30℃，进一步优选为28℃。优选地，所述发酵过程转速为200-220rpm，进一步优选为200rpm。优选地，所述发酵过程环境湿度为40％-60％，优选为55％。优选地，所述发酵时间为192-216h，进一步优选为200h。具体地，所述发酵方法包括：将种子培养液按10％(v/v)的接种量接种于发酵培养基中，在28℃，环境湿度为55％，转速200rpm，旋转半径50mm的条件下，发酵培养200h，得到发酵液。具体地，本专利技术提高多杀霉素产量的发酵方法包括以下步骤：1)斜面培养将刺糖多孢菌在无菌条件下接种于固体斜面培养基上，于28℃培养10-12天；2)种子培养将步骤1)制得的斜面菌种无菌条件下转接入灭菌的种子培养基中，在28℃，环境相对湿度为55％，转速200rpm，旋转半径50mm的条件下，振荡培养50-60h，得到种子培养液；3)发酵培养将步骤2)制得的种子培养液按10％(v/v)的接种量接种于发酵培养基中，在28℃，环境的湿度为55％，转速200rpm，旋转半径50mm的条件下，发酵培养200h，得到发酵液。优选地，所用种子培养基包括如下组分：糊精15-25g/L、葡萄糖8-15g/L、玉米浆5-10g/L、豆粕粉1-5g/L、硫酸镁1-5g/L；灭菌前pH值为6.8-7.2；进一步优选地，所述种子培养基包括如下组分：糊精20g/L、葡萄糖10g/L、玉米浆6g/L、豆粕粉3g/L、硫酸镁2g/L；灭菌前种子培养基的pH值为7.0。如无特殊说明，本专利技术所述发酵培养基、种子培养基均以水配制。本专利技术所述发酵培养基、种子培养基一般可于121℃，灭菌30min。其中，种子培养方法包括：挖取斜面菌苔约1cm2，将其转接入盛有30mL灭菌的种子培养基的种子瓶中，在28℃，环境相对湿度为55％，转速200rpm，旋转半径50mm的条件下，振荡培养60h，得到种子培养液。其中，发酵培养过程种子培养液的接种量为5-20％(v/v)，优选为10％(v/v)。为更好地提高多杀霉素的产量，可以在步骤2)种子培养基中添加适量的淀粉酶；所述种子培养基中淀粉酶的浓度为0.01-1g/L，进一步优选为0.5g/L。所述淀粉酶的含义与上述发酵培养基中淀粉酶含义相同。本专利技术所述发酵培养基、种子培养基中的淀粉酶均可在所述培养基灭菌后添加，添加时培养基的温度不超过使所述淀粉酶失活的温度。可以将淀粉酶或淀粉酶溶液无菌处理(非高热灭菌)后添加到所述发酵培养基、种子培养基中。所述无菌处理包括本领域常规方法，例如过滤除菌、辐照灭菌等。本专利技术所述淀粉酶也可在培养基配制过程中与其他成分一同添加，再进行灭菌处理本专利技术研究发现，通过在发酵培养基中添加淀粉酶可以显著提高多杀霉素产量。本专利技术方法简便易行，发酵培养基中将添加适量淀粉酶，多杀霉素发酵水平的提高可达约30％。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。以下所用α-耐高温淀粉酶，酶活为12000u/g，最适作用温度为90-110℃，由江苏锐阳生物科技有限公司提供。所用蛋白酶的酶活为50000u/g，由河南金诚生物科技有限公司提供。所用纤维素酶的酶活为50000u/g，由河南金诚生物科技有限公司提供。以下所用刺糖多孢菌为(Saccharopolysporaspinosa)Z68，保藏编号CGMCCNo.3460。以下发酵液中多杀霉素含量的检测方法包括如下步骤：1)取发酵液1ml，加入9ml甲醇溶液，摇匀；2)超声波震荡20min，静止10min，使固液分层；3)取上层有机相，以0.45um孔径有机滤膜进行过滤；4)过滤后有机相作为供试液通过高效液相色谱仪进行效价检测；5)高效液相色谱条件：150×4.6mm(id)，5μm，不锈钢C18反相色谱柱；柱温35℃，流速1.0mL/min，以甲醇∶乙腈∶水(体积比为45∶50∶5)为流动相进行分离，进样量20μL，利用紫外检测器在246nm波长下进行检测。实施例1一种提高多杀霉素产量的发酵方法，包括以下步骤：1)斜面培养将刺糖多孢菌在无菌条件下接种于固体斜面培养基上，于28℃培养10-12天。其中，所述固体斜面培养基包括如下组分：玉米淀粉25g/L、玉米浆20g/L、酵母本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高多杀霉素产量的发酵方法，其特征在于，包括使用添加淀粉酶的发酵培养基。

【技术特征摘要】
1.一种提高多杀霉素产量的发酵方法，其特征在于，包括使用添加淀粉酶的发酵培养基。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基中淀粉酶的浓度为0.01-1g/L，进一步优选为0.5g/L。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述淀粉酶包括α-淀粉酶；优选地，所述淀粉酶为α-耐高温淀粉酶；进一步优选地，所述α-耐高温淀粉酶最适作用温度为90-110℃。4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述淀粉酶酶活为10000u/g-15000u/g，优选为12000u/g。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，用于发酵生产多杀霉素的菌种为刺糖多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)，优选为刺糖多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)Z68，保藏编号CGMCCNo.3460。6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括如下组分：可溶性淀粉30-60g/L、葡萄糖20-35g/L、黄豆饼粉5-20g/L、棉籽饼粉5-20g/L、酵母浸粉1-10g/L、玉米浆15-25g/L、碳酸钙2-10g/L、豆油2-10g/L、淀粉酶0.01-1g/L；灭菌前pH为6.9-7.2；优选地，所述发酵培养基包括如下组分：可溶性淀粉40g/L、葡萄糖30g/L、黄豆饼粉10g/L、棉籽饼粉10g/L、酵母浸粉5g/L、玉米...

【专利技术属性】
技术研发人员：周贤龙，石怀月，刘静，
申请(专利权)人：牡丹江佰佳信生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23