本发明专利技术公开了一种交联淀粉生物合成重组基因及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，从大肠杆菌JM109‑3突变株中分离获得了腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶编码基因的glgC55，从马铃薯分别分离获得了腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶AGPase小亚基编码基因SSU cDNA和与淀粉粒结合的淀粉合成酶编码基因GBSSI启动子。其中，glgC55编码431个氨基酸组成的AGPase亚基，其中有4处特异突变，它们分别是K39E,V71A,I248V和K304E，前两者出现在寡聚亚基N端代谢基团的Rossmann折叠区域内，后两者出现在寡聚亚基C端异构调控和寡聚化的LbH基团内。
A cross-linked starch biosynthesis recombinant gene YXI and its application
The invention discloses a cross-linked starch biosynthesis gene recombinant and its application, the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1 shown from Escherichia coli JM109 3 mutant was isolated and adenosine two phosphate glucose pyrophosphorylase gene encoding glgC55 from potato respectively obtained from adenosine two phosphate glucose pyrophosphorylase AGPase subunit SSU gene encoding cDNA and combined with starch starch synthase encoding gene GBSSI promoter. Among them, the AGPase subunit of glgC55 encoding 431 amino acids, including 4 specific mutations, which are K39E, V71A, I248V and K304E, two Rossmann folding regions in the oligomeric subunits of N end groups in the metabolism of both groups, after LbH in oligomeric subunit C and heterogeneous end control the poly.
【技术实现步骤摘要】
一种交联淀粉生物合成重组基因YXI及其应用
本专利技术属于生物医药
，本专利技术公开了一种交联淀粉生物合成重组基因YXI及其应用。
技术介绍
淀粉是仅次于纤维素、目前存在最为普遍、价格最为低廉的光能聚合载体之一；淀粉组成单一、易于储藏、用途广泛，是用于建材、纺织、造纸和石油开采的重要工业原料，尤其是其储藏的化学能易于再转化利用，为此，在战略高度重新认识淀粉方兴未艾。淀粉来自植物种子(如水稻、小麦和玉米等)、块茎(如马铃薯等)等，因食物成分和淀粉特性等原因，马铃薯淀粉是广泛接受和使用的工业原料；我国马铃薯产区淀粉出粉率(生产每公斤淀粉所需块茎量)为1/(7-8),而发达国家为1/(3-4)，生产效率低下，其原因是我国产区淀粉含量仅为15％-18％。育种是改良或获得品种的基本途径，其依据的原理是孟德尔和摩尔根的遗传原理，杂交是实现性状决定基因重组的基本途径，在欧美马铃薯杂交育种获得了目前80％以上广泛种植的品种，其中，用于淀粉加工目的的品种的淀粉含量均为20％以上。在西欧，苏格兰农业科学咨询机构官方(爱丁堡)负责维护的欧洲马铃薯品种数据库，库中收集并详细记载了杂交育种获得品种的相关专利；HZPC、Jalving、Averis等是西欧主要的育种公司，其育种创制的马铃薯品种Agria、Desiree、Bintje、LadyRosetta等被广泛栽培。由北美联合培育的Russet系列品种广泛应用，由此产生的专利包括Pat.No.5,500,365,Pat.No.5,387,756,Pat.No.5,789,657,Pat.No.5,503,999,Pat.No.5,589,612,Pat.No.5,510,253,Pat.No.5,304,730,Pat.No.5,382,429,Pat.No.5,503,999,Pat.No.5,648,249,Pat.No.5,312,912,Pat.No.5,498,533,Pat.No.5,276,268,Pat.No.4,900,676,Pat.No.5,633,434,Pat.No.4,970,168。近年，在国际市场对淀粉巨大需求的驱动下，高出粉率、高粘度等高品质淀粉更是炙手可热，过去十多年，国际化工巨头、如荷兰Avbe和德国BASF等纷纷投资于淀粉品质改良的育种研究，在取得了许多育种成果，其中具有代表性的是获得了基因工程改良的马铃薯品种Amflora。Amflora块茎淀粉中支链淀粉含量在95％以上，由Amflora加工的淀粉，只需传统马铃薯淀粉用量的五分之一，即可达到同样的使用效果；迫于自然主义者的压力，欧盟多年来一直抵制在西欧种植转基因作物，但鉴于Amflora淀粉的巨大诱惑，BASF公司2010获欧盟授权，批准其在欧洲种植Amflora。淀粉不仅是人类生存所需食物的成分，由淀粉生产的燃料乙醇正在成为动力能源之一，因此，淀粉也是人类活动所需能源的组成部分，鉴于人们对淀粉含有的能量寄予的厚望，未来对淀粉的巨大需求显而易见，大幅增加植物淀粉积累，过去是、今天更是人类面临的重大课题。淀粉由两类葡萄糖苷聚合物组成,一是葡萄糖-1,4线性连接占绝大部分的直链淀粉,二是在-1,4连接链有多处-1,6分支连接的支链淀粉；直接参与淀粉的生物合成的主要酶有：腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase.EC2.7.7.27))、可溶性淀粉合成酶(SSS)、与淀粉粒结合的淀粉合成酶(GBSS)、淀粉分支酶(BE)、淀粉去分支酶(DBE)。细菌AGPase是由glgC基因编码的同源四聚体，高等植物的AGPase是异源四聚体(异源四亚基复合体),两个相同的大亚基和两个相同的小亚基，小亚基(SS)行使AGPase的代谢功能，大亚基(LS)主要调控AGPase活性,变构因子诱导的异构调控是AGPase主要的调控形式。细菌AGPase同源四聚体的单个亚基、植物AGPase异源四聚体的小亚基在其以寡聚体状态存在时，其N端的代谢基团行使ADP-葡萄糖合成的功能，即以磷酸葡萄糖和ATP为底物，合成ADP-葡萄糖，ADP-葡萄糖是-1,4或-1,6糖苷链延伸的底物。大肠杆菌K12突变菌株618中AGPase亚基G336D突变使其AGPase活力提高33％，在35S启动子驱动下，表达618菌株AGPase编码基因glgC16马铃薯体内，AGPase活力和块茎淀粉含量提高30％以上，表达G336D突变glgC木薯体内，使其AGPase活力提高70％，块根淀粉含量提高2倍以上。研究业已表明，植物AGPase小亚基以寡聚体形式存在时表现活性，推动淀粉合成，当两小亚基第82位半胱氨酸间形成分子内二硫键(二聚体)时AGPase失活，抑制淀粉合成；众多变构因子影响植物AGPase小亚基第82位半胱氨酸的氧化还原状态，使其对调控敏感。细菌AGPase取代植物AGPase，未见AGPase代谢亚基二聚体形成，淀粉合成不受抑制，这也是glgC16马铃薯体内表达提高AGPase活力的原因。植物体内AGPase编码基因转录、AGPase活力和淀粉合成三者中，AGPase表达水平和其活力水平变化弹性强,提高植物AGPase活力是增加淀粉生物合成的途径。然而，在进一步实验中发现，用Patatin启动子驱动glgC16在马铃薯体内表达，虽然转化株系体内的AGPase活力显著增强，但块茎淀粉含量和对照无显著差异,即glgC16植物体内表达结果无法再现。其中可能原因包括glgC16自身和启动子等方面。研究同时显示，glgC16在马铃薯体内表达，其产物AGPase的表达量与其活力呈线性相关，但以往Patatin启动子或35S启动子驱动glgC16植物体内表达自身基因拷贝数的限制，无法实现AGPase表达量的提高。块茎代谢流测定数据显示，AGPase活力对淀粉合成的控制系数为0.55；反义mRNA抑制AGPase活力的马铃薯转化株系块茎鲜重和干物质积累减少。减少AGPase活力致使储藏组织直链淀粉明显下降，短链支链淀粉积累增加，结果不仅证实了限速酶，揭示的对淀粉合成的中的作用。除了光周期触发AGPase的氧化还原调控外，干旱等通过AGPase对淀粉合成产生影响，干旱下植物体内积累更多蔗糖，淀粉合成显著减低。已知水稻AGPase两小亚基和四个大亚基isoform转录子的分化表达分析表明，内源大小亚基的isoform转录子随器官及细胞器分化表达，大亚基OsAGPL2表达于细胞溶质，小亚基OsAGPS2a表达于叶片，小亚基OsAGPS2b表达于种子，OsAGPL2和OsAGPS2b突变导致淀粉合成减少而使胚乳皱缩；小亚基OsAGPS1，大亚基OsAGPL1,OsAGPL3和OsAGPL4在细胞质体内表达。小扁豆短日照条件下AGPase大亚基转录子LS1and小亚基转录子SS2转录表达减少，转录子SS1表达增加。AGPase不仅受到干旱等因素的调控，光周期不同通过氧化还原调控AGPase亚基的结合状态，而且大小亚基转录子的分化表达；目前，就通过AGPase自身调控其活性和淀粉积累尚处于大小亚基的识别和功能研究阶段，但其对环境和代谢水平的敏感性决定了其目前尚不能成为淀粉积累目的的目标基因，用非敏感基因替代内源AGPase是目前阶段本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种交联淀粉生物合成重组基因YXI，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
【技术特征摘要】
1.一种交联淀粉生物合成重组基因YXI，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:1...
【专利技术属性】
技术研发人员：姚新灵，
申请(专利权)人：南京固山生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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