一种鼠的单克隆抗体，它与暴露在红细胞膜上的血型糖蛋白Ａ的决定簇位点或特异抗原决定簇选样性地结合而不与其它血型糖蛋白结合．将这种单克隆抗体包覆在一个微球体或一个合适的单分散种类的基质上并在无红细胞溶解时回收白细胞亚型的分离程序中利用这种单克隆抗体．在样品的白细胞群体不相反减少时回收被结合的微环体．所用的微球体或珠粒与细胞之比使本发明专利技术非常适用于商业．因此本发明专利技术使得不需红细胞溶解就能精确检测循环外周血中的白细胞亚型．（*该技术在2006年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于一种鼠的单克隆抗体，这种抗体特别适用于检测无红细胞溶解的循环外周血中的白细胞亚型。其次，本专利技术的目的在于提供一套改进的检测方法，即利用被该单克隆抗体包裹的适宜单分散微球体来回收人血样品中的白细胞。用对细胞或组织的抗原决定族具有特异性的单克隆抗体包被支持物或微球体，通常将这些支持物或微球体用于检测和诊断。这些都在先有技术中记载了。为了将所选的细胞群体分类并使之与异源细胞群体分开，磁性粒子或微球体的使用也是众所周知的。Senyei等人的专利4，230，685，Graver的专利3，970，518，4，018，886和4，115，535，Davis的专利4，177，253，Molday的专利4，452，773，Gerlinski的专利4，454，234和Rernbaum的专利4，267，234都仅为这种技术的一些例子。Smilh等人的4，272，510和Forrest等人的4，141，687讲授过用磁性粒子达到检测目的的仪器。在挪威，奥斯陆的Sintef根据专利合作条约(PCT)提交的公开国际专利申请中也描述了磁性微球体对细胞分离的应用，其PCT申请号为83/00014，1983年4月22日提交，国际公布号为WO83/03920，1983年11月10日公布及PCT申请号为83/00016，1983年4月27日提交，国际公布号为WO84/02031，1984年5月24日公布。然而，申请人不知道单克隆抗体可成功而精确地用于从人的外周血样中分离白血细胞亚型。人的循环血是由细胞和液体成分所组成的。细胞成分包括红细胞(红血细胞)、血小板和白细胞(白血细胞)1毫升正常全血样品中含有5×106红细胞，3×105血小板和5×103白细胞。白血细胞群体又分为5个亚型或群体，称为中性白细胞，嗜曙红细胞，嗜碱细胞，单核白细胞和淋巴细胞。在白血细胞数为5×103的人血样品中，每毫升血含有3，075个中性白细胞，150个嗜曙红细胞，25个嗜碱细胞，250个单核白细胞和1500个淋巴细胞。淋巴细胞由8种不同的类型组成，表明有几种功能的种类存在。已知大多数控制人体内抗体产生并为抗体的产生作准备的细胞都是在称为淋巴细胞的白细胞群体中发现的。此外，经鉴定淋巴细胞亚型的数目很多。容易看出对血样中白细胞群体的透彻分析是一个有用的诊断工具。获得这样的资料的常规方法包括自动化电子白血细胞分类仪，机械，电子和光散射细胞计数技术。这种昂贵仪器的使用在经济上受到一定的限制。此外，在无特异的单克隆抗体和特殊技术的情况下，不能用这样的方法来确定白细胞亚型。这也适用于荧光型技术的应用。某些先有技术也需要红血细胞的初溶。还已知红血细胞(红细胞)缺少多数细胞器，而只有一个单层膜，即原生质膜。几乎所有细胞质成分都能通过渗透溶血作用释放出来，从而提供“血影细胞”，这种血影细胞是相当纯的原生质膜。通过已知的染色技术确定红血细胞膜含有几种富含碳水化合物的蛋白。此外，已确定这些蛋白是细胞表面蛋白。红细胞含有一种跨膜蛋白，经鉴定是血型糖蛋白A，这个蛋白由16个寡糖和一条单肽组成。大约60%的糖蛋白主体是碳水化合物并且这些碳水化合物单位都位于细胞膜的外表面。由于血型糖蛋白A富含碳水化合物，因而使得它能够很好地着色。蛋白水解的化学修饰和电镜研究表明血型糖蛋白A具有(1)一个含有所有碳水化合物的氨基末端区，该区位于膜的外表面，(2)一个埋藏在烃中心的疏水中区和(3)一个位于细胞内并构成多肽链的羧基末端区。在分子氨基末端部分的碳水化合物单位富含带负电荷的唾液酸基团。血型糖蛋白B，也叫糖蛋白δ，是与Ss同种抗原结合的糖蛋白。29位上蛋氨酸或苏氨酸的存在表明该同种抗原的区别。看来至今只有血型糖蛋白B的氨基末端部分已序列化了。血型糖蛋白C与称为糖蛋白β和γ的一些成份有关。构成红细胞血型糖蛋白的糖蛋白链可作为同型和杂二聚体存在，同型和杂二聚体在聚丙烯酰胺电泳(PAGE)之后具有特征带，应该注意可以进一步根据糖基化和唾液酸化的类型及其程度的不同来描述血型糖蛋白。申请人:已发展了一种仅对血型糖蛋白A上的一个特异抗原决定簇，即与一个唯一的结合位点结合的单克隆抗体。为了从人的全血样品中回收白细胞，在磁性分离程序中进行了用抗血型糖蛋白A单克隆抗体包被市售磁性微球体的尝试。在一例研究中，使用了从加利福尼亚，San Diego的分子生物系统中获得的蛋白A磁性微球体，其分类号为MMOO2。如美国专利4，230，685所述，这些粒子经过多分散具有0.15-2.0微米的平均大小并发现需要一个表面活性剂。适宜的培养期所需的珠粒与细胞之比和红细胞减少的百分比证明不能用于商业。此外，还遇到了对白细胞回收的不利干扰。在一次试验研究中，利用了从宾夕法尼亚，费城的公爵科研所所获得的磁性微球体，其分类号为9420A，在这里，这些粒子也经过了多分散，从0.2-0.9微米并且也需要表面活性剂。可以看到这些颗粒的凝集和聚集。白细胞的回收不充分是由于在此过程中随着红细胞的减少导致了白细胞的丧失。申请人:以前对利用这种市售多分散磁性微球体从人的全血样中分离并回收白细胞的尝试表明在商业上不能使用这种磁性粒子分离程序。利用这种颗粒基质使本技术商业化而满足上述普通磁性微球体大量生产的需求是行不通的。然而，现在申请人已能够进行该方法学的改进，这种改进产生了预想不到的，令人吃惊的成功结果。申请人也已确定了哪种磁性微球体能与其唯一的单克隆抗体一起使用。本专利技术阐述了一种由申请人发展起来的鼠的单克隆抗体，这种单克隆抗体选样性地与暴露在人红细胞表膜上的血型糖蛋白A的一个决定簇位点相结合。这个单克隆抗体被称为“KC-16”。与抗血型糖蛋白A结合的特异性使得可通过从血液中分离红细胞而不需其本身溶溶解的程序，将KC-16单克隆抗体用于人外周血中白细胞的商业可行性检测。此外，在不改变试验血样中白细胞的形态学及无白细胞群体的不利减少情况下得到了分离。一种特别成功的检测程序包括在大小分别为1.0和4.5微米的单分散磁性微球体或珠粒上包被KC-16单克隆抗体。在每个例子中，都是将人血样放在一支试管中，在室温下培养一段时间，微球体与红血细胞之比在一例中为7∶1，在另一例中为14∶1，将其引入到试验容器中。通过在试验容器的底部应用磁力，把与微球体结合的红细胞从血样中分离出来，轻轻倒出剩余的样品上清液，用注册商标为EPICS 的佛罗里达，Hialeah Coulter公司的细胞分类仪，通过光散射技术进行分析。随着白血细胞的回收红血细胞成功地减少。红血细胞减少的百分数为99.5%-99.99%，剩余的白细胞群体为97%-98%。5-30分钟的培养期就获得了这些结果。为了显出一个无孔聚合表面选样了所用的磁性微球体，这种磁性微球体无表面活性剂。其特性为球形，单分散的并且磁性材料的均匀度是合乎要求的。为了从人的外周血样中分离红细胞，然后用电子血细胞计数和分类技术检测白细胞群体也可将KC-16单克隆抗体连接到具有合适特征的非磁性微球体上，这种电子白细胞计数和分类技术是在一台COULTER COUNTER 型仪器上实现的，该仪器是由佛罗里达，Hialeah的Coulter电器公司，即本专利申请代理人所拥有的附属机构销售的。KC-16单克隆抗体的独特的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种杂交细胞系，该细胞系可产生一种与暴露在人红细胞表膜上的血型糖蛋白Ａ蛋白质的一个特异抗原决定簇结合的单克隆抗体。
【技术特征摘要】
US 1985-11-19 7994891.一种杂交细胞系，该细胞系可产生一种与暴露在人红细胞表膜上的血型糖蛋白A蛋白质的一个特异抗原决定簇结合的单克隆抗体。2.权利要求1所述的细胞系，其中所说的产生抗体的细胞是鼠的脾细胞。3.权利要求1所述的细胞系，其中所说的细胞来自于对人的癌细胞有免疫力的鼠。4.权利要求2所述的细胞系，其中产生抗体的细胞来自于Balb/c鼠。5.一种具有贮存在美国典型培养物贮藏所的CRL8994号样品性状的杂交细胞系。6.对暴露在人红血细胞膜表面上的血型糖蛋白A的一个抗原决定簇有特异性的单克隆抗体。7.权利要求6的单克隆抗体，它是通过具有美国典型培养物保藏所的CRL8994号贮存物特征的杂交细胞系产生的。8.一种在不使血样的红细胞群体溶解时检测人外周血样中白细胞群体的方法，该方法包括(1)将一些包有权利要求7的单克隆抗体的充分单分散的微球体引入到所述的血样中，使微球体与细胞在样品中达到一个所需的比例;...
【专利技术属性】
技术研发人员：肯尼思H科特里特，戴维德E霍夫海茵茨，
申请(专利权)人：科特公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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