一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法及获得的芪苓健肾片指纹图谱技术

本发明专利技术公开了一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法及其指纹图谱，该方法建立芪苓健肾片的标准指纹图谱，采用高效液相色谱法和梯度洗脱，理论板数按青藤碱峰计算，应不低于100000。由本发明专利技术方法获得的芪苓健肾片指纹图谱与对照指纹图谱的相似度大于0.9，能全面地、有效地表征芪苓健肾片的质量，完善了芪苓健肾片的质量评价体系；所得的芪苓健肾片指纹图谱特征峰多，相似度高，可以准确、可靠地监控芪苓健肾片的质量；采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对所测指纹图谱进行辨认，以此得出的相似度结果对芪苓健肾片指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确；本发明专利技术具有方法简便、稳定性优异、精密度高、重现性好等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法及获得的芪苓健肾片指纹图谱
本专利技术涉及中药制剂的质量控制方法，特别是一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，以及由此方法得到的芪苓健肾片的指纹图谱。
技术介绍
由于中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法。中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。在现阶段，中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，中药指纹图谱对于有效控制中药材或中成药的质量具有重要的意义。以指纹图谱作为中药提取物及其制剂的质量控制方法，已成为目前国际共识，从先行的质量控制模式向一种综合的、宏观的、可量化的鉴别与主要有效成分含量测定结合已是发展的趋势。芪苓健肾片具有健脾益肾，补气清利，祛风通络的功能，其由黄芪、茯苓、淫羊藿、僵蚕、全蝎、泽泻、石韦和青风藤共8味药制成，其治疗效果已经在临床上得到验证，而是否能够保证芪苓健肾片的质量以及其中有效成分的含量，是决定芪苓健肾片疗效的基础。现有技术中，还没有作为质量控制标准的芪苓健肾片指纹图谱的公开报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，用于评价和控制芪苓健肾片的质量，通过此方法可以保证芪苓健肾片的质量稳定性、一致性和可控性，从而确保芪苓健肾片的安全性和有效性。本专利技术的另一个目的在于还提供了应用上述方法获得的芪苓健肾片指纹图谱。本专利技术是通过以下技术方案来实现的。本专利技术是一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其特点是，该方法采用以下方法建立芪苓健肾片的标准指纹图谱，采用高效液相色谱法，色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：C18柱；流动相A：乙腈，流动相B：体积浓度为0.1～0.5％磷酸水溶液，采用梯度洗脱；梯度洗脱，0～65min，体积浓度7％A～90％A；流速：0.8～1.2mL/min；检测波长：208～270nm；柱温：25～35℃；理论板数按青藤碱峰计算，应不低于100000。本专利技术所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其进一步优选的技术方案是：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：WatersSymmetryC18，250mm×4.6mm，5μm；以乙腈为流动相A，以体积浓度为0.5％磷酸水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速每分钟为1.0ml；检测波长为208nm；柱温30℃；理论板数按青藤碱峰计算应不低于100000。本专利技术所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其进一步优选的技术方案是：梯度洗脱程序为：本专利技术所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其进一步优选的技术方案是：建立芪苓健肾片的标准指纹图谱后，按相同的方法测定待测芪苓健肾片样品的指纹图谱，然后将其与上述芪苓健肾片的标准指纹图谱比较，相似度不低于0.80。本专利技术所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其进一步优选的技术方案是：供试品溶液的制备：取芪苓健肾片装量差异项下的内容物适量，混匀，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为30～70％甲醇15～75mL，称定重量；超声处理15～60min，放冷，再称定重量，用体积浓度为30～70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液；对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品、青藤碱对照品、淫羊藿苷对照品适量，用甲醇配制成含绿原酸、淫羊藿苷、青藤碱的混合溶液，作为对照品溶液；测定：精密吸取所述的供试品溶液和对照品溶液各5～15μL，分别注入高效液相色谱仪中进行检测，记录65min图谱；以对照品色谱峰为参照，根据中药色谱指纹图谱软件对所得数据和谱图进行处理，得到芪苓健肾片指纹图谱。本专利技术所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其进一步优选的技术方案是：采用高效液相色谱法进行检测，其步骤如下：(1)供试品溶液的制备：取芪苓健肾片装量差异项下的内容物0.35g，混匀，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50％甲醇50mL，称定重量；超声处理30min，放冷，再称定重量，用体积浓度为50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液过0.22μm滤膜，滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品、青藤碱对照品、淫羊藿苷对照品适量，用甲醇配制成每1mL含绿原酸40μg、淫羊藿苷40μg、青藤碱320μg的混合溶液，作为对照品溶液；(3)测定：精密吸取所述的供试品溶液和对照品溶液各10μL，分别注入高效液相色谱仪中进行检测，记录65min图谱；以对照品色谱峰为参照，根据中药色谱指纹图谱软件对所得数据和谱图进行处理，得到芪苓健肾片指纹图谱。本专利技术所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其进一步优选的技术方案是：所述的超声处理的功率为250W，频率为40kHz。本专利技术一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法获得的芪苓健肾片指纹图谱：得到的芪苓健肾片标准指纹图谱的图谱总长度为65min，有24个共有峰，第4、6、22号峰分别对应为青藤碱、绿原酸、淫羊藿苷；以4号峰，即青藤碱参照物对应的峰为S峰，计算各共有峰的相对保留时间，各共有峰的平均相对保留时间及相对标准偏差具体如下：1号峰：平均相对保留时间为0.500，RSD为0％；2号峰：平均相对保留时间为0.739，RSD为0.43％；平均相对峰面积为0.572，RSD为0.99％；3号峰：平均相对保留时间为0.854，RSD为0.60％；4号峰：平均相对保留时间为1，RSD为0％；平均相对峰面积为1，RSD为0％；5号峰：平均相对保留时间为1.162，RSD为0.36％；平均相对峰面积为0.147，RSD为2.27％；6号峰：平均相对保留时间为1.444，RSD为0.36％；7号峰：平均相对保留时间为1.653，RSD为0.29％；8号峰：平均相对保留时间为1.754，RSD为0.40％；9号峰：平均相对保留时间为1.844，RSD为0.38％；平均相对峰面积为0.970，RSD为0.11％；10号峰：平均相对保留时间为1.984，RSD为0.35％；11号峰：平均相对保留时间为2.027，RSD为0.47％；12号峰：平均相对保留时间为2.062，RSD为0.45％；13号峰：平均相对保留时间为2.284，RSD为0.47％；平均相对峰面积为0.173，RSD为2.91％；14号峰：平均相对保留时间为2.370，RSD为0.56％；平均相对峰面积为0.280，RSD为0.31％；15号峰：平均相对保留时间为2.523，RSD为0.46％；16号峰：平均相对保留时间为2.719，RSD为0.50％；平均相对峰面积为0.233，RSD为2.05％；17号峰：平均相对保留时间为2.865，RSD为0.50％；平均相对峰面积为0.120，RSD为0.77％；18号峰：平均相对保留时间为3.884，RSD为0.85％；19号峰：平均相对保留时间为3.921，RSD为1.02％；20号峰：平均相对保留时间为4.010，RSD为0.51％；21号峰：平均相对保留时间为4.068，RSD为0.45％；平均相对峰面积为0.070，RSD为0.61％；22号峰：平均相对保留时间为4.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其特征在于，该方法采用以下方法建立芪苓健肾片的标准指纹图谱，采用高效液相色谱法，色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：C18柱；流动相A：乙腈，流动相B：体积浓度为0.1~0.5%磷酸水溶液，采用梯度洗脱；梯度洗脱，0~65min，体积浓度7%A~90%A；流速：0.8~1.2mL/min；检测波长：208~270nm；柱温：25~35℃；理论板数按青藤碱峰计算，应不低于100000。

【技术特征摘要】
1.一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其特征在于，该方法采用以下方法建立芪苓健肾片的标准指纹图谱，采用高效液相色谱法，色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：C18柱；流动相A：乙腈，流动相B：体积浓度为0.1~0.5%磷酸水溶液，采用梯度洗脱；梯度洗脱，0~65min，体积浓度7%A~90%A；流速：0.8~1.2mL/min；检测波长：208~270nm；柱温：25~35℃；理论板数按青藤碱峰计算，应不低于100000。2.根据权利要求1所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其特征在于：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：WatersSymmetryC18，250mm×4.6mm，5μm；以乙腈为流动相A，以体积浓度0.5%磷酸水为流动相B，梯度洗脱0~65min；流速每分钟为1.0ml；检测波长为208nm；柱温30℃；理论板数按青藤碱峰计算应不低于100000。3.根据权利要求1所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其特征在于：梯度洗脱程序为：。4.根据权利要求1或2或3所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其特征在于：建立芪苓健肾片的标准指纹图谱后，按相同的方法测定待测芪苓健肾片样品的指纹图谱，然后将其与上述芪苓健肾片的标准指纹图谱比较，相似度不低于0.80。5.根据权利要求4所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其特征在于：供试品溶液的制备：取芪苓健肾片装量差异项下的内容物适量，混匀，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为30~70%甲醇15~75mL，称定重量；超声处理15~60min，放冷，再称定重量，用体积浓度为30~70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液；对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品、青藤碱对照品、淫羊藿苷对照品适量，用甲醇配制成含绿原酸、淫羊藿苷、青藤碱的混合溶液，作为对照品溶液；测定：精密吸取所述的供试品溶液和对照品溶液各5~15µL，分别注入高效液相色谱仪中进行检测，记录65min图谱；以对照品色谱峰为参照，根据中药色谱指纹图谱软件对所得数据和谱图进行处理，得到芪苓健肾片指纹图谱。6.根据权利要求5所述的一种芪苓健肾片指纹图谱的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，其步骤如下：（1）供试品溶液的制备：取芪苓健肾片装量差异项下的内容物0.35g，混匀，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50%甲醇50mL，称定重量；超声处理30min，放冷，再称定重量，用体积浓度为50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液过0.22μm滤膜，滤液作为供试品溶液；（2）对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品、青藤碱对照品、淫羊藿苷对照品适量，用甲醇配制成每1mL含绿原酸40μg、淫羊藿苷40μg、青藤碱320μg的混合溶液，作为对照品溶液；（3）测定：精密吸取所述的供试品溶液和对照品溶液各10µL，分别注入高效液相色谱仪中进行检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：萧伟，郎悦，胡军华，秦建平，李东坡，任伟，李家春，王振中，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32