鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法及应用技术

本发明专利技术属于色谱分析技术领域，具体公开了鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取器的制备；(2)在线提取；(3)高效液相色谱串联质谱检测；(4)特征图谱的构建。本发明专利技术所提供的在线提取‑高效液相色谱体系装置简单，操作简便，需要的样品量少，耗时少，极大地促进了该方法在实际生产中的应用，具有很好的应用前景。

Construction method and application of on line extraction of high performance liquid phase characteristics of fresh Cordyceps sinensis

The invention belongs to the technical field of chromatographic analysis, specifically discloses a construction method of fresh Cordyceps sinensis extract online HPLC fingerprint, characterized by comprising the following steps: (1) extractor preparation; (2) (3) online extraction; high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry detection; (4) constructing characteristic spectrum the. Online provided by the invention extraction HPLC system has the advantages of simple structure, convenient operation, and require small amounts of sample, less time consuming, greatly promote the application of this method in the actual production, has good application prospects.

【技术实现步骤摘要】
鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法及应用
本专利技术涉及色谱分析
，具体涉及一种鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法及在中药材有效成分的在线提取分析中的应用。
技术介绍
冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌(Cordycepssinensis(BerK.)Sacc.)寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。性味甘，平，归肺、肾经，具有补肾益肺，止血化痰疗效，用于治疗肾虚精亏，阳痿遗精，腰膝酸痛，久咳虚喘，劳嗽咯血等。现代研究表明冬虫夏草含有核苷、蛋白质、多糖、甾醇等活性物质，具有抗肿瘤、免疫调节、抗炎、抗衰老等活性。冬虫夏草是一味珍稀中药材，近年来由于市场需求逐渐增大，而资源却十分匮乏，导致价格高昂，使得市场上掺杂品、混淆品、伪品增多。自2000年版《中国药典》起，腺苷作为冬虫夏草质量标准的含量测定指标被收载。研究表明，除腺苷外，尿苷、肌苷、鸟苷、腺嘌呤、鸟嘌呤等其他核苷类成分也是冬虫夏草的指标性成分，且相比单一指标的含量测定，构建冬虫夏草核苷类成分的特征指纹图谱能更全面的体现药材的品质。前期已有文献报道分析冬虫夏草核苷类成分所采用的样品制备方法多采本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取器的制备：混合对照品提取器的制备：分别取对照品适量，精密称定，加入溶剂溶解，制成混合对照品溶液；精密量取混合对照品溶液，加入到已填充了硅藻土的预柱芯中，干燥，柱芯两端用微孔滤膜覆盖，安装于匹配的预柱套中，得到混合对照品的提取器；供试品提取器的制备：取供试品适量，加入硅藻土充分研磨；精密称取混合均匀后的供试品和硅藻土，填充于空预柱芯，两端用微孔滤膜覆盖，安装于匹配的预柱套中，得到供试品的提取器；(2)在线提取：将提取器接入高效液相色谱仪中的保护柱前，且置于柱温箱中；提取溶剂通过液相高压泵输送，在提取器中进行在线...

【技术特征摘要】
1.一种鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取器的制备：混合对照品提取器的制备：分别取对照品适量，精密称定，加入溶剂溶解，制成混合对照品溶液；精密量取混合对照品溶液，加入到已填充了硅藻土的预柱芯中，干燥，柱芯两端用微孔滤膜覆盖，安装于匹配的预柱套中，得到混合对照品的提取器；供试品提取器的制备：取供试品适量，加入硅藻土充分研磨；精密称取混合均匀后的供试品和硅藻土，填充于空预柱芯，两端用微孔滤膜覆盖，安装于匹配的预柱套中，得到供试品的提取器；(2)在线提取：将提取器接入高效液相色谱仪中的保护柱前，且置于柱温箱中；提取溶剂通过液相高压泵输送，在提取器中进行在线提取得到提取液；提取过程由自动进样器吸取水触发；其中所述柱温箱具有第一控温模块和第二控温模块；第一控温模块控制提取器的温度，第二控温模块控制保护柱和色谱柱的温度；(3)高效液相色谱串联质谱检测：步骤(2)所得提取液进入保护柱，再经色谱柱进行高效液相色谱串联质谱检测；高效液相色谱色谱条件为：流速为1～2.5mL/min；流动相A为水，流动相B为0.1％乙酸-甲醇溶液；梯度洗脱为：0～3.5min：0％B；3.5～15.5min：0％B→30％B；15.5～25min：30％B；(4)特征图谱的构建：根据混合对照品提取器在线检测结果，确定供试品提取器在线检测结果中色谱峰，将以下8个色谱峰建成特征图谱：峰1为尿嘧啶，保留时间为2.76min，质谱数据为113[M+H]+m/z；峰2为尿苷，保留时间为3.84min，质谱数据为245[M+H]+m/z；峰3为肌苷，保留时间为8.66min，质谱数据为269[M+H]+m/z；峰4为鸟嘌呤，保留时间为9.24min，质谱数据为152[M+H]+m/z；峰5为鸟苷，保留时间为9.75min，质谱数据为284[M+H]+m/z；峰6为腺嘌呤，保留时间为13.51min，质谱数据为136[M+H]+m/z；峰7为腺苷，保留时间为15.30min，质谱数据为268[M+H]+m/z；峰8为2’-脱氧腺苷，保留时间为17.55min，质谱数据为252[M+H]+m/z。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述混合对照品提取器的制备方法为：分别取对照品尿嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤、尿苷、肌苷、...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱正明，周妙霞，邱健健，李春红，李文佳，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，宜昌山城水都冬虫夏草有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44