一种郫县豆瓣黄曲霉毒素B1检测的前处理方法技术

本发明专利技术提供一种郫县豆瓣黄曲霉毒素B1检测的前处理方法，包括以下步骤：步骤1：利用萃取分离的方法提取郫县豆瓣中溶解的黄曲霉毒素B1溶液；步骤2：提取步骤1中下层沉淀的黄曲霉毒素B1溶液；步骤3：将步骤1与步骤2提取的黄曲霉毒素B1溶液合并；步骤4：检测步骤3合并溶液中黄曲霉毒素B1含量。本发明专利技术提高了黄曲霉毒素B1的检测效率和准确度。

A preprocessing method for the detection of aflatoxin B1 of Pixian bean

The invention provides a method for pre treating of Pixian Douban aflatoxin B1 detection, which comprises the following steps: Step 1: using the method of extraction and separation of the extract dissolved Pixian Douban aflatoxin B1 in solution; step 2: extraction step 1 lower sediment aflatoxin B1 solution; step 1 and step 3: Step 2 the extraction of aflatoxin B1 solution with; step 4: the content of aflatoxin B1 detection with step 3 in solution. The present invention improves the detection efficiency and accuracy of aflatoxin B1.

【技术实现步骤摘要】
一种郫县豆瓣黄曲霉毒素B1检测的前处理方法
本专利技术涉及食品质量安全检测
，尤其涉及一种郫县豆瓣黄曲霉毒素B1检测的前处理方法。
技术介绍
郫县豆瓣属中国传统发酵食品，迄今为止已有300多年的历史，被列为中国非物质文化遗产。郫县豆瓣不仅生产工艺独特，也以其味辣香醇、粘稠绒实、红棕油亮、酱香浓郁等特点在我国酱类产品中独树一帜，堪称川菜之魂。据权威统计，2015年“郫县豆瓣”品牌价值已达607.16亿元，位列“加工食品类地理标志产品”全国第一；当年产品总产量达到110万吨，实现工业产值102亿元，出口世界绝大部分国家和地区，创汇超过4000万美元。随着“川菜、川味、川菜调味品”走出四川走向全国，我国已成为全球最大的辣椒生产、消费和出口国，中国辣椒产业的发展对全球辣椒产业发展具有重要的影响。据第三次全国经济普查统计，国内50万家规模以上餐饮企业当中，就有10万家是以川菜为主打菜品，更有超过100万家的小型川菜餐馆几乎分布于世界的各个角落，川菜之魂-郫县豆瓣作为川菜调味品代表也得到了广泛传播和使用。与此同时，据统计四川居民总食物消费中，调味品日均消费量占到了94.13g，其中豆瓣酱消费量占到了10.25g，远高于全国其它地区。郫县豆瓣的生产包括前期发酵和后熟发酵两个阶段，前期发酵主要是指霉瓣子的制曲和辣椒坯的预处理。后熟发酵主要是将成熟霉瓣子和成熟辣椒坯按比例配料混合，加入适量食盐和水，进入发酵池发酵，经过一定时期的翻晒和陈化，即是郫县豆瓣特有的日晒夜露工艺。但是，相当一部分生产企业不重视霉瓣子的制曲、后发酵期的管理和环境卫生，常出现黄曲霉毒素B1超过国家标准限量的问题，带来食品质量安全隐患。黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)是目前发现毒性和致癌性最强的化学物质之一，于1993年被世界卫生组织(WHO)癌症研究机构划定为一类致癌物。黄曲霉毒素主要是由黄曲霉(Aspergillusflavus)和寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)等产生的一类含有二氢呋喃环结构的次生代谢产物，常见的有B1、B2、G1、G2、M1五种，其中又以B1具有强烈致癌、致畸和致突变作用为甚。黄曲霉毒素的LD50(半数动物致死量)为0.249mg/kg，毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍；黄曲霉毒素中毒主要是含超标毒素的食物经摄入后被消化道吸收，在体内进行羟基化、去甲基化和环氧化等代谢过程，主要代谢产物大部分分布在肝脏，在肾脏、血液、肌肉和脂肪中也有少量分布，具有毒性或致癌、致突变作用。黄曲霉毒素B1的检测前提，是其高效特异性的提取。目前，国内专家关于食品当中黄曲霉毒素B1的检测做了大量卓有成效的工作，主要集中在利用高效液相色谱、酶联免疫吸附、亲和层析等技术实现对食用植物油、米面、酱油、花生、食源性动物组织等当中的黄曲霉毒素B1的快速检测。但是，对于郫县豆瓣当中黄曲霉毒素B1检测的前处理技术还很少报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有郫县豆瓣黄曲霉毒素B1检测前处理针对性不强的问题，通过郫县豆瓣的采样、预处理、黄曲霉毒素B1的提取，实现快速高通量的郫县豆瓣黄曲霉毒素B1的精确测定。一种郫县豆瓣黄曲霉毒素B1检测的前处理方法，包括以下步骤：步骤1：利用萃取分离的方法提取郫县豆瓣中溶解的黄曲霉毒素B1溶液；步骤2：提取步骤1中下层沉淀的黄曲霉毒素B1溶液；步骤3：将步骤1与步骤2提取的黄曲霉毒素B1溶液合并；步骤4：检测步骤3合并溶液中黄曲霉毒素B1含量。进一步地，如上所述的方法，所述步骤1包括：利用甲醇溶解郫县豆瓣中的黄曲霉毒素B1，利用正己烷溶解去除郫县豆瓣中的脂肪，利用三氯甲烷溶解去郫县豆瓣中的除蛋白质。进一步地，如上所述的方法，所述步骤1包括：1)将郫县豆瓣捣碎，随后加入甲醇溶液，再加入正己烷，然后在实验摇床中以250r/min的速度震荡5-10分钟；2)取一定量的步骤1)振荡后的溶液进行离心；3)离心后，取中间层加入三氯甲烷，在实验摇床中以250r/min的速度震荡5-10分钟；取下层三氯甲烷溶液，然后加入甲醇溶液复溶，最后加蒸馏水稀释待用取25g郫县豆瓣，在碾钵中充分捣碎，随后加入125ml甲醇溶液(60％，v/v)，再加入50ml正己烷，在实验摇床中剧烈震荡(250r/min)5-10分钟；随后5000-10000g离心15分钟；取中间层(甲醇层)置于分液漏斗中，随后加入100ml三氯甲烷，在实验摇床中剧烈震荡(250r/min)5-10分钟；取下层三氯甲烷约10ml，加入1mL60％甲醇溶液(60％，v/v)复溶，再加入4ml蒸馏水稀释待用。进一步地，如上所述的方法，所述步骤2包括：①将步骤1中离心后的下层沉淀按料液体积比1︰5加入甲醇溶液，在高压均质机中均质处理，均质压力50Mpa，保持15min；降温系统保持物料25℃，将均质后的样品取出离心15分钟；②将步骤①中的上清液旋转蒸发浓缩得到黄曲霉毒素B1浓缩液。进一步地，如上所述的方法，所述甲醇溶液的体积百分比浓度为60％。有益效果：本专利技术方法可以快速准确地测量郫县豆瓣中黄曲霉毒素B1的含量。而且方法步骤简单，容易操作。附图说明图1为本专利技术试验例中黄曲霉毒素B1标准曲线拟合图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术的技术方案如下：一种郫县豆瓣黄曲霉毒素B1检测的前处理方法，包括如下步骤：溶解的黄曲霉毒素B1的提取取25g郫县豆瓣，在碾钵中充分捣碎，随后加入125ml甲醇溶液(60％，v/v)，再加入50ml正己烷，在实验摇床中剧烈震荡(250r/min)5-10分钟；随后5000-10000g离心15分钟；取中间层(甲醇层)置于分液漏斗中，随后加入100ml三氯甲烷，在实验摇床中剧烈震荡(250r/min)5-10分钟；取下层三氯甲烷约10ml，加入1mL60％甲醇溶液(60％，v/v)复溶，再加入4ml蒸馏水稀释待用。下层沉淀中黄曲霉毒素B1的提取将前述离心后的下层沉淀约5-10g，按料液体积比1︰5加入甲醇溶液(60％，v/v)；在高压均质机中均质处理，均质压力50Mpa，保持15min，降温系统保持物料25℃(上海申鹿均质机有限公司，申鹿SRH100型)。将均质后的样品取出，5000-10000g离心15分钟，将上清液旋转蒸发浓缩至10ml。黄曲霉毒素含量检测将前述两种处理方式得到的黄曲霉毒素B1提取液可通过高效液相色谱或者酶联免疫吸附(ELISA)等不同方法进行检测，即可得到样品当中黄曲霉毒素B1的准确含量。本专利技术针对郫县豆瓣高盐含量(15-22％)、高蛋白含量、高辣椒红色素等特点，将溶解的黄曲霉毒素B1和非溶解状态的黄曲霉毒素B1进行并合并后通过高效液相色谱或者酶联免疫吸附(ELISA)等不同方法进行检测，可充分高效的实现郫县豆瓣中黄曲霉毒素B1的提取检测精度。试验例：其他方法与本专利技术方法检测郫县豆瓣当中黄曲霉毒素B1的差异方法一：基于酶联免疫吸附技术(ELISA)的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种郫县豆瓣黄曲霉毒素B1检测的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：利用萃取分离的方法提取郫县豆瓣中溶解的黄曲霉毒素B1溶液；步骤2：提取步骤1中下层沉淀的黄曲霉毒素B1溶液；步骤3：将步骤1与步骤2提取的黄曲霉毒素B1溶液合并；步骤4：检测步骤3合并溶液中黄曲霉毒素B1含量。

【技术特征摘要】
1.一种郫县豆瓣黄曲霉毒素B1检测的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：利用萃取分离的方法提取郫县豆瓣中溶解的黄曲霉毒素B1溶液；步骤2：提取步骤1中下层沉淀的黄曲霉毒素B1溶液；步骤3：将步骤1与步骤2提取的黄曲霉毒素B1溶液合并；步骤4：检测步骤3合并溶液中黄曲霉毒素B1含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1包括：利用甲醇溶解郫县豆瓣中的黄曲霉毒素B1，利用正己烷溶解去除郫县豆瓣中的脂肪，利用三氯甲烷溶解去郫县豆瓣中的除蛋白质。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤1包括：1)将郫县豆瓣捣碎，随后加入甲醇溶液，再加入正己烷，然后在实验摇床中以250r/min的速度震荡5-10分钟；2)取一定量的步骤1)振荡后的溶液进行离心；3)离心后，取中间层加入三氯甲烷，在实验摇床中以250r/min的速度震荡5-10分钟；取下层三氯甲烷溶液，然后加入甲醇溶液复溶，最...

【专利技术属性】
技术研发人员：张良，徐炜桢，李玉锋，王卫华，岳鹏，杨帆，杨国华，
申请(专利权)人：四川省丹丹郫县豆瓣集团股份有限公司，西华大学，
类型：发明
国别省市：四川,51