一种重组人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种重组入碱性成纤维细胞生长因子的制备方法。本发明专利技术利用遗传密码具有兼并性的原理，设计了大肠杆菌偏爱密码子，ＰＣＲ扩增的人ｂＦＧＦｃＤＮＡ片段与原核表达载体如ｐＢＶ２２０组装成高效表达质粒ｐＢｂＦＧＦ，转化大肠杆菌后用温度诱导ｂＦＧＦ基因表达，表达最达菌体总蛋白的１５％。工程菌经发酵扩增，破碎菌体上清采用肝素亲和层析和凝胶排阻层析二步法纯化产品，加保护剂后制成药用冻干制剂。该制剂可治疗急性心肌梗塞等心肌缺血性疾病，作为冠心病的治疗和保健药品。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种重组人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法，包括ＰＣＲ引物设计、扩增的基因、表达质粒的构建、表达产物的纯化工艺，其特征在于：（１）５′端ＰＣＲ引物及扩增ｃＤＮＡ５′端序列为：ＥｃｏＢＩＡＧ ＧＡＡＴＴＣ ＡＴＧ ＣＣＡ ＧＣＴ ＴＴＧ ＣＣＣ ＧＡＧ ＧＡＴ ＧＧＴ ＧＧＴ Ａ（２）上述ｂＦＧＦ ｃＤＮＡ与含有ＰＬ、ＰＢ启动子的原核表达载体ｐＢＶ２２０组装成高效表达质粒ｐＢｂＦＧＦ；（３）ｐＢｂＦＧＦ转化大肠杆菌，用温度诱导ｂＦＧＦ基因的表达，产物以可溶性 形式存在工程菌内；（４）通过发酵技术扩增工程菌，用Ｍ９作基础培养液，温度诱导同时补加酷蛋白水解物、葡萄糖等营养成分；（５）发酵后破碎菌体，收集上清采用肝素亲和层析和凝胶排阻层析二步法纯化产品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉林，
申请(专利权)人：北京白鹭园生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]