一种用于外泌体分离提取的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术提供了一种用于外泌体分离提取的试剂盒。该试剂盒包括盒体和盒盖，其特征在于，所述盒体内设置有沉淀溶液试剂瓶放置区、缓冲溶液试剂瓶放置区、微孔滤膜放置区、超滤离心管放置区。该试剂盒为外泌体的分离提取提供了一种合适的技术方案，无需进行超速离心，就可以获得经PEG富集、超滤纯化的外泌体，操作简便。

A kit for separation and extraction of exocrine

The utility model provides a kit for separation and extraction of external secreting bodies. The kit comprises a box body and a box cover, and is characterized by that the box body is provided with a precipitating solution reagent bottle placing area, a buffer solution reagent bottle placing area, a microporous filter membrane placing area, and an ultrafiltration centrifuge tube placing area. The kit provides an appropriate technical scheme for the separation and extraction of exocrine. Without exscentrifuge, it can get exudate enriched by PEG and ultrafiltration, and it is easy to operate.

【技术实现步骤摘要】
一种用于外泌体分离提取的试剂盒
本技术涉及一种用于外泌体分离提取的试剂盒，属于细胞生物学领域。
技术介绍
外泌体(exosome)是由细胞经过一系列调控过程而形成，并可分泌至胞外的分子直径为30-100nm的亚细胞双层膜囊泡，可以通过质膜受体直接激活受体细胞，也可以转运蛋白质、核酸甚至细胞器进入受体细胞内，从而在生理学和病理学上都发挥重要作用。目前常用的外泌体提取方法主要包括超速离心法、免疫磁珠法、超滤离心法、聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)沉淀法等。超高速离心机造价昂贵，对设备要求高，并且高速离心可能破坏外泌体的结构，从而降低其质量；免疫磁珠法获得的外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验；PEG沉淀法所得外泌体存在纯度和回收率低、杂蛋白较多等问题；超滤离心法简单高效，且不影响外泌体的生物活性，但其本身难以对外泌体进行富集。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本技术的目的是提供一种结构简单、操作方便的外泌体分离提取的试剂盒。为达到上述目的，本技术提供了一种用于外泌体分离提取的试剂盒，包括盒体和盒盖，其中，所述盒体内设置有沉淀溶液试剂瓶放置区、缓冲溶液试剂瓶放置区、微孔滤膜放置区、超滤离心管放置区。优选地，该试剂盒至少包含两个沉淀溶液试剂瓶放置区，用于放置第一沉淀溶液试剂瓶和第二沉淀溶液试剂瓶；所述第一沉淀溶液试剂瓶用于盛装高浓度PEG溶液，所述第二沉淀溶液试剂瓶用于盛装低浓度PEG溶液。所述高浓度PEG溶液的浓度可以为16％(质量体积浓度)。高浓度PEG溶液在使用时与经离心和过滤的细胞培养上清液等体积混合，用于沉淀和聚集外泌体。所述低浓度PEG溶液的浓度可以为5％(质量体积浓度)。低浓度PEG溶液用于重悬经高浓度PEG溶液提取的包含外泌体的沉淀，对其进行进一步纯化。所述PEG溶液采用的PEG为PEG6000。优选地，所述第一沉淀溶液试剂瓶和第二沉淀溶液试剂瓶的体积为100ml。优选地，该试剂盒至少包含一个缓冲溶液试剂瓶放置区，该缓冲溶液试剂瓶放置区设有盛装PBS溶液的缓冲溶液试剂瓶。优选地，所述缓冲溶液试剂瓶的体积为100ml。优选地，该试剂盒至少包含一个用于放置微孔膜的微孔滤膜放置区。所述微孔滤膜放置区用于放置微孔滤膜，所述微孔滤膜放置区可以放置10张以上的微孔滤膜，即所述微孔滤膜的数量至少为10张。优选地，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。优选地，该试剂盒包含一个超滤离心管放置区，该超滤离心管放置区包括至少10个用于放置超滤离心管的盛装孔。优选地，所述超滤离心管的体积为4ml。优选地，所述超滤离心管为截留分子量为100kD的超滤离心管。本技术中，PEG溶液对外泌体具有富集的作用，两种浓度的PEG溶液可对外泌体进行两次富集，提高外泌体密度；所述微孔滤膜可以过滤除去较大的细胞碎片等物质；所述离心超滤管可以除去粒径较小的物质；所述PBS溶液可用于重悬沉淀物质，并最终重悬外泌体。该试剂盒为外泌体的分离提取提供了一种方便的技术方案，无需进行超速离心，就可以获得经PEG富集、超滤纯化的外泌体，操作简便，提高外泌体密度和纯度。附图说明图1为实施例1中用于外泌体分离提取的试剂盒在开启状态下的盒体结构示意图。主要附图标号说明：1-盒体、2-高浓度PEG溶液瓶放置区、3-低浓度PEG溶液瓶放置区、4-PBS溶液瓶放置区、5-微孔滤膜放置区、6-超滤离心管放置区具体实施方式为了对本技术的技术特征、目的和有益效果有更清楚的理解，现参照说明书附图对本技术的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本技术的可实施范围的限定。实施例1本实施例提供了一种用于外泌体分离提取的试剂盒，其包括以下结构：参照图1，所述试剂盒包括盒体1、高浓度PEG溶液瓶放置区2、低浓度PEG溶液瓶放置区3、PBS溶液瓶放置区4、微孔滤膜放置区5、超滤离心管放置区6。在本实施例中，高浓度PEG溶液瓶放置区2用于放置盛装浓度为16％的PEG溶液的试剂瓶、低浓度PEG溶液瓶放置区3用于放置盛装浓度为5％的PEG溶液的试剂瓶、PBS溶液瓶放置区4用于放置盛装PBS溶液的试剂瓶、微孔滤膜放置区5用于放置10张微孔滤膜、超滤离心管放置区6用于放置10个超滤离心管。使用上述试剂盒进行外泌体分离提取的方法可以包括以下步骤：取细胞培养上清液，于4℃、500g离心5分钟，取上清；于4℃、2,000g离心30分钟，取上清；采用微孔滤膜放置区5上的微孔滤膜经过滤器过滤一次，取滤液，去除大蛋白、细胞碎片等；于4℃向滤液中加入等体积的高浓度PEG溶液瓶放置区2中的试剂瓶中的溶液，混匀，于4℃孵育过夜；孵育完成后，于4℃、3,000g离心1小时，收集沉淀；于4℃向上述沉淀中加入低浓度PEG溶液瓶放置区3中的试剂瓶中的溶液进行重悬，于4℃孵育过夜；孵育完成后，于4℃、3,000g离心1小时，收集沉淀；于4℃向上述沉淀中加入PBS溶液瓶放置区3中的试剂瓶中的溶液进行重悬，混合均匀后，并将其转移到超滤离心管放置区6上的超滤离心管中，于3,000g离心30分钟进行纯化，所得沉淀即为外泌体。于4℃向上述沉淀中加入PBS溶液瓶3中的溶液进行重悬，并于-80℃保存。所述试剂盒可以对至少10份上述样品进行处理，进行外泌体分离提取。应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开、附图和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变型和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于外泌体分离提取的试剂盒，包括盒体和盒盖，其特征在于，所述盒体内设置有沉淀溶液试剂瓶放置区、缓冲溶液试剂瓶放置区、微孔滤膜放置区、超滤离心管放置区；其中：该试剂盒至少包含两个沉淀溶液试剂瓶放置区，用于放置第一沉淀溶液试剂瓶和第二沉淀溶液试剂瓶；所述第一沉淀溶液试剂瓶用于盛装高浓度PEG溶液，所述第二沉淀溶液试剂瓶用于盛装低浓度PEG溶液；该试剂盒至少包含一个缓冲溶液试剂瓶放置区，该缓冲溶液试剂瓶放置区设有盛装PBS溶液的缓冲溶液试剂瓶；该试剂盒至少包含一个用于放置微孔膜的微孔滤膜放置区，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm，所述微孔滤膜的数量至少为10张；该试剂盒包含一个超滤离心管放置区，该超滤离心管放置区包括至少10个用于放置超滤离心管的盛装孔；所述超滤离心管的体积为4ml，所述超滤离心管为截留分子量为100kD的超滤离心管。

【技术特征摘要】
1.一种用于外泌体分离提取的试剂盒，包括盒体和盒盖，其特征在于，所述盒体内设置有沉淀溶液试剂瓶放置区、缓冲溶液试剂瓶放置区、微孔滤膜放置区、超滤离心管放置区；其中：该试剂盒至少包含两个沉淀溶液试剂瓶放置区，用于放置第一沉淀溶液试剂瓶和第二沉淀溶液试剂瓶；所述第一沉淀溶液试剂瓶用于盛装高浓度PEG溶液，所述第二沉淀溶液试剂瓶用于盛装低浓度PEG溶液；该试剂盒至少包含一个缓冲溶液试剂瓶放置区，该缓冲溶液试剂瓶放置区设有盛装PBS溶液的缓冲溶液试剂瓶；该试剂盒至少包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：周勇浩，王会霞，崔颜宏，姬新颖，
申请(专利权)人：周勇浩，王会霞，崔颜宏，姬新颖，
类型：新型
国别省市：北京,11