用偏振光散射技术筛选微观细胞的方法和装置制造方法及图纸

利用至少一个偏振光检测参量，来完成一个或多个感光趣细胞群的筛选，所述细胞群被一个细胞种群，例如一个ＷＢＣ种群的感兴趣的一个或多个子种群，所遮蔽的方法和装置（１０，３０，５０，９０，１９０，２５０，２８０，３４０，３６０）。通过利用上面结合有单克隆抗体的微球，改进特定细胞的检测特性，以便从遮蔽细胞种群中区分感兴趣的细胞群，来计数感兴趣的细胞群。（*该技术在2012年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般涉及一种用偏振光散射技术筛选具有选择特性微观细胞的方法和装置。具体地说，本专利技术用一种在上面键合有单克隆抗体的微球改变每一特定细胞的检测特性，以便从一个细胞种群中鉴别出感兴趣的细胞群的细胞来分析在所述细胞种群中感兴趣的被遮蔽一个或多个细胞群。本专利技术一般涉及一个自动分析器和使用该仪器来筛选生物细胞或成形体以进行种群计数的方法，这种种群计数表征了一些我们用作研究、诊断、医疗或工业目的各种选择特性。更具体地说，体现本专利技术的一些自动分析仪器和方法，独特的将光学或光学和电子技术和选择能力生物分子(如抗体)的特殊性结合起来，能够对细胞或成形体筛选和选择计数多部分分类细胞和成形体、分类细胞和成形体的功能表现型，在其他细胞中区分白血病、淋巴瘤或硬肿瘤细胞，用于这些细胞和成形体的筛选和选择性计数。采用柯尔特电子公司(Inc.ofHialean，Florida)的COULTERCOUNTERA型可以成功地使自动血细胞计算器达到人体外周血液常规全血细胞(CBC)分析的自动化。这种仪器的电子微粒检测系统的原理在美国专利2656508(1953年10月20日颁发给WallaceH、Coulter)中有所公开。这种柯尔特检测原理被发展和扩大到更多采用先进技术的仪器(例如COULTERCOUNTER(注册商标)ModelS一些仪器)中，这些仪器借助于特殊计算机程序使CBC参数、绝对细胞计数、血小板计数和形态、红血细胞(RBC)形态、能够解释正常和异常血液样品。柯尔特电子微粒原理应用了一个使用直流(DC)孔径电源的孔径检测电路，这种微粒传感器结构简单，非常稳定可靠，美国和世界其他各地的临床实验室大都普遍采用COULTERCOUNTER(注册商标)自动分析器就证明了这一点。这个基本的孔径检测电路一个改进型在美国专利3502974(在1970年颁发给WallaceCoultter和WalterHogg)中已公开。除了标准的直流孔径电源外，还加了一个高频孔径电流，这使检测一个用来进行分类的附加参数成为可能。高频孔径电流产生一个信号，这个信号是血细胞内部导电性和细胞体积的函数。同时由直流孔径电路产生一个常规直流幅度信号，这个信号基本上指示了细胞体积。用一个高速除法电路将射频振幅除以直流脉冲振幅，得到一个为细胞体积和内部电阻的函数的商，通常称之谓“浊度”。这个原理在美国专利3502973(1970年颁发给WallaceCoulter和WalterHogg)中进一步公开。这个浊度参数可以用于细胞分类系统。无论是单一孔径还是一对分开的孔径都可用于这种用途。不同种群的分类是通过核对所产生的一对信号的数据来完成的，一个测量微粒体积，而另一个测量细胞内部的电阻率或浊度。表示该数据的一种方便形式称为散点图的二维图形。这类图形在FlowCytometryandsorting(MelamedMelaney，和Medelsohn编辑，JohnWiley父子公司1979版)371页中有详细说明。起初柯尔特电子微粒检测原理用来对红血细胞进行计数，而后更完善的用来确定红血细胞的其他一些参数。将红血细胞从全外周血液中除去，只要除去红血胞的过程并不显著地损害所留下的待测白血细胞种群的性质，就可着手对白血细胞(WBC)种群进行分析。为此研制了各种红血细胞的溶胞剂，这些溶胞剂虽然很有用，并且广泛地使用着，但对于接着的白血细胞测定来说并不是一切都令人满意的。上述的单独用直流体积或用在各个角度上的光散射进行白血细胞流动分析的方法就显示三簇白血细胞，分别相应于淋巴细胞、单核细胞和粒性白细胞，粒性白细胞包括嗜中性细胞、嗜碱性细胞和嗜酸性细胞种群。根据一些样品对嗜酸性种群浓度进行一个粗略而有用的估计。对于这种方法来说，第五主要种群嗜碱性细胞相对说来是太小了。采用专门的荧光技术也已观察到一簇明显的嗜酸性细胞种群。在一外周血液涂片中发现异常时，免疫研究也是很重要的。为了针对白血病更好的选择治疗方法以及给病人提供一个尽可能明确的予后症状，必须确定白血病的特定的子型。例如，在急性白血病的情况，在外周血液中有胚胞优势，因为缺少差别，把未成熟的细胞分为淋巴细胞或粒性白细胞可能是困难的。如果发现这个胚胞子种群很快增殖是T11受体的举止，这个白血病可能是一急性淋巴母细胞白血病，T-细胞型。通常T系ALL比B系ALL予后症状差，根据这些白血病之间的差别的大小进一步把它们分组也是通常的。组Ⅰ和Ⅱ呈现出在早期的胸腺母细胞上发现抗原，而组Ⅲ中表示抗原是类似于在成熟的T细胞上发现的表面抗原。对于病人予后症状和治疗，有关在白血病的细胞上表现出的表面抗原这样信息是有用的。利用光学显微镜测定淋巴细胞子种群已初步改进了免疫试验。1970年Coombs和其他人在人的淋巴细胞和绵羊红血细胞之间观察到玫瑰花结形态。后来的研究发现，在适当条件下胸腺产生淋巴细胞(T-细胞)的所有的或至少一主要部分显示出玫瑰花结形态。这些研究利用菲科尔分离淋巴细胞，并且在一定时间内用光学显微镜对分离的淋巴细胞作常规的子种群分类。目前，在一个带有荧光示踪单克隆抗体的样品中，通常是用荧光标记细胞来测定淋巴细胞的子种群的。荧光示踪单克隆抗体结合到表达抗原的细胞的表面上有关抗原上。然后细胞样品用一荧光显微镜或一个高度复杂的流式细胞计数仪器来分析。当利用一个流式细胞计数仪器时，细胞样品的制备，数据采集和数据分析一定要由一专门培训的技术人员来完成。这种流式细胞计数仪器包括一激光器和复杂的光学系统，一高效率计算机和电子及流体系统。这种流式细胞计数仪器的各个分支系统必须适当的保养，定期和经常校准。虽然目前流式细胞计数仪器是标准的淋巴细胞子种群测定方法，这个方法有如下缺点仪器的高成本，以及要求专家正确地操作这样的仪器。利用由本申请的受让人(CoulterElectronics，Inc.)研制的自动化仪器和方法也能测定淋巴细胞的子种群。在1990年9月20日申请的美国专利申请587646(名称为“AutomatedAnalyserandMethodForscreeningCellsorFormedBodiesForEnumerationofPopulationsExpressingSelectedCharacteristics”它是同样名称的美国专利申请号025345，申请日1987年3月13日的后续申请)中公开了一个改进的简单自动仪器和使用该仪器方法。这篇申请结合了电子检测原理的申请、对鉴别和/或计数确定的细胞或形成体的种群的选择的生物分子的特异性、以及显微颗粒技术。这种自动分析仪器可以与专门的溶胞试剂和/或键合到显微球体或各种组份的支持体上的抗体一起使用。第二个申请(美国专利申请285856，申请日1988年12月16日，名称“MethodandApparatusForscreeningCellsorFormedBodieswithPopulationsExpressingSelectedCharacteristics)公开了从全血样品或它的一部分中直接筛选子种群。第三个申请(1989年4月14日申请的美国专利申请339156，名称MethodandApparatusForScreeningCellsorFormedBodies本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从具有至少一个遮蔽其中细胞种群的一细胞样品的至少一部分中分析至少一个感兴趣的细胞群的方法，其特征在于：在第一样品部分中改变至少第一选择的感兴趣的细胞群的检测特性，从遮蔽细胞种群检测特性中除去该细胞群检测特性以及用至少一个光偏振参量，检测和计数所述第一样品部分，得到所述感兴趣的选择细胞群占有的百分率。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JC赫德森，CM罗德盖兹，T拉塞尔，
申请(专利权)人：科特公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]