盐酸维拉佐酮中基因毒杂质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种盐酸维拉佐酮中基因毒杂质二(2‑氯乙基)胺及其盐酸盐的检测方法，采用气相色谱‑质谱联用色谱法进行测定，所述气相色谱采用交联聚乙二醇毛细管色谱柱；所述质谱采用电子轰击电离源，该检测方法灵敏度高、准确度高、耐用性好，可有效控制盐酸维拉佐酮中基因毒杂质二(2‑氯乙基)胺及其盐酸盐的质量，减少了患者用药副反应的发生，一定程度保证患者用药安全性。

Method for detection of genotoxic impurities in vilazodone hydrochloride

The invention relates to a gene Vilazzo hydrochloride ketone toxic impurities two (2 chloroethyl) amine hydrochloride and its detection method, using gas chromatography mass spectrometry chromatography were determined by the cross linked polyethylene glycol capillary column gas chromatography; the mass spectrometry with electron impact ionization source, the detection sensitivity high, high accuracy, good durability, and can effectively control the Vilazzo hydrochloride ketone gene toxic impurities two (2 chloroethyl) amine hydrochloride and its quality, reduce the patient side reaction, to a certain extent to ensure the safe use of drugs.

【技术实现步骤摘要】
盐酸维拉佐酮中基因毒杂质的检测方法
本专利技术属于医药
，具体涉及一种盐酸维拉佐酮中基因毒杂质二(2-氯乙基)胺及其盐酸盐的检测方法。
技术介绍
盐酸维拉佐酮(Vilazodone)，是由美国TrovisPharmaceuticalsLLC公司开发的一种具有双重作用的选择性5-HT再摄取抑制剂和5-HT1A受体部分激动剂，并于2011年1月被美国食品药品监督管理局批准上市，商品名为Viibryd，用于治疗成年人重度抑郁症，其结构式如下：对于盐酸维拉佐酮的合成工艺，文献(TIMOH,HENNINGB,ROLFG,etal.Synthesisandstructure-activityrelationshipinaclassofindolebutylpiperacinesasdual5-HT1Areceptoragonistsandserotoninreuptakeinhibitors[J].JMedChem,2004,47(19):4684-4692.)公开了如下目前医药
比较认可且常用的合成工艺：可见，该工艺中用到了二(2-氯乙基)胺(即(ClCH2CH2)2NH)。另外，用二(2-氯乙基)胺盐酸盐作为中间体进行合成维拉佐酮的情况也非常普遍。根据欧盟联合研究中心(JRC)于2009年发表的题为“Developmentofstructuralalertsfortheinvomicronucleusasssyinrodents”的报告中，明确指出(R为任何原子或基团)为遗传毒性警示结构，故二(2-氯乙基)胺为潜在的基因毒杂质，具有遗传毒性，由于其终产物盐酸维拉佐酮有残留的可能，需严格控制其限度。根据EMEA中《遗传毒性杂质限度指导原则》相关规定，其采用毒理学担忧阈值(thresholdoftoxicologicalconcern,TTC)评价大部分药物的TTC值为遗传毒性杂质摄入量1.5μg/天。盐酸维拉佐酮的最大日服用剂量为40mg，所以盐酸维拉佐酮中含基因毒杂质的限度应为37.5ppm。但因其限度较低，检测较为困难，目前尚未有文献报道该基因毒杂质的检测方法。因此，找到一种灵敏度高、专属性好的检测该基因毒杂质的方法，实现对盐酸维拉佐酮中该杂质的有效控制，从而在一定程度上保证盐酸维拉佐酮的质量和患者用药的安全性，具有重要研究意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种盐酸维拉佐酮中基因毒杂质二(2-氯乙基)胺及其盐酸盐的检测方法，从而实现对盐酸维拉佐酮中该基因毒杂质的有效控制，以减少患者用药副反应的发生，保证用药安全性。由于二(2-氯乙基)胺及其盐酸盐无紫外吸收，不能采用一般的液相色谱法进行测定。鉴于二(2-氯乙基)胺具有挥发性，本专利技术人开始尝试采用气相色谱进行测定，但FID检测器对二(2-氯乙基)胺盐酸盐的定量限远高于盐酸维拉佐酮中含基因毒杂质的限度的限度，灵敏度达不到检测要求。后来，本专利技术人尝试采用气相色谱-质谱联用色谱法(GC-MS法)，摸索了多种色谱柱，如HP-1、DB-624、交联聚乙二醇的毛细管柱等，发现当选择交联聚乙二醇毛细管柱时，色谱柱采用等温度方式100℃～150℃，保持10min进行检测，二(2-氯乙基)胺盐酸盐具有较好的峰型，虽然仍达不到分离要求，但与杂质峰的分离相对较好，后又对其它色谱条件进行了研究调试，进而完成了本专利技术。本专利技术所述的盐酸维拉佐酮中二(2-氯乙基)胺及其盐酸盐的检测方法，是采用气相色谱-质谱联用色谱法进行测定，所述气相色谱采用交联聚乙二醇毛细管色谱柱；所述质谱采用电子轰击电离源。其中，本专利技术所述的交联聚乙二醇毛细管色谱柱的型号为DB-WAX、HP-INNOWax、DB-WAXetr、SupelcoWAX10、CP-WAX52CB、CB-WAX、Stablilwax、BP-20、007-CW、AT-Wax、Rtx-Wax、ZB-Wax或HP-20M，优选DB-WAX。本专利技术所述的色谱柱采用程序升温的方式控制柱温，因采用程序升温方式时，二(2-氯乙基)胺及其盐酸盐色谱峰与邻近杂质峰的分离度更好，故优选程序升温方式。其中，所述程序升温的方式为初始柱温25℃～60℃，保持2min，以15℃/min～20℃/min升温至100℃～150℃，保持5min；优选初始柱温为50℃，保持2min，以20℃/min升温至100℃，保持5min。本专利技术所述的气相色谱采用分流比为5:1、10:1或20:1；载气流速为0.8ml/min～1.2ml/min，优选分流比为5:1、流速为1.0ml/min。本专利技术所述质谱采用的离子源温度为200℃～250℃，优选230℃。本专利技术所述质谱采用的检测模式为单离子检测模式。另一方面，本专利技术所述的检测方法包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：制备每1ml含10mg盐酸维拉佐酮的供试品溶液。(2)对照品溶液的制备：制备每1ml含0.375μg二(2-氯乙基)胺或其盐酸盐的对照品溶液。(3)分析测定：将供试品溶液和各对照品溶液注入气相色谱-质谱联用仪。其中，步骤(2)中制备的对照品溶液浓度是按照盐酸维拉佐酮中含基因毒杂质的限度应为37.5ppm进行折算的。步骤(3)中，所述“注入”方式可选择任意可行的进样方式，例如但不限于直接进样，顶空进样或自动吹扫捕集系统进样，但需注意的是，当采用“直接进样”时，制备供试品和对照品的溶剂为二甲基亚砜；当采用“顶空进样”时，制备供试品和对照品的溶剂为水；当采用“自动吹扫系统进样”时，制备供试品和对照品的溶剂为0.1mol/L的NaOH溶液。以下阐述本专利技术的有益效果，但不应将此理解为本专利技术盐酸维拉佐酮中基因毒杂质二(2-氯乙基)胺及其盐酸盐的检测方法仅具有下列有益效果：(1)本专利技术检测方法的检测灵敏度高，其检测限(0.8ppm)和定量限(2.0ppm)远低于基因毒杂质二(2-氯乙基)胺及其盐酸盐的限度(37.5ppm)。(2)本专利技术检测方法在0.030μg/ml～0.750μg/ml范围内线性关系良好，可以准确测定盐酸维拉佐酮中含基因毒杂质二(2-氯乙基)胺及其盐酸盐在此范围的含量。(3)本专利技术检测方法准确可行，回收率为98.3％，RSD为2.1％，仪器精密度RSD为3.3％，样品测定重复性RSD为4.88％。(4)本专利技术检测方法可实现对盐酸维拉佐酮中该基因毒杂质的有效控制，减少了患者用药副反应的发生，一定程度保证患者用药安全性。附图说明图1气相色谱-质谱的空白质谱图图2二(2-氯乙基)胺盐酸盐对照品的气相色谱-质谱的质谱图图3二(2-氯乙基)胺盐酸盐的气相色谱-质谱的定量限质谱图图4二(2-氯乙基)胺盐酸盐的气相色谱-质谱的检测限质谱图图5盐酸维拉佐酮(20120601批)中二(2-氯乙基)胺盐酸盐的质谱图图6盐酸维拉佐酮(20120602批)中二(2-氯乙基)胺盐酸盐的质谱图图7盐酸维拉佐酮(20120701批)中二(2-氯乙基)胺盐酸盐的质谱图具体实施方式以下实施例是对本专利技术的内容作进一步的详细说明，但不应理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例1二(2-氯乙基)胺盐酸盐的定位试验气相条件：采用交联聚乙二醇毛细管色谱柱(DB-Wax，30m×0本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种盐酸维拉佐酮中二(2‑氯乙基)胺及其盐酸盐的检测方法，其特征在于：采用气相色谱‑质谱联用色谱法进行测定，所述气相色谱采用交联聚乙二醇毛细管色谱柱；所述质谱采用电子轰击电离源。

【技术特征摘要】
1.一种盐酸维拉佐酮中二(2-氯乙基)胺及其盐酸盐的检测方法，其特征在于：采用气相色谱-质谱联用色谱法进行测定，所述气相色谱采用交联聚乙二醇毛细管色谱柱；所述质谱采用电子轰击电离源。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述交联聚乙二醇毛细管色谱柱的型号为DB-WAX、HP-INNOWax、DB-WAXetr、SupelcoWAX10、CP-WAX52CB、CB-WAX、Stablilwax、BP-20、007-CW、AT-Wax、Rtx-Wax、ZB-Wax或HP-20M，优选DB-WAX。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱采用程序升温的方式控制柱温。4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述程序升温的方式为25℃～60℃，保持2min，以15℃/min～20℃/min升温至100℃～150℃，保持5min，优选为...

【专利技术属性】
技术研发人员：张倩如，张红芬，郭文敏，张琪，杨占坤，
申请(专利权)人：石药集团中奇制药技术石家庄有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13